淮安市嬰幼兒食品腸桿菌檢測(cè)及耐藥性研究

杭 婧，宋呈文，金 華

（1.淮安市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇 淮安 223300；2.淮陰工學(xué)院生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，江蘇 淮安 223300）

腸桿菌科細(xì)菌是一大群形態(tài)、生化反應(yīng)結(jié)果互相接近的革蘭氏陰性桿菌。這類細(xì)菌多數(shù)有周身鞭毛、有動(dòng)力，生化反應(yīng)中能夠發(fā)酵葡萄糖，能夠還原硝酸鹽，氧化酶試驗(yàn)陰性（鄰單胞菌屬除外），觸媒試驗(yàn)陽性（痢疾志賀菌除外），需要氧氣生長(zhǎng)，部分在厭氧環(huán)境下仍可生長(zhǎng)良好，對(duì)周圍環(huán)境營(yíng)養(yǎng)要求普遍偏低，在普通營(yíng)養(yǎng)平板上生長(zhǎng)良好，在自然界中多種場(chǎng)所均可以生存。絕大部分腸桿菌科細(xì)菌寄居在活體生物的腸道內(nèi)，也可存在于水、土壤或腐敗的物質(zhì)上，多數(shù)為條件致病菌，少數(shù)為致病菌。與人類感染有關(guān)的細(xì)菌有腸桿菌屬、克雷伯菌屬、克羅諾桿菌屬、沙門菌屬和志賀菌屬等[1]。嬰幼兒一般指0～36 個(gè)月齡的孩子[2]，身體機(jī)能尚未發(fā)育完善，對(duì)外界及疾病抵抗力弱。所以檢測(cè)嬰幼兒食品中的腸桿菌具有重要意義。本文在市場(chǎng)隨機(jī)購買74 批嬰幼兒食品樣品，對(duì)其中檢出的腸桿菌科細(xì)菌進(jìn)行生化鑒定并進(jìn)行耐藥性分析，以了解淮安市嬰幼兒食品衛(wèi)生情況和菌群的耐藥情況，為淮安市市場(chǎng)嬰幼兒食品監(jiān)管提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品

在淮安市市售嬰幼兒食品中隨機(jī)購買樣品，抽樣地點(diǎn)主要在超市、大型連鎖母嬰用品店、個(gè)體戶母嬰店等，共采集74 批嬰幼兒食品樣品。樣品類型主要包括嬰幼兒奶粉、嬰幼兒餅干、溶豆、嬰幼兒肉松、營(yíng)養(yǎng)米粉、營(yíng)養(yǎng)米乳、嬰幼兒小面條等。產(chǎn)品品牌包括中國(guó)、法國(guó)、韓國(guó)、日本等，上述購買的試驗(yàn)樣品均為包裝食品且均在保質(zhì)期內(nèi)。

1.2 培養(yǎng)基與試劑

緩沖蛋白胨水BPW（批號(hào)：1115875）、胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基（批號(hào)：1114302）、阪崎腸桿菌顯色平板（批號(hào)：CRM006B）、大腸菌群大腸桿菌顯色培養(yǎng)基平板（批號(hào)：M0216Y）、氯化鈉（AR，批號(hào)：20210926）、血瓊脂平板（批號(hào)：M1864Y），均購于廣東環(huán)凱公司；革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定板（批號(hào)：2242024）、革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定/藥敏板（批號(hào)：448505）、藥敏接種培養(yǎng)液（批號(hào)：2174615）、接種培養(yǎng)液（批號(hào)：2203381）、藥敏指示劑（批號(hào)：2178523），均購于美國(guó)BD 公司。

1.3 儀器設(shè)備

潔凈工作臺(tái)（BCM-1600A，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（101-3，上海躍進(jìn)有限公司）；SPX-350 型生化培養(yǎng)箱；高壓蒸汽滅菌鍋（MLS-3781L-PC 型，松下）；均質(zhì)器（BagMixer 400CC，法國(guó)interscience）；全自動(dòng)微生物鑒定藥敏分析儀（PhoenixTM M50，美國(guó)BD）；生物顯微鏡（OLYMPUS，日本Olympus）；生物安全柜（BSC-1304IIA2，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；電子天平（PL6001，梅特勒公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 腸桿菌的分離和鑒定

因腸桿菌科無統(tǒng)一的方法檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，故參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.4—2016）[3]進(jìn)行腸桿菌鑒定試驗(yàn)。在生物安全柜內(nèi)無菌操作，稱取試驗(yàn)樣品至緩沖蛋白胨水稀釋培養(yǎng)液中，經(jīng)36 ℃培養(yǎng)24 h 后劃線于阪崎腸桿菌顯色平板、大腸菌群大腸桿菌培養(yǎng)基顯色平板分離單菌落，菌落經(jīng)純化后用接種環(huán)挑取單菌落至細(xì)菌鑒定培養(yǎng)液，用比濁儀把菌懸液濃度調(diào)整至0.5 麥?zhǔn)蠁挝痪簼舛群蟮谷腙幮澡b定板條，蓋上板條塞，及時(shí)放入細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行鑒定，最終鑒定可信值在90%以上為可信結(jié)果。

1.4.2 腸桿菌藥物耐藥試驗(yàn)

采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)的微量肉湯稀釋法對(duì)本文檢出的腸桿菌進(jìn)行耐藥試驗(yàn)，主要檢測(cè)樣品中檢出的腸桿菌對(duì)19 種藥物的最小抑菌濃度，依據(jù)臨床和實(shí)驗(yàn)室抗菌藥物敏感性測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)CLSIM100-S30-2020[4]進(jìn)行結(jié)果判讀。

2 結(jié)果與分析

2.1 腸桿菌定性檢測(cè)情況

74 批嬰幼兒食品中腸桿菌科菌種檢出4 批次，檢出率為5.4%。淮安市嬰幼兒食品中檢出腸桿菌的樣品信息以及淮安市嬰幼兒食品中腸桿菌生化反應(yīng)結(jié)果分別見表1 和表2。

表1 淮安市嬰幼兒食品中檢出腸桿菌的樣品信息表

表2 淮安市嬰幼兒食品中腸桿菌生化反應(yīng)表

2.2 腸桿菌耐藥試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

阿米卡星、慶大霉素、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林-他佐巴坦鈉、黏菌素、氯霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、四環(huán)素敏感率100%，對(duì)頭孢唑林、氨芐青霉素、氨芐青霉素-舒巴坦、阿莫西林克拉維酸鹽敏感率分別為50.0%、75.0%、50.0%、75.0%?；窗彩袐胗變菏称纺c桿菌最小抑菌濃度檢測(cè)結(jié)果見表3。

表3 淮安市嬰幼兒食品腸桿菌最小抑菌濃度檢測(cè)結(jié)果表

3 結(jié)論與討論

本文檢出3 株菌種均屬于腸桿菌科，阪崎腸桿菌原屬于腸桿菌屬，后來單獨(dú)分離出來為克羅諾桿菌屬。肺炎克雷伯桿菌和陰溝腸桿菌是人體腸道中的正常菌群，屬于條件致病菌，在身體機(jī)能下降時(shí)可發(fā)生某種疾病。阪崎腸桿菌（克羅諾桿菌屬）是嬰幼兒疾病的重要病原菌之一，可引起嬰幼兒腦部炎癥、腸炎、神經(jīng)系統(tǒng)病變等。此菌一旦入侵嬰幼兒腦部和腸段，致死率可高達(dá)50%[5-6]。

目前最新的《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 預(yù)包裝食品中致病菌限量》（GB 29921—2021）只對(duì)0～6 月齡嬰兒配方食品和特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品明確要求檢測(cè)阪崎腸桿菌。本文檢出攜帶腸桿菌的樣品均是適合6 月齡以上嬰幼兒食用，且主要集中在嬰幼兒谷物食品以及嬰幼兒小面條食品兩大類。所以除了對(duì)6 月齡以下的嬰幼兒食品有具體標(biāo)準(zhǔn)限度值外，對(duì)6 月齡以上的稍大嬰兒及幼兒食品也應(yīng)該引起相關(guān)部門的重視。

本文從19 種藥物的耐藥情況結(jié)果可以看出淮安市嬰幼兒食品中腸桿菌的耐藥情況確實(shí)存在。4 株檢出的腸桿菌中有3 株存在耐藥或中介的情況，甚至其中有一株陰溝腸桿菌是多重耐藥菌株，同時(shí)對(duì)4 種藥物耐藥。腸桿菌科耐藥機(jī)制主要是由于細(xì)菌產(chǎn)生染色體或質(zhì)粒介導(dǎo)的β-內(nèi)酰胺酶所引起的[7]。國(guó)外對(duì)于腸桿菌科細(xì)菌耐藥的嚴(yán)重性也有相關(guān)報(bào)道[8]。

本次所有檢出腸桿菌的樣品均為國(guó)內(nèi)廠家和品牌，其中還有人們?nèi)粘Ｉ钪卸炷茉數(shù)乃^的“優(yōu)質(zhì)母嬰品牌”，由此可見“優(yōu)質(zhì)品牌”也并非為“優(yōu)質(zhì)品質(zhì)”。這需要消費(fèi)者在購買嬰幼兒食品時(shí)更正此類消費(fèi)觀念，更需要市場(chǎng)加強(qiáng)監(jiān)管。