非洲豬瘟診斷要點與有效防控技術探討

非洲豬瘟是一種高發病率和高死亡率的一類動物疫病，我國于2018年8月發生第一起非洲豬瘟疫病，對生豬養殖業帶來重大沖擊，導致疫病發生期間養殖戶經濟損失巨大，豬肉及其制品市場供求失衡。當前在非洲豬瘟病毒防治領域尚無商品化疫苗和有效治療方案，為防范非洲豬瘟疫病的發生，要求養豬場必須做好日常防控措施，切斷非洲豬瘟傳染源，以保障養豬場安全生產。

一、非洲豬瘟簡要介紹

1、非洲豬瘟病原

非洲豬瘟病毒歸屬于非洲豬瘟科非洲豬瘟病毒屬，病毒粒子與痘病毒科的特性類似。病毒為20面體，呈對稱形態，直徑為175-215納米；病毒有囊膜，基因組為170-190kb，DNA為雙股線狀；豬感染非洲豬瘟病毒后，病毒會在多種細胞漿內復制，如單核巨噬細胞、網狀內皮細胞等，使病毒可存在于病豬血液、內臟、組織液以及排泄物內；根據實驗研究表明，將攜帶病毒的血液加熱到55℃后，持續30min，或者加熱到60℃后，持續10min，可徹底破壞病毒。采用消毒劑也可以消殺病毒。

2、非洲豬瘟傳染源

非洲豬瘟病毒只感染家豬和野豬，不會感染其他動物。非洲豬瘟病毒的傳染源為：

（1） 病豬

當養豬場內的豬感染病毒后，病豬的分泌物、體液和排泄物中都會攜帶大量病毒，病毒通過病豬的唾液、鼻涕、尿液、糞便、結膜滲出物、淚液、傷口流血等介質傳播。當健康豬接觸到病豬后，會被病豬攜帶的病毒快速傳染。

（2） 軟蜱

軟蜱是非洲豬瘟病毒的攜帶者和傳播者。如，攜帶病毒的鈍緣軟蜱叮咬健康豬后傳播病毒。

（3） 其他媒介

被非洲豬瘟病毒污染的飼料、器具、物品、運輸車輛等，都是病毒擴散與傳播的介質。當健康豬接觸到此類物品后，可能會感染非洲豬瘟。

3、非洲豬瘟流行病學

非洲豬瘟病毒最早發現于1921年，是一種時間較為久遠的病毒。該病毒具有急性傳染、熱性傳染和高密度接觸性傳染的特點，所有品種的豬都會感染此病毒，且死亡率為100%，被我國列為一類動物疫病。2018年，首次傳入我國的非洲豬瘟病毒為基金Ⅱ型病毒，跨徑傳入的途徑可能是生豬國際貿易或走私、國際運輸工具、國外餐廚剩余物、國際旅客攜帶的豬肉及其制品等途徑。

二、非洲豬瘟的診斷方法

1、臨床癥狀

豬只感染非洲豬瘟病毒后，潛伏期為4-19d，發病時體溫升高，持續4d左右發熱，死前48h體溫下降。病豬極度疲累，呼吸困難，脈搏跳動加快。根據病毒的毒力不同，其臨床癥狀也有所不同，主要包括以下四種類型：

（1） 最急性型

病豬感染強毒力的非洲豬瘟病毒，感染后突然死亡，在死亡之前無明顯臨床癥狀。

（2） 急性型

病豬感染強毒力的非洲豬瘟病毒，體溫升高至41℃以上，食欲減退，連續性咳嗽，鼻腔流出大量黏液，伴有嘔吐和腹瀉，出現癥狀后1-4d病豬死亡；仔豬發病后耳、鼻、唇部位以及腿部皮膚呈紅色，病豬出現抽搐等神經性癥狀，死亡率100%。

（3） 亞急性型

病豬感染中等毒力的非洲豬瘟病毒，病豬改變呼吸方式，四肢癱軟無力，血小板和白細胞減少，處于妊娠期的母豬流產率、死胎率高；病豬感染7-20d死亡，死亡率最高為70%；部分病豬可在21-28d康復，但是康復后一直攜帶病毒。

（4） 慢性型

病豬感染低毒力的非洲豬瘟病毒，發病時病豬的大腿內側、腹部、耳部出現皮膚紅斑、壞死，病豬康復后仍攜帶病毒。

2、病理變化

病豬血管、淋巴組織發生病變，脾內充血，呈紫黑色。胃底部充血，以淤血為主。淋巴結腫大充血，出現大理石花斑狀。肺水腫嚴重，胸膜、心內膜、膀胱、大腸等部位均有出血點；病豬呼吸系統病變嚴重，喉處充血或擴散性出血，在氣管前1/3的部位有瘀斑；慢性型病豬多發生纖維素性胸膜炎，肺部組織壞死。

3、實驗室診斷

非洲豬瘟的臨床癥狀類似于常見的藍耳病、敗血性沙門氏菌病、豬丹毒等傳染病的臨床癥狀，均具有出血性特點，很難通過眼觀病變確診病種。故此，需采用實驗室診斷技術，提高非洲豬瘟診斷的準確性。實驗室診斷技術主要包括病原學診斷與血清學診斷，其中病原學診斷分為病毒分離檢測和核酸檢測技術，血清學診斷分為抗原檢測和抗體檢測技術。檢測診斷技術要點如下：

（1） 病毒分離檢測

在生物安全實驗室內，采集豬血器官組織樣本，建立起非洲豬瘟ASFV敏感細胞系。在樣本中接種豬原代巨噬細胞，觀察巨噬細胞的變化，當出現附著玫瑰花環狀的紅細胞時，可判斷為陽性。此項診斷技術的周期較長，并且隨著非洲豬瘟毒株數量的增多，很多毒株不具備紅細胞吸附能力，影響檢測結果的準確性。

（2） 核酸檢測

①環介導恒溫擴增技術。該技術將非洲豬瘟病毒拓撲異構酶II基因作為靶點，可檢測出代表性的非洲豬瘟病毒分離株，驗證是否存在非洲豬瘟病毒與其他傳染病毒交叉反應，避免出現假陽性檢測結果。此項技術對檢測實驗室以及檢測設備的要求不高，適用于基層地區非洲豬瘟診斷。②聚合酶鏈反應技術。這是一種簡單快速、檢出率高的檢測技術，可用于非洲豬瘟現場診斷，對標本純度要求高。在檢測過程中，采用基因組vp72作為引物，可檢測出不同的非洲豬瘟病毒基因型分離株。③微滴數字聚合酶鏈反應技術。該技術可定向分析核酸分子，最低檢測限為0.36拷貝，檢測靈敏度高于聚合酶鏈反應技術。④重組酶聚合酶擴增技術。在恒定溫度條件下可進行試驗，樣本檢測20min內完成，在檢測過程中避免出現核酸污染問題，要求檢測人員認真操作，可將該技術應用到非洲豬瘟現場檢測診斷中。

（3） 抗原檢測

①熒光抗體技術。該檢測技術適用于急性型非洲豬瘟檢測，具有檢測速度快、敏感性高、檢出率高的特點。在檢測中，采用丙酮固定樣本，持續10min，加入異硫氰酸熒光素，用顯微鏡觀察細胞漿內是否存在熒光，若存在則可證明樣本中含有非洲豬瘟病毒毒株。該技術對亞急性型和慢性型的檢出率較低，可能會出現假陰性檢測結果。②側向流動免疫色譜分析技術。該技術可用于非洲豬瘟現場診斷，利用vp72蛋白的單抗進行側向流動免疫色譜分析，最低檢測限為104PFU/mL。或者，利用vp72蛋白進行雙重側向流動免疫色譜分析，檢測出非洲豬瘟病毒抗體。

（4） 抗體檢測

①膠體金快速免疫層析法。采用p54抗體檢測膠體金免疫層析試紙檢測非洲豬瘟病毒，該試紙不會與豬其他病毒抗體產生反應，可從相似病癥的傳染病中準確診斷出非洲豬瘟。②酶聯免疫吸附試驗。采用p73、p72、p84等非洲豬瘟病毒抗原蛋白進行檢測，提高檢測的靈敏度和特異性，此檢測方法適用于低等毒力和中等毒力檢測，不適用于高等毒力檢測。在運用酶聯免疫吸附試驗檢測技術時，需配合使用其他診斷方法，以保證診斷結果的準確性。③間接熒光抗體試驗。用熒光標記的二抗與抗原抗體復合物特異結合，觀察試驗結果，發現熒光即確診為陽性。④免疫印跡檢測。該技術屬于免疫生化技術，能夠檢測出非洲豬瘟病毒的弱陽性樣本。

三、非洲豬瘟的防控技術

1、科學建設養豬場

（1）科學選址

養豬場選址要根據防疫法的相關要求，選在地勢高、平坦、遠離生活飲用水源的地方建設養豬場，要求養豬場處于居民區的下風向，避免對周圍居民的生活環境造成污染。

（2） 豬場布局

①養豬場的周圍建設圍墻，在圍墻外側設置隔離設施，用于隔離養豬場與外界環境，減少外界環境傳播病毒的可能性。②養豬場的入口處建設密閉式大門，大門旁邊設門崗，安排值班人員，加強人員進出管理。③在門崗處建設消毒間，對進入養殖場的車輛和物資進行消毒，工作人員進入養豬場時需更換鞋子和工作服。④養豬場內合理安排生產區與生活區，在兩個區域之間設置隔離設施。其中，生產區要根據豬只種類、豬群生長階段建設不同規格、不同功能的豬舍。

2、加強飼養管理

（1）確定生產模式

①養豬場要盡量采用全進全出的生產模式，減少混群次數、轉群次數，尤其在育肥豬出欄后要做好空欄消毒，空置豬舍7d后才能繼續進入仔豬飼養。②規模化養豬場采用自繁自養生產模式，切斷外來種豬攜帶非洲豬瘟病毒的傳染源。如果養殖場必須引入外來豬苗，則要提前采取引種檢測和隔離措施，確保引種無動物疫病，單獨隔離7d后才能混群飼養。

（2）改善飼養條件

①養豬場要保持豬舍清潔、溫濕度適宜、通風良好，為豬提供水質檢測達標的飲水。在炎熱夏季，采取降溫除濕措施，減少豬的應激反應，提高豬的抵抗力。②科學搭配飼料，要求飼料營養均衡，在飼料中添加適量的維生素。不允許向豬投喂發霉變質的飼料，飼料投喂時要避開高溫時間段。經常檢查飼料存放地的衛生情況，抽樣檢測飼料中含有的霉菌霉素是否超標，在飼料存放地放置生石灰，用于降低倉庫內的濕度。飼料中不得摻入餐廚剩余物，避免引入外來傳染源。③在豬舍內安裝滅蟲燈、粘蠅貼等，定期噴施殺蜱藥物，防止蜱蟲傳染病毒。

（3） 規范處理污物

養豬場要清理干凈豬的排泄物，尤其要重點處理病豬排泄物和分泌物，采用生物發酵、焚燒等處理方式消滅傳染源。在養豬場出現死豬時，要及時轉運死豬，對轉運道路進行消毒，集中處理死豬舍內的固體廢棄物，交由第三方進行無害化處理工藝。

3、加強養殖場進出管理

（1）人員進出管理

①養豬場禁止非工作人員進入場內，加強對外來人員進入場內的管控，在外來人員必須進入場內時，要做好登記、消毒工作。②養豬場工作人員在進入養豬場時，要更換已消毒的工作鞋和衣服，洗手消毒，不允許攜帶與工作無關的物品進入場內。在出場時，更換下鞋和衣服，不允許將工作衣物穿出場外。

（2） 車輛管理

①運輸車停放在指定區域進行消毒，仔細消毒車輪和車廂，消毒后停留30min再進入場內。如果運輸的是飼料，則要在卸料后對飼料表面消毒。②采用專門的運輸車運輸死豬和豬糞，不允許運輸車接觸到其他車輛，在距離養豬場不小于100m的地方交接死豬。運輸車運輸后要及時清洗消毒。③運輸車消毒流程為：利用高壓水沖洗輪胎和車身，去除表面污染物；使用清洗劑清理掉車體上的有機物；向車體噴灑消毒液，自然干燥。

4、定期清潔與消毒

（1）環境消毒

養豬場內工作人員每日清理豬舍內產生的垃圾和糞便，清理散落的飼料，保持豬舍內衛生。定期消毒豬舍環境，殺滅各種病毒。如，豬舍每天至少消毒1次，辦公區每周消毒2次。消毒劑選用如下：生產線道路消毒采用3%氫氧化鈉、15%生石灰或400mg/L含氯消毒劑。車輛消毒采用0.2%酚類消毒劑、0.2%過氧乙酸消毒劑或0.3%含氯消毒劑。門口消毒池采用3%氫氧化鈉。豬舍內地面、墻體、圍欄消毒采用0.2%過氧乙酸或300mg/L含氯消毒劑。環境消毒采用0.2%次氯酸。飲水消毒采用含氯消毒劑等。

（2）物資消毒

①獸藥消毒。購買獸藥后，檢查獸藥外包裝袋是否完好，送到消毒中心對獸藥進行消毒處理，消毒劑采用多硫酸氫鉀。在放入生活區之前，對獸藥進行臭氧熏蒸。獸藥以小包裝形式保存，待使用時再拆分小包裝。②疫苗消毒。從正規途徑購買疫苗，使用專用箱存儲疫苗，疫苗運至養豬場后，要對外包裝噴灑酒精消毒，之后再存放到指定區域。在疫苗使用前再次消毒。③食品。統一采購食品，不允許購入豬、牛、羊肉及其制品，對采購的食品進行消毒。

5、科學免疫

監測和評估養豬場內群豬的免疫抗體水平，每天巡視檢查豬只的健康狀況，如果發現異常情況則要立即采取隔離措施，做好全面消殺。我國尚未批準上市非洲豬瘟商品化疫苗，故此養豬場不能盲目購入走私苗、試驗苗進行接種，以免產生不良后果。養豬場可以定期接種其他常見傳染病疫苗，接種時保證一豬一個針頭，不允許重復使用針頭。按照規范程序接種疫苗，包括高致病性藍耳病疫苗、豬肺疫疫苗、豬細小病毒病疫苗、豬丹毒疫苗、亞洲豬瘟疫苗、豬偽狂犬病疫苗等，以提高豬的機體抵抗力。

6、加強疫病排查處置

（1）監測與排查

養殖場工作人員要每天觀察豬只健康情況，建立疫病防控日志，如果發現非洲豬瘟疫病，則要第一時間上報到有關部門處置，封閉疫病區域，避免病毒擴散。養殖場要準備好應急物資，當發現疑似非洲豬瘟疫病時要求全員穿上防護服，全面消殺場內環境，對病死豬進行無害化處理。

（2）疫病確診處置

①當養豬場確認發生非洲豬瘟后，要對場內生豬進行撲殺，撲殺方法為電擊法，防止豬只血液流淌造成環境污染。②全面清理舍內的飼料、糞便、墊料、垃圾，裝入袋中集中處理。檢查場內外的縫隙、洞穴等隱蔽處，用氰戊菊酯溶液消殺隱蔽處，同時消滅老鼠和蒼蠅，切斷傳播源。③消毒浸泡工作人員的衣、帽、鞋，采用適當的消毒液長時間浸泡消毒，集中焚燒處理工作服。④追溯調查從養殖場輸出的物品、人員，并對疫區周圍的養殖場進行采樣檢測，實時監測分析其他養殖場感染非洲豬瘟病毒的風險。

（3） 疫區解控條件

當疫區撲殺全部生豬且進行消毒處理后，經過42d不再發生新的確診病豬，可引入豬只繼續飼養14d，如果這批豬未發生非洲豬瘟，則可以上報到上級獸醫主管部門解控養豬場。養豬場解除封鎖后，持續監測周圍環境，并定期對豬只進行病原學和血清學檢測，以確保不會再發生非洲豬瘟。

綜上所述，非洲豬瘟是一種威脅養豬業持續發展的重大疫病，養豬場要提前做好非洲豬瘟防控工作，掌握非洲豬瘟病豬的臨床癥狀，及時向獸醫站等有關部門上報監測情況。養豬場要構建起完善、規范的飼養管理工作機制，定期做好消毒工作，保持養豬場衛生清潔。在非洲豬瘟診斷中，要科學采用實驗室診斷技術做出準確的診斷結果，要求養豬場根據非洲豬瘟診斷結果及時采取病豬無害化處理和徹底消殺處置措施，方可避免疫區養豬場向周邊其他養豬場擴散疫病。

（作者單位：152400黑龍江省慶安縣動物疫病預防與控制中心）