牛巴氏桿菌病的診斷與防治措施

摘 要：牛巴氏桿菌病是由革蘭氏陰性的多殺性巴氏桿菌引發(fā)的一種急性、熱性、傳染性疾病，也被稱為牛出血性敗血癥。牛只患病后不僅生長發(fā)育遲緩，嚴重時甚至會死亡，威脅養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展，因此，掌握此病的診斷方法與防治措施至關重要。在闡述牛巴氏桿菌病流行特點及常用的診斷方法的基礎上，總結該病的中、西醫(yī)治療方案，并提出嚴格消毒、接種疫苗、科學飼喂及建立應急處置機制等預防措施，為廣大養(yǎng)殖戶提供參考。

關鍵詞：牛巴氏桿菌病；診斷方法；治療方案；預防措施

中圖分類號：S858.23 文獻標志碼：B 文章編號：1674-7909（2023）12-107-4

0 引言

2021年，我國豬、牛、羊存欄量分別為44 922.42萬、9 817.25萬、31 969.32萬頭，肉產量分別為5 295.93萬、697.51萬、514.08萬t，是名副其實的畜牧養(yǎng)殖大國［1］。但在養(yǎng)殖過程中，畜禽難免因受到各種疫病的影響而患病，從而降低養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖效益。例如，在養(yǎng)牛業(yè)中，牛巴氏桿菌病是發(fā)病率較高、殺傷力較強、傳播速度較快、患病后癥狀較為復雜的一種傳染性疾病，常給養(yǎng)殖戶帶來嚴重的經(jīng)濟損失，是養(yǎng)殖場（戶）需要重點防控的疫病之一。因此，養(yǎng)殖戶必須要了解牛巴氏桿菌病的診斷方法，在準確診斷的基礎上，因地制宜地采取相應治療措施，并通過加強日常管理等措施降低該病的發(fā)生概率。

1 牛巴氏桿菌病流行特點

1.1 病原菌

牛巴氏桿菌病的病原菌為革蘭氏陰性的多殺性巴氏桿菌，呈兩端鈍圓的橢圓形，自身無運動功能且不會形成芽孢；涂片并經(jīng)過瑞氏染色后發(fā)現(xiàn)，其兩極呈現(xiàn)濃染狀態(tài)。多殺性巴氏桿菌對環(huán)境的耐受性較差。當其處于干燥環(huán)境中時，只能存活2～3 d；當存在于血液、糞污中時，可存活7 d；當存在于動物腐敗的尸體中時，可存活1～6個月，經(jīng)過陽光直接照射后會死亡。此外，使用常規(guī)消毒液即可殺滅此病原菌，如3%甲酚皂溶液或2%氫氧化鈉可直接殺死該病原體。

1.2 流行特點

該病一般呈散發(fā)或者地方性流行，雖然一年四季均可發(fā)生，但在悶熱多雨的季節(jié)發(fā)病率更高。水牛、黃牛、牦牛等均可感染牛巴氏桿菌病，且不受年齡、性別影響，其中犢牛和架子牛患病率更高。雞、鴨、羊等動物也會患上該病。該病在同種動物之間能夠相互傳染，在不同動物之間不易相互傳染。該病可通過消化道、呼吸道、皮膚傷口等進行傳播和擴散，但最主要的是通過飛沫經(jīng)呼吸道進行傳播。

1.3 發(fā)病原因

導致牛只患牛巴氏桿菌病的原因較多，主要分為3類。一是牛只自身機體發(fā)生變化。當牛只自身的內環(huán)境發(fā)生巨大變化時，會導致其抵抗力和免疫力降低，給多殺性巴氏桿菌提供入侵機會，從而導致牛只感染該病。二是外界環(huán)境發(fā)生較大變化。例如，當四季交替、溫度變化較大時，牛只受到強烈的外部刺激，體溫調節(jié)能力變差，加之養(yǎng)殖戶未及時做好保溫或降暑工作，會導致多殺性巴氏桿菌迅速繁殖而最終導致牛只感染該病。三是飼養(yǎng)管理不當。在牛只飼養(yǎng)過程中，養(yǎng)殖戶未采用科學的飼養(yǎng)管理方式，如牛只生存環(huán)境擁擠、潮濕、通風不良，提供的飼料種類單一、不能滿足牛只生長發(fā)育的需要，突然更換飼料，飼喂發(fā)霉、變質、冰凍的劣質飼料，飼養(yǎng)密度過大，未提供充足的運動空間和運動時間等，均會導致牛巴氏桿菌病的暴發(fā)［2］。

2 牛巴氏桿菌病診斷方法

對于牛巴氏桿菌病，養(yǎng)殖戶可以采用臨床診斷、病理解剖診斷、實驗室診斷等方式進行診斷。

2.1 臨床診斷

根據(jù)牛只患病后表現(xiàn)的不同，可將牛巴氏桿菌病分為敗血病型、水腫病型及肺炎型3種。

2.1.1 敗血病型。患敗血病型牛巴氏桿菌病的牛只，初期未表現(xiàn)出異常，但從出現(xiàn)異常到死亡僅需要1～2 d。患病牛只表現(xiàn)為體溫高達42 ℃，先便秘后腹瀉，糞便中含有黏液和血液且散發(fā)惡臭味，最終牛只衰竭而亡。

2.1.2 水腫病型。患該類型疾病的牛只癥狀可持續(xù)2～3 d，主要表現(xiàn)為呼吸困難、倒地后不能站立、頭頸部水腫等。隨著病情的發(fā)展，牛只胸前部位和下腹部位有彌散性炎癥出現(xiàn)，用手觸摸時能夠感受到明顯的發(fā)熱、堅硬。

2.1.3 肺炎型。該類型的牛巴氏桿菌病最為常見，病程較長，可持續(xù)3～14 d。患病牛只表現(xiàn)出典型的急性纖維素性胸膜肺炎的癥狀，即呼吸困難、連續(xù)咳嗽、流膿性鼻液、頭頸前伸、明顯痛感。一般病牛14 d內就會死亡，未死亡的則會轉變?yōu)槁苑窝祝〕碳s1個月［3］。

2.2 病理解剖診斷

對死亡的牛只進行解剖，可以觀察到牛只胃腸道黏膜充血，肝臟、脾臟上存在明顯的出血點，部分牛只腹腔中存在大量的淡黃色液體。當患病牛死于肺炎型的巴氏桿菌病時，可以觀察到牛只胸腔中存在漿液性、纖維素性的滲出液和血液，一層纖維素性薄膜覆蓋在胸膜上，肺部出現(xiàn)壞死；當患病牛死于敗血型的巴氏桿菌病時，可以發(fā)現(xiàn)牛只淋巴結明顯腫脹、充血，內臟器官出血；當患病牛死于水腫型的巴氏桿菌病時，可以觀察到牛只尸僵不全、有黃綠色的液體從鼻中流出，在牛只下頜、喉嚨部能發(fā)現(xiàn)黃色的膠樣物體浸潤，胸膜處有明顯的出血［4］。

2.3 實驗室診斷

2.3.1 細菌學診斷。第一，在無菌條件下采集患病牛只的血液、肝臟、脾臟等病變組織并進行涂片、革蘭氏染色等，在顯微鏡下觀察，可以看到數(shù)量較多的革蘭氏陰性的球桿狀細菌。第二，將采集的病料接種在5%血清肉湯中，并在37 ℃條件下培養(yǎng)24 h，之后再將其轉移接種至血瓊脂培養(yǎng)基上，在37 ℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)24 h；將培養(yǎng)48 h后得到的菌落挑選出來并在血瓊脂培養(yǎng)基上觀察，若觀察到呈圓形、表面光滑濕潤、顏色為灰白色的半透明菌落，且未出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，即可判定該病原菌為多殺性巴氏桿菌［5］。

2.3.2 分子生物學診斷。

2.3.2.1 SYBR Green Ⅰ染料法實時熒光定量PCR（Real-time Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction，qPCR）。該技術將熒光檢測與常規(guī)的PCR技術相結合，既可以通過熒光信號判斷反應結果，又可以避免單一采用PCR技術可能存在的假陽性結果及使用溴化乙錠染料造成的環(huán)境污染。該技術操作步驟如下。第一步，獲得多殺性巴氏桿菌的分離株。根據(jù)GenBank公布的基因保守序列設計并合成引物。第二步，制備DNA模板，即將獲得的菌落在液體培養(yǎng)基37 ℃條件下震蕩培養(yǎng)18～24 h，并利用細菌基因組DNA提取試劑盒抽提模板DNA。第三步，使用已經(jīng)合成的引物、提取的DNA模板進行PCR擴增。第四步，制備陽性質粒的標準品。將獲得的目的基因片段與載體連接構建重組質粒，經(jīng)過克隆之后取少量的質粒標準品計算出標準品的拷貝數(shù)并在稀釋后使用。第五步，在最佳反應條件下建立實時熒光定量PCR體系，繪制標準曲線，同時設置陰性對照。第六步，將所獲得的樣品進行檢測［6］。

2.3.2.2 TaqMan探針法實時熒光定量PCR。此技術的原理是在PCR擴增中加入一個具有特異性的熒光探針，熒光探針的一端為報告基團，另一端為淬滅基團，當熒光探針完整地結合在DNA單鏈上時，淬滅基團會將報告基團發(fā)射的熒光信號吸收，檢測不到熒光信號。在進行PCR擴增時，TaqDNA聚合酶的5’-3’核酸外切酶活性將探針5’端連接的報告熒光基團切割下來，使得報告基團和淬滅基團分離，從而發(fā)出熒光。切割的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比。因此，通過檢測PCR反應體系中的熒光強度，可以達到監(jiān)測PCR產物擴增量的目的。此診斷方式既克服了聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）特異性弱、敏感性低、檢測周期長的缺點，又具備了高通量、操作簡單、實時性高的優(yōu)點。該技術的操作步驟如下。第一步，獲得菌株和臨床樣品。第二步，使用GenBank數(shù)據(jù)庫查找多殺性巴氏桿菌菌株中基因序列中的保守區(qū)，并利用Oligo7.0軟件設計具有特異性的引物和探針。第三步，制備重組質粒的標準品。根據(jù)細菌基因組提取試劑盒說明書提取多殺性巴氏桿菌基因組DNA，利用合成的引物擴增目的片段，純化PCR產物并克隆至載體中，從而構建出重組質粒的標準品，利用紫外分光光度計測定重組質粒的濃度。計算拷貝數(shù)，所用公式為陽性質粒拷貝數(shù)=（質粒濃度×10-9×稀釋倍數(shù)×6.02×1023）/（600道爾頓/堿基×堿基數(shù)）。第四步，在最佳反應條件下建立標準曲線，同時設置陰性對照。第五步，對臨床樣品進行檢測［7］。

3 牛巴氏桿菌病治療方案

適用于牛巴氏桿菌病的治療方案較多，主要分為西藥治療、中藥治療和中西藥結合治療3類。

3.1 西藥治療

①將地塞米松20 mg、10支青霉素（每支劑量為160萬IU）、0.9%生理鹽水50 mL充分混合均勻后，對患病牛只進行肌內注射，每天2次，連用3 d。

②將10支青霉素（每支劑量為160萬IU）、鏈霉素100萬IU、10%安鈉咖2 g、100 mL生理鹽水充分混勻后，對患病牛只進行肌內注射，每天2次，連用3 d。當患病牛只伴隨心率過快時，將乙酰毛花苷4 mg和生理鹽水10 mL混合均勻后對其進行肌內注射，每天1次。當患病牛只伴隨咽喉水腫的情況時，按照每千克體質量使用呋塞米注射液0.1 mL對其進行肌內注射，每天1次［4］。

③根據(jù)牛只體質量，按照每千克體質量使用3萬IU卡那霉素和生理鹽水50 mL對患病牛只進行肌內注射，每天2次，連用5 d即可獲得較好的治療效果。

④將頭孢噻呋鈉3 g、地塞米松注射液50 mL、維生素C注射液50 mL、安鈉咖注射液50 mL混合均勻后，對患病牛只進行靜脈注射治療，每天2次，連用5 d。此方案適合治療病情較為嚴重且伴隨發(fā)燒、呼吸困難的患病牛只［8］。

⑤將40%烏洛托品80 mL、0.9%氯化鈉注射液500 mL、10%維生素C注射液40 mL、10%磺胺嘧啶鈉200 mL混合后，采用靜脈滴注的方式給藥，每天1次，連用3 d即可。此方案適合治療病情較為嚴重的牛只。

⑥將5%葡萄糖注射液500 mL、0.5%氫化可的松500 mg、40%烏洛托品80 mL、青霉素鈉800萬IU混合均勻后，對患病牛只進行靜脈滴注，每天1次，連用3 d。若患病牛只伴有呼吸障礙的癥狀，則同時使用氨茶堿進行靜脈滴注。

3.2 中藥治療

①稱取桔梗、金銀花、連翹、射干、天花粉及山豆根各60 g，黃連、黃芩、梔子、馬勃及茵陳各50 g，牛蒡子30 g，加入適當清水進行煎煮，然后去除藥渣，等冷卻至室溫后對患病牛只進行灌服，每天1次，連用5 d。治療牛巴氏桿菌病的原則是抗菌消炎、健胃消食。其中，射干具有抗毒殺菌、解熱止痛等功效，天花粉適用于熱病煩渴、肺熱燥咳、內熱消渴、瘡瘍腫毒，山豆根、連翹兩味中藥具有清利濕熱、通淋止痛等功效，金銀花、黃連具有清熱解毒、抗炎、補虛療風等功效，桔梗具有瀉熱生津、潤肺清心等功效，牛蒡子、馬勃具有清熱解毒、瀉火等功效，黃芩具有去濕熱、瀉火的功效，茵陳具有清利濕熱、利膽退黃的功效，梔子具有鎮(zhèn)靜止血、保肝利膽、消腫的功效。

②稱取生石膏110 g，魚腥草60 g，板藍根、金銀花、黃芩及杏仁各45 g，荊芥和連翹各40 g，知母35 g，甘草30 g，麻黃20 g，加入適量清水進行煎煮，煎煮后去除藥渣，等冷卻至室溫后等分為2份，對患病牛只早晚各灌服1次，連用5 d即可［8］。其中，金銀花具有清熱解毒、抗炎的功效，黃芩具有祛濕熱、瀉火的功效，生石膏具有清熱瀉火、除煩止渴、收斂生肌等功效，魚腥草具有清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋的功效，板藍根具有清熱解毒、瀉火等功效，杏仁具有降氣、祛痰止咳、平喘潤腸等功效，荊芥具有祛風解表的功效，連翹具有清熱解毒、散結消腫的功效，知母具有滋陰降火、潤燥滑腸的功效，甘草具有補脾益氣、祛痰止咳、緩急止痛、調和諸藥的功效，麻黃具有發(fā)汗散寒、宣肺平喘、利水消腫的功效。

3.3 中西藥結合治療

先用西藥對患病牛只進行治療。按照每千克體質量使用10%磺胺嘧啶鈉0.03～0.05 g+10%葡萄糖溶液1 000 mL，對患病牛進行靜脈注射，每天2次，連用3 d，用藥4 h后使用青霉素800～1 600萬IU對牛只進行肌內注射，每天2次，連用3 d。而后用中藥進行治療，藥方如下。取黨參、黃芩、當歸及白術各60 g，升麻、柴胡、陳皮及甘草各40 g；將上述8味中藥混合后加水進行煎煮，將藥液等分為3份對患病牛只進行灌服，連用3～8 d，根據(jù)牛只病情適當調整。對于肺炎型患病牛只，可在上述中藥配方的基礎上加入半夏、桔梗、板藍根、貝母及葶藶子各30 g，杏仁20 g；對于敗血型患病牛只，可在上述配方的基礎上加入龍膽草、炒地榆、黃檗、黃連及黃芩各40 g，生地、丹皮、赤芍各30 g［9］。

或先用巴氏桿菌抗血清80 mL對患病牛只以皮下注射方式進行一次性給藥，而后用具有強心補液效果的中藥制劑進行輔助治療，藥方如下。取連翹、射干、山豆根及天花粉各60 g，梔子、茵陳、馬勃、黃芩、桔梗、金銀花及黃連各50 g，牛蒡子30 g；將上述12味中藥加水進行煎煮并將藥渣去除，等冷卻至室溫后對患病牛進行一次性灌服，每天1次，連用3 d。西藥與中藥配合使用，可以達到標本兼治的效果［4］。

4 牛巴氏桿菌病預防措施

4.1 嚴格消毒

第一，養(yǎng)殖戶要對牛只圈舍進行嚴格消毒，每隔15 d就要對圈舍的屋頂、墻壁、走廊等進行消毒，尤其要注意水槽、食槽周邊死角位置的消毒。對于飼養(yǎng)過程中所使用的用具，如盆、鐵鍬、料桶等，均要按照每7 d一次的頻率進行消毒。為避免病原菌產生耐藥性，養(yǎng)殖戶應交替使用多種消毒劑（如新潔爾滅、過氧化氫、次氯酸鈉等）、更換消毒方式（熏蒸、噴灑等）及消毒頻次（每30 d一次、每15 d一次或者每7 d一次），以保證達到較好的消毒效果。第二，外來車輛或者人員進入養(yǎng)殖區(qū)前，要通過門口設置的消毒池、消毒室進行消毒。第三，養(yǎng)殖戶要及時清除圈舍周邊的雜草、積水、垃圾等，避免其堆積發(fā)酵，同時避免其滋生蚊蠅等造成疫病傳播。

4.2 接種疫苗

接種疫苗是預防多種疾病最簡單、最有效的措施之一。因此，養(yǎng)殖戶要充分認識到疫苗接種的重要性和必要性，并根據(jù)地區(qū)、場區(qū)牛巴氏桿菌病發(fā)生的特點，因地制宜地制定完善、可行的疫苗接種制度。目前，預防多殺性巴氏桿菌的疫苗包括二價滅活疫苗（A型+B型）、減毒活疫苗（B型）、亞單位疫苗（只能對同種血清型的菌株起到預防作用）及DNA疫苗（4代疫苗）。養(yǎng)殖場較為常用的是多殺性巴氏桿菌滅活疫苗，于每年春、秋季節(jié)各接種1次；根據(jù)牛只的體質量，100 kg以下的牛只按照4 mL的劑量進行接種，100 kg以上的牛只按照6 mL的劑量進行接種；接種后第3周，牛只即可產生相關抗體從而獲得免疫力。需要注意的是，為了保證疫苗的效力，在接種疫苗前2周及接種后3周內禁止使用抗生素類藥物；對于患病、較為瘦弱、處于妊娠階段的牛只需要延遲接種，等其情況改善之后再進行接種；如果牛只在接種疫苗后出現(xiàn)了過敏反應，需要及時注射腎上腺素進行急救。

4.3 科學飼喂

第一，保證飼料的質量。養(yǎng)殖戶要從有資質的大廠家購入飼料，并檢查每批購入的飼料霉菌毒素等指標是否超量，檢查常規(guī)營養(yǎng)成分是否符合相關標準，嚴禁飼喂發(fā)霉、變質、冰凍的劣質飼料。第二，飼料要滿足牛只生長的營養(yǎng)需求。養(yǎng)殖戶應根據(jù)牛只各生長階段的營養(yǎng)需要、生產目的等配制營養(yǎng)全面、適口性良好的全價飼料，保證牛只能夠獲得足夠的免疫力和抵抗力，從而減少疾病的發(fā)生。第三，在疫病高發(fā)的季節(jié)，養(yǎng)殖戶可以在飼料中添加益生菌（乳酸桿菌、枯草芽孢桿菌、雙歧桿菌等）、中草藥制劑（蒲公英、黃芪、枸杞等）、助消化的藥物（瞿麥散、山楂）等，預防各種疾病的發(fā)生。

4.4 建立應急處置機制

雖然政府相關部門和養(yǎng)殖戶制定了較為完善的疫病防控方案，但還有存在突發(fā)情況的可能，因此有必要建立應急處置機制。第一，各地相關部門要對當?shù)匾卟“l(fā)生情況進行科學分析，根據(jù)以往疫病發(fā)生的類型、流行特點，結合專家的綜合意見，構建風險評估模型。第二，各地相關部門要成立突發(fā)疫病應急指揮中心，制訂完善的應急事件處理方案，準備充足的藥物等物資，并針對相關工作人員定期開展培訓，為科學有序應對突發(fā)疫病打下堅實的基礎。

參考文獻：

［1］中國經(jīng)濟網(wǎng).糧食產量再創(chuàng)新高，畜牧業(yè)生產穩(wěn)定增長［EB/OL］.（2022-01-18）［2023-05-06］.http：//www.stats.gov.cn/sj/sjjd/202302/ t20230202_1896581.html.

［2］譚小維.牛巴氏桿菌病的診斷與防治措施［J］.中國畜牧業(yè)，2023（1）：101-102.

［3］巴桑普尺.分析牛巴氏桿菌病預防和治療措施［J］.畜禽業(yè)，2022（7）：101-103.

［4］李等奎.牛巴氏桿菌病的防治措施［J］.特種經(jīng)濟動植物，2023（5）：81-82.

［5］張斌.牛巴氏桿菌病防治［J］.四川畜牧獸醫(yī)，2023（3）：52-53.

［6］趙靜，張紅見，馬梅琴，等.青藏高原牦牛多殺性巴氏桿菌熒光定量RQ-PCR檢測方法的建立［J］.中國獸醫(yī)雜志，2013（10）：18-20.

［7］許騰林，邢桂玲，劉家森，等.多殺性巴氏桿菌TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立與應用［J］.中國預防獸醫(yī)學報，2018（8）：706-710.

［8］蒲海華.牛巴氏桿菌病預防和治療措施的分析［J］.中國動物保健，2023（4）：40-41.

［9］楊婷婷.中西藥結合治療牛巴氏桿菌病試驗觀察［J］.中獸醫(yī)學雜志，2022（12）：12-14.