Ki-67、P16蛋白在子宮頸癌組織中的表達及其意義分析

【摘要】 目的：探究子宮頸癌組織中增殖細胞核抗原-67（Ki-67）、多重腫瘤抑制基因-16（P16）蛋白表達及意義。方法：回顧性分析2018年7月—2022年8月于南昌市第三醫院行子宮頸檢查的70例患者的臨床資料，所有患者均經病理檢查明確診斷為子宮頸癌及癌前病變。其中子宮頸癌39例入子宮頸癌組，癌前病變31例[低級別子宮頸上皮內瘤變（CIN）13例和高級別CIN 18例]入癌前病變組，均行免疫組化Ki-67、P16蛋白檢測。分析Ki-67、P16蛋白在子宮頸癌組織中的表達情況，將病理結果作為診斷“金標準”，分析子宮頸癌中Ki-67、P16蛋白的診斷價值。結果：子宮頸癌組Ki-67、P16蛋白陽性表達率均高于低級別CIN、高級別CIN（Plt;0.05）；高級別CIN Ki-67、P16蛋白陽性表達率均高于低級別CIN（Plt;0.05）。Ki-67、P16蛋白診斷子宮頸癌的敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值比較，差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。結論：Ki-67、P16蛋白在子宮頸癌患者中陽性表達率較高，兩者診斷子宮頸癌的價值相當。

【關鍵詞】 子宮頸癌 子宮頸癌前病變 增殖細胞核抗原-67 多重腫瘤抑制基因-16

Analysis of the Expression and Significance of Ki-67 and P16 Protein in Cervical Cancer/WU Ying， SHI Jingjing， TU Jianhong. //Medical Innovation of China， 2023， 20（26）： -163

[Abstract] Objective： To investigate the expression and significance of proliferating cell nuclear antigen-67 （Ki-67） and multiple tumor suppressor gene-16 （P16） protein in cervical cancer. Method： The clinical data of 70 patients who underwent cervical examination in Nanchang Third Hospital from July 2018 to August 2022 were analyzed retrospectively. All patients were diagnosed by pathological examination of cervical cancer and precancerous lesions. Among them， 39 patients with cervical cancer were enrolled in the cervical cancer group， and 31 patients [low-grade cervical intraepithelial neoplasia （CIN） with 13 cases and high-grade CIN with 18 cases] with precancerous lesions were enrolled in the precancerous lesions group. Ki-67 and P16 protein were detected by immunohistochemistry. The expression of Ki-67 and P16 protein in cervical cancer and precancerous lesions was analyzed， and the pathological results were used as the \"gold standard\" to analyze the diagnostic value of Ki-67 and P16 protein in cervical cancer. Result： The positive expression rates of Ki-67 and P16 protein in cervical cancer group were higher than those in low-grade CIN and high-grade CIN （Plt;0.05）; the positive expression rates of CIN Ki-67 and P16 protein in high-grade were higher than those of low-grade CIN （Plt;0.05）. There were no significant differences in sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value and negative predictive value between Ki-67 and P16 protein in the diagnosis of cervical cancer （Pgt;0.05）. Conclusion： Ki-67 and P16 protein have high positive expression rate in patients with cervical cancer， and they have similar value in the diagnosis of cervical cancer.

[Key words] Cervical cancer Cervical precancerous lesions Ki-67 P16

First-author's address： Nanchang Third Hospital， Nanchang 330000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.26.038

近年來，子宮頸癌發病率逐年上升，且呈年輕化，已對女性身體健康等造成嚴重影響[1]。早期子宮頸癌無典型癥狀表現，對其行形態學診斷無法準確預測子宮頸上皮內瘤變（CIN）的進展情況，隨著醫學技術的快速發展，生物學標記物的測定在篩查子宮頸病變中成為研究的重點[2-3]。增殖細胞核抗原-67（Ki-67）可用于識別生長期的腫瘤細胞與正常細胞，用于反映腫瘤細胞增殖指數，其水平越高，提示患者的腫瘤惡性程度越高，腫瘤細胞增殖速度越快。多重腫瘤抑制基因-16（P16）作為細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，能夠直接對細胞周期進行調控，在子宮頸癌組織中呈現過表達的現象[4-5]。鑒于此，本研究分析Ki-67、P16蛋白在子宮頸癌中的表達及意義。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年7月—2022年8月于南昌市第三醫院行子宮頸檢查的70例患者的臨床資料，納入標準：均經組織病理學檢查明確診斷為子宮頸癌及癌前病變；病歷資料齊全。排除標準：存在其他免疫缺陷性疾病；其他系統惡性腫瘤或轉移；存在子宮頸手術史；感染或傳染性疾病。子宮頸癌39例入子宮頸癌組，癌前病變31例[低級別CIN（CIN 1級）13例和高級別CIN（CIN 2、3級）18例]入癌前病變組。本研究獲本院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法

對病理標本行石蠟切片及免疫組化染色處理。首先使用石蠟切片機對蠟塊進行切片，再用攤烤片機進行裱片、烤片，將得到的白片依次置入二甲苯、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇中脫蠟至水。蒸餾水沖洗后，在室溫下將白片置入阻斷內源性過氧化物酶中10 min，后用PBS緩沖液沖洗，再用EDTA修復液高壓修復后，用PBS緩沖液沖洗。滴加一抗后，將白片至于4 ℃環境中12 h，后用PBS緩沖液沖洗，再滴加二抗，置于37 ℃恒溫箱20 min，后用PBS緩沖液沖洗，再滴加DAB顯色劑進行染色5 min，用流動水沖洗5 min，再用蘇木素復染、分化、EDTA反藍，最后流動水沖洗、風干、封片。將制好的玻片置于顯微鏡下進行觀察。結果判斷：應用雙盲法判斷染色結果，均由經驗豐富的病理科醫生判斷。

1.3 觀察指標及判定標準

（1）分析Ki-67、P16蛋白在子宮頸癌及癌前病變組織中的表達情況。Ki-67表達陽性判斷標準：陰性為視野內無陽性細胞；低表達為視野內陽性細胞數量未達1/3；中等表達為視野內陽性細胞數量為1/3～2/3，高表達為視野內陽性細胞數量超過2/3；陽性表達是將中等表達及以上的共同列入。P16表達陽性判斷標準：陰性為視野內無陽性細胞；弱陽性為視野內陽性細胞數量未達25%，反之，為強陽性。（2）以“金標準”為本次病理檢查結果，分析Ki-67、P16在子宮頸癌中的診斷價值。

1.4 統計學處理

數據處理應用SPSS 22.0軟件，以（x±s）表示計量資料，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對t檢驗，用率（%）表示計數資料，應用字²檢驗，以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較

子宮頸癌組年齡36～69歲，平均（50.86±2.84）歲；體重指數19.76～24.38 kg/m2，平均（22.07±1.34）kg/m2；病理類型：17例腺癌，22例鱗癌；TNM分期：18例Ⅰ期，10例Ⅱ期，11例Ⅲ期。癌前病變組年齡35～68歲，平均（51.02±2.13）歲；體重指數19.96～24.43 kg/m2，平均（22.10±1.41）kg/m2；13例為CIN 1級，14例為CIN 2級，4例為CIN 3級。兩組年齡、體重指數比較，差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。

2.2 子宮頸癌和癌前病變組織中Ki-67、P16蛋白表達情況比較

三組Ki-67、P16蛋白陽性表達率比較，差異均有統計學意義（Plt;0.05）；子宮頸癌組Ki-67、P16蛋白陽性表達率均高于低級別CIN、高級別CIN（Plt;0.05）；高級別CIN Ki-67、P16蛋白陽性表達率均高于低級別CIN（Plt;0.05）。見表1。

2.3 診斷價值

Ki-67、P16蛋白診斷子宮頸癌的敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值比較，差異均無統計學意義（Pgt;0.05），見表2、3。

3 討論

作為婦科常見的惡性腫瘤，子宮頸癌中腺癌及鱗狀細胞癌發生率較高，臨床認為子宮頸癌的發生與發展和患者多產、性生活過早、多個性伴侶、人乳頭瘤病毒（HPV）感染等因素存在密切聯系[6-7]。但子宮頸癌的發病過程持續時間較久，子宮頸癌演變過程如下：長期慢性子宮頸炎→CIN→子宮頸原位癌→浸潤癌，因其發病演變過程較長，故早期準確篩查子宮頸癌前病變對預防及控制子宮頸癌的發生意義重大[8-9]。

Ki-67作為細胞增殖的一種核蛋白，在正常情況下可于各階段內的細胞周期表達，但在異常有絲分裂中呈現高表達，其與機體細胞的增殖能力間相關性較高，有助于更好地反映正常狀態下細胞的增殖活性。另有絲分裂在腫瘤細胞的判斷中具有較強的輔助作用，已將其作為判斷子宮頸上皮鱗狀異常增殖及分化的重要性標志物[10-11]。此外，Ki-67蛋白還在CIN病變及良性增生中存在一定表達，同時亦在子宮頸鱗狀上皮基底層進行有效表達[12-13]。P16對抑制多種腫瘤的轉移意義重大，被臨床稱之為多重腫瘤的抑制基因，能較好地參與細胞周期蛋白D1產生特異性結合，從而達到抑制蛋白活性的目的，共同參與Ki-67的細胞周期的調節[14-15]。P16在子宮頸癌前病變診斷中若為強陽性，則提示患者的子宮頸存在較高可能性的內瘤樣改變，或發生子宮頸癌的概率較高。此外，P16在子宮頸上皮細胞中呈高表達，則說明P16在子宮頸病變早期診斷中具有較高的臨床應用價值[16-17]。本研究結果顯示，子宮頸癌組織中Ki-67、P16蛋白陽性率均高于低級別CIN、高級別CIN（Plt;0.05），表明通過觀察Ki-67、P16蛋白陽性表達情況有助于判斷患者病情嚴重程度，分析其原因可知Ki-67蛋白表達是細胞增殖的活性體現，其陽性表達情況與子宮頸病變呈正相關，有助于判斷細胞惡性程度及患者預后，同時對預測CIN進展意義重大。當患者發生HPV感染后，HPV病毒進入宿主細胞進行整合時，E1及E2蛋白出現明顯缺失，且二者缺失可導致癌蛋白的水平升高，使得P16蛋白出現過表達的現象[18-20]。本研究中Ki-67、P16蛋白的敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值比較，差異均無統計學意義（Pgt;0.05），表明二者在子宮頸癌診斷中應用價值相當。

綜上所述，Ki-67、P16蛋白在子宮頸癌患者中陽性表達率較高，兩者診斷子宮頸癌的價值相當，但本研究納入研究樣本量較少，后續研究中需進一步擴大研究樣本量，以待進一步明確診斷價值。

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