分析南寧地區846例不同妊娠結局孕產婦亞甲基四氫葉酸還原酶C677T位點多態性、血漿同型半胱氨酸水平變化與意義

【摘要】目的 探討南寧地區不同妊娠結局孕產婦亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C677T位點基因多態性、血漿同型半胱氨酸（Hcy）水平變化與意義，為減少不良妊娠結局提供一定的理論依據。方法 回顧性分析2019年7月至2021年12月于廣西壯族自治區人民醫院就診且戶籍為南寧地區的846例孕產婦的臨床資料，將其中500例正常妊娠結局孕產婦作為對照組，將184例具有單次不良妊娠結局的孕產婦作為A組，將162例具有多次不良妊娠結局的孕產婦作為B組，采用實時熒光定量PCR（FQ-PCR）方法檢測MTHFR C677T位點基因多態性，采用酶循環法檢測血漿Hcy水平。統計所有孕產婦MTHFR C677T位點基因型分布是否符合

Hardy-Weinberg遺傳平衡（HWE）定律；對比各組孕產婦MTHFR C677T位點基因多態性的分布特點（基因型頻率分布、等位基因頻率分布）及血漿Hcy水平；對比不同MTHFR C677T位點基因型孕產婦血漿Hcy水平。結果 本研究共計納入846例研究對象，其中CC、CT、TT基因型分別為280、423、143例，等位基因C、T分別為983、709例，基因型分布服從HWE定律（χ2 = 0.661，Pgt;0.05）；與對照組比，A組孕產婦CT型占比與B組孕產婦CC型占比均較低，A組孕產婦CC型占比較高；與A組比，B組孕產婦CC型占比較低，CT、TT型占比較高；與對照組比，A組C等位基因占比和B組T等位基因占比較高，A組T等位基因占比和B組C等位基因占比較低；與A組比，B組C等位基因占比較低，T等位基因占比較高（均Plt;0.05）；3組孕產婦血漿Hcy水平，以及CC、CT、TT基因型孕產婦血漿Hcy水平比較，差異均無統計學意義（均Pgt;0.05）。結論 南寧地區846例孕產婦MTHFR C677T位點基因多態性與多次不良妊娠結局的發生有一定關系，而血漿Hcy水平與不良妊娠結局的發生無明顯關系。

【關鍵詞】孕產婦 ; 亞甲基四氫葉酸還原酶 ; 同型半胱氨酸 ; 不良妊娠結局

【中圖分類號】R714.2 【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-3718.2023.09.0025.04

DOI：10.3969/j.issn.2096-3718.2023.09.009

妊娠過程中的病理妊娠及分娩期并發癥都屬于不良妊娠結局，其具體包括出生缺陷、自然流產、早產、死胎、胎兒生長受限、子癇前期等。不良妊娠結局不僅對母嬰安全造成嚴重影響，還會給其家庭帶來沉重的精神和經濟負擔。引起不良妊娠結局的原因較多，目前相關的遺傳因素逐漸成為研究熱點。葉酸代謝基因多態性與不良妊娠結局的關系得到越來越多的關注。其中亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）為參與葉酸代謝通路中的關鍵酶，該基因的多態性尤其是C677T位點基因突變可導致葉酸代謝異常，影響DNA甲基化，并導致同型半胱氨酸（Hcy）水平異常升高并在體內蓄積，被認為與自然流產、出生缺陷、早產、子癇前期等不良妊娠結局密切相關[1-2]。基于此，本研究應用實時熒光定量PCR（FQ-PCR）方法檢測MTHFR C677T位點基因多態性，酶循環法檢測血漿Hcy水平，旨在分析南寧地區不同妊娠結局孕產婦MTHFR C677T位點基因多態性及血漿Hcy水平變化與意義，為減少不良妊娠結局提供一定的理論依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2019年7月至2021年12月于廣西壯族自治區人民醫院就診且戶籍為南寧地區的846例孕產婦的臨床資料。將其中500例正常妊娠結局的孕產婦作為對照組，將184例具有單次不良妊娠結局的孕產婦作為A組，將162例具有多次不良妊娠結局的孕產婦作為B組。對照組孕產婦年齡20～38歲，平均（31.15±3.54）歲；孕周6～15周，平均（10.28±2.89）周；孕前BMI 18.5～23.5 kg/m2，平均（21.72±1.35） kg/m2。A組孕產婦年齡20～37歲，平均（31.73±3.82）歲；孕周6～15周，平均（10.56±2.72）周；孕前BMI 18.6～23.5 kg/m2，平均（21.89±1.34） kg/m2。B組孕產婦年齡20～36歲，平均（31.74±3.59）歲；孕周為6～15周，平均（10.13±2.91）周；孕前BMI 18.9～23.9 kg/m2，平均（21.70±1.39） kg/m2。3組孕產婦一般資料比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05），組間可比。納入標準：所有孕產婦均符合《婦產科學（第8版）》 [3]中關于妊娠的診斷標準；年齡20～40歲；孕前BMI 18.5～23.9 kg/m2；對照組為無不良孕產史、正常妊娠結局的孕產婦；A、B組均發生自然流產史或有胎兒異常史等。排除標準：孕婦或（和）丈夫有染色體異常者；合并遺傳性疾病，生殖系統畸形者；從事強輻射相關工作、艾滋病病毒（HIV）感染及不良用藥史等。研究經院內醫學倫理委員會批準實施。

1.2 研究方法

1.2.1 葉酸基因型測定 ①儀器與設備：亞甲基四氫葉酸還原酶基因677C/T檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）（深圳泰樂德醫療有限公司，規格：24人/盒）、快速實時熒光定量PCR擴增儀（Life Technologies Holdings Pte Ltd. ，型號：7500）；②測定步驟：收集所有孕產婦乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝外周血2～3 mL，使用按照試劑盒說明書提取全血基因組DNA。采用FQ-PCR方法檢測

MTHFR C677T位點基因多態性。

1.2.2 血漿Hcy檢測 抽取所有孕產婦空腹靜脈全血3 mL，常規抗凝，離心（轉速為3 000 r/min）10 min，分離血漿后，利用酶聯免疫吸附法測定血漿Hcy濃度。

1.2.3 追蹤隨訪 隨訪統計妊娠結局，包括自然流產、胚胎停育、畸形引產、死胎、早產、正常分娩等。

1.3 觀察指標 ①統計所有孕產婦MTHFR C677T位點基因型分布是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（HWE）定律。②對比3組孕產婦基因型頻率。③對比3組孕產婦等位基因頻率。④對比3組孕產婦血漿Hcy水平。⑤對比不同基因型孕產婦血漿Hcy水平。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0統計學軟件處理數據，計量資料均經K-S檢驗證實符合正態分布且方差齊，以（ x ±s）表示，兩組間比較行t檢驗，多組間比較采用重復測量方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗。計數資料以[ 例（%）]表示，基因頻率分布應用HWE定律檢驗；多組間比較，行χ2趨勢檢驗，兩組間比較行χ2檢驗。以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 所有孕產婦HWE定律檢驗結果 846例孕產婦中CC、CT、TT基因型分別為280、423、143例，等位基因C、T分別為983、709例，基因型分布服從HWE定律（χ2 = 0.661， Pgt;0.05），見表1。

2.2 各組孕產婦MTHFR C677T位點基因分布情況 與對照組比，A組孕產婦CT型占比、B組孕產婦CC型占比均顯著較低，A組孕產婦CC型占比顯著較高；與A組比，B組孕產婦CC型占比顯著較低，CT、TT型占比顯著較高，差異均有統計學意義（均Plt;0.05），見表2。

2.3 各組孕產婦MTHFR C677T位點等位基因分布情況 與對照組比，A組孕產婦C等位基因占比和B組孕產婦T等位基因占比顯著較高，A組孕產婦T等位基因占比和B組孕產婦C等位基因占比顯著較低；與A組比，B組孕產婦C等位基因占比顯著較低，T等位基因占比顯著較高，差異均有統計學意義（均Plt;0.05），見表3。

2.4 各組孕產婦血漿Hcy水平比較 3組孕產婦血漿Hcy水平經過對比，差異均無統計學意義（均Pgt;0.05），見表4。

2.5 不同MTHFR C677T位點基因型孕產婦血漿Hcy水平比較 CC、CT、TT基因型孕產婦血漿Hcy水平比較，差異均無統計學意義（均Pgt;0.05），見表5。

3 討論

不良妊娠結局的發生會給家庭和社會帶來嚴重影響，在不良妊娠結局諸多影響因素中，遺傳因素占了大部分比例，而MTHFR基因是其中的一大部分。人類的MTHFR基因位于第1號染色體短臂（1P36.3），具有多種突變類型，近年來，研究最多的位點是MTHFR C677T突變位點。MTHFR基因第677位密碼子胞嘧啶（C）被胸腺嘧啶（T）置換，從而使編碼的丙氨酸被纈氨酸替代，導致MTHFR熱穩定性降低，使酶活性下降[4]。已有研究表明，相對正常的CC基因型，雜合子CT基因型的MTHFR活性為正常酶活性的65%，純合子TT基因型的MTHFR活性為正常酶活性的30% [5]。MTHFR作為葉酸代謝通路中的關鍵酶，不可逆地催化亞甲基四氫葉酸轉化成甲基四氫葉酸，其一方面參與嘌呤和嘧啶的合成并為DNA、RNA及蛋白質的甲基化提供甲基；另一方面作為甲基供體，使血液中Hcy再甲基化，從而維持血漿Hcy的正常水平[6]。Hcy是蛋氨酸的代謝產物，其水平升高，損害血管內皮細胞，使血液處于高凝狀態，增加妊高癥、自然流產等發生風險，且高Hcy水平可導致DNA甲基化和合成出現異常，影響神經細胞的增殖或遷移，阻礙神經管閉合，也可造成染色體不分離，從而增加各種出生缺陷風險，易導致不良妊娠結局[7]。

目前，國內外很多研究均發現MTHFR C677T位點基因突變的多態性與流產、唐氏綜合征、神經管缺陷、唇腭裂兒及先天性心臟病等不良妊娠結局具有相關性[8-9]。但國內的楊曉黎等[10]報道了西藏昌都市藏族育齡婦女的葉酸基因代謝多態性與總不良妊娠結局無相關性；李孝瓊等[11]研究也認為荊州地區孕婦MTHFR C677T位點基因多態性與不良孕產史無明顯關聯。造成不同結論的原因可能是，MTHFR C677T位點基因多態性與地域、種族差異性分布有關。本研究所納入南寧地區846例孕產婦的基因型分布服從HWE定律，說明本研究所選樣本具有一定的區域群體代表性，但本研究未進行A、B組總體不良妊娠結局與MTHFRC 677T位點基因多態性的關系研究，因此仍需臨床進一步開展深入研究。

值得注意的是，本研究將不良妊娠結局的發生次數進行具體劃分，觀察各組孕產婦MTHFR C677T位點基因型和等位基因分布情況，結果發現，與對照組比，A組孕產婦CT型和T等位基因占比，以及B組孕產婦CC型和C等位基因占比均較低，A組孕產婦CC型和C等位基因占比，以及B組孕產婦T等位基因占比較高，說明MTHFR C677T位點T等位基因及CT、TT型基因突變的孕產婦發生不良妊娠結局的風險增加。因此，女性妊娠前應行MTHFR C677T位點基因多態性檢測，臨床可對不同基因型女性進行不同用藥劑量設計及藥物治療效果的監測，以降低不良妊娠結局的發生率。此外，與A組比，B組孕產婦CC型和C等位基因占比較低，CT、TT型及T等位基因占比較高，進一步說明，發生單次不良妊娠結局組具有不良妊娠結局事件的偶然性，而發生多次不良妊娠結局組育齡婦女與MTHFR C677T位點基因多態性具有明顯相關性。

本研究中通過檢測所有孕產婦的Hcy值得出，3組研究對象，以及CC、CT、TT基因型孕婦Hcy水平比較，差異均無統計學意義，說明Hcy值水平與不良妊娠結局的發生無關聯性。其原因可能與本研究納入樣本量較少及未對不同基因女性進行葉酸補充療效監測有關。而近年來，韓紅敬等[12]研究表明，MTHFR C677T位點多態性與復發性流產有關，且MTHFR基因TT型與高Hcy血癥有關，并通過隨訪證實葉酸可用于治療高Hcy血癥且有助于改善下次妊娠結局。孕早期高Hcy血癥可抑制絨毛膜的形成，減少絨毛血管的數量，影響胚胎的血流灌注，進而導致胚胎著床不良，易出現不良的妊娠結局。針對上述研究結果，后續實驗會對Hcy在不良妊娠結局的影響進行探究，通過增加樣本量、考慮多因素及對不對基因女性進行葉酸補充治療等措施加以探究Hcy與妊娠結局的關系，以提高研究結果的準確度及可靠性。

綜上，南寧地區846例孕產婦MTHFR C677T位點基因多態性與多次不良妊娠結局的發生有一定關系，而血漿Hcy水平與不良妊娠結局無明顯關系。因此，女性妊娠前應行MTHFR C677T位點基因多態性檢測，臨床可依據女性基因型的不同，在其妊娠前、妊娠期采取精準個體化葉酸補充措施，以降低反復多次的不良妊娠結局的發生，在保障母胎安全的同時，盡可能地減輕多次不良妊娠結局對孕產婦所造成的心理陰影及精神創傷，提高產前篩選和孕期管理。

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