地下水土著微生物菌群吸收維生素強化微生物降解烷烴效率分析

摘要： 針對我國東北某石油污染地下水低溫、 低氧和寡營養的環境特點， 開展微生物降解烷烴實驗. 通過批序靜態實驗確定刺激土著微生物發揮降解作用的營養基質成分， 考察維生素B（VB）、 維生素C（VC）和維生素H（VH）對土著功能降解菌生長及微生物降解烷烴的影響. 實驗結果表明： VB1，VB3，VC和VH對土著微生物的生長有抑制作用， VB6和VB12促進土著微生物生長； 維生素對微生物降解烷烴影響主要表現為VB6，VB12和VH對烷烴降解在一定程度上有促進作用， 維生素組分優化后烷烴降解率為73.91%～89.60%， 其中VB12促進作用最明顯， 5 μg/L 的VB12促進微生物的生長效果最好； 當地下水中烷烴質量濃度為10 mg/L時， 在 10 ℃、 低氧條件下， 加入高效維生素的最佳營養基質7 d時烷烴降解率可達91.17%； 烷烴的降解規律符合二級降解動力學方程， R2均大于0.900； 相比于未受營養基質刺激作用， 當優化后的維生素高效刺激土著菌降解烷烴時， 烷烴優勢菌屬的相對豐度顯著提高.

關鍵詞： 烷烴； 地下水； 生物刺激； 土著微生物； 維生素

中圖分類號： X523" 文獻標志碼： A" 文章編號： 1671-5489（2024）04-1008-08

Analysis of Efficiency of" Vitamin on Enhancing Microbial Degradation" of Alkanes by Indigenous Microbial Flora in Groundwater

XU Weiqing1，" LIU Ting1，" WANG Jili1， SHI Yujia1，2， CHI Chongzhe2， ZHANG Yuling1

（1. College of New Energy and Environment，" Jilin University，" Changchun 130021， China；

2. Changchun Gold Research Institute Co.， Ltd.， Changchun 130012， China）

Abstract：" In view of the environmental characteristics of low temperature，" low oxygen and oligotrophic groundwater polluted by oil in a certain area of Northeast China，" an experiment on microbial degradation of alkanes was carried out. We determined the nutrient matrix components that stimulated the degradation of indigenous microorganisms through batch static experiments， and investigated the effects of vitamin B （VB），vitamin C" （VC） and vitamin H （VH） on the growth of indigenous functional degrading bacteria and microbial degradation of alkanes." The experimental results show that VB1，VB3，VC and VH have inhibitory effects on the growth of indigenous microorganisms，" VB6 and VB12 promote the growth of indigenous microorganisms." The main effects ofvitamins on microbial degradation of alkanes are that VB6，" VB12 and VH have a promoting effect on the degradation of alkanes to a certain extent，" the degradation rate of alkanes is 73.91%—89.60% after the optimization ofvitamin components， among them，" VB12 has the most obvious promoting effect， and 5 μg/L VB12 has the best" promoting effect on the growth of microorganisms. When the mass"" concentration of alkane in" groundwater is 10 mg/L，"" the degradation rate of alkanes can reach 91.17% after 7 d of adding" the optimal nutrient matrix of high|efficiencyvitamins under 10 ℃ and low oxygen conditions. The degradation law of alkanes conforms to the second|order degradation kinetic equation， R2 is above 0.900. Compared to the non nutrient matrix stimulation，" the relative abundance of alkane|dominant bacteria is significantly increased when the optimizedvitamins effectively stimulate the degradation of alkanes by indigenous bacteria.

Keywords： alkane;" groundwater;" biological stimulation;" indigenous microorganisms; vitamin

地下水中的土著微生物廣泛分布在地下水體、 巖性介質表面和微孔等空間中， 以兼性和厭氧微生物為主. 由于其長期存在于地下水中， 因此對地下環境的適應能力強， 當地下水遭受有機污染后， 以有機污染物為碳源或輔助代謝物的土著功能微生物常發生定向響應， 降解有機污染物， 使其在地下水系統中的含量降低." 地下水環境具有低溫、 低氧和寡營養等特點， 土著微生物不僅代謝緩慢， 而且缺少降解反應發生的必要條件， 導致其對有機污染物降解效率低. 通過向含水層中投加微生物代謝必需的營養、 能量和代謝過程所需的電子供/受體等物質， 可強化土著功能微生物代謝能力和菌群豐度， 加速烷烴的降解和轉化作用， 有利于降解地下水中的烷烴.

維生素作為一類生長因子和代謝輔助物質， 不僅可提高微生物的代謝活性， 還能以輔酶的形式廣泛參與到微生物的碳、 氮、 磷等元素的代謝循環途徑中. 如維生素C（VC）可以向各種酶促和非酶促反應提供電子， 改善鐵、 鈣和葉酸的利用； 維生素H（VH）可通過改變細胞膜的通透性， 促進谷氨酸向胞外分泌， 從而降低了谷氨酸的反饋抑制作用； 維生素B1（VB1）可以促進碳水化合物和脂肪的代謝， 在能量代謝中起輔助酶作用； 維生素B3（VB3）可以加氫還原和脫氫氧化， 在生物氧化過程中發揮遞氫體的作用； 維生素B6（VB6）在蛋白質代謝中參與氨基酸的代謝， 可將色氨酸轉化為煙酸；" 維生素B12（VB12）可參與生物DNA的合成并促進甲基化反應， 作為輔酶以腺鈷胺和甲鈷胺形式參與微生物多種重要代謝活動， 在許多微生物之間流通和交換， 實現對微生物生長與代謝活動的調控." 本文以烷烴污染地下水中的土著微生物菌群為研究對象， 考察不同種類維生素的生物刺激效果， 識別出能刺激土著微生物菌群高效降解烷烴的維生素種類及最佳含量， 并分析各種維生素作用下土著微生物菌群的生長情況、 烷烴降解效果以及微生物群落的響應特征.

1 實 驗

1.1 主要儀器

Trace/ISQ 6890/5973型氣相色譜|質譜聯用儀（美國Thermo Scientific公司）； U|T3型紫外可見分光光度計（上海屹譜公司）； TGL|20M型臺式高速離心機（湖南湘儀公司）； BSD|250型恒溫振蕩培養箱（上海博迅實業有限公司）； ETC 811型熒光定量 PCR儀（北京東勝創新生物科技有限公司）.

1.2" 主要材料

維生素試劑：" 抗壞血酸（VC）、 鹽酸硫胺（VB1）、 煙酸（VB3）、 吡哆醇（VB6）、 鈷胺素（VB12）、 生物素（VH）等生化試劑均購于上海國藥集團化學試劑有限公司.石油烴污染地下水： 采集于中國東北地區某石油開采區， 地下水的水化學類型為HCO3|Ca·Na， 微偏堿性， pH=6.99～8.36， 處于還原狀態； 溶解氧質量濃度為0.3～0.7 mg/L， 屬厭氧環境； 地下水中石油烴質量濃度為10 mg/L， 主要由烷烴和芳香烴組成， 其中烷烴以C10～C31為代表的正構烷烴、 帶支鏈烷烴以及環烷烴為主， 芳香烴以菲和萘的取代物為主， 除有機污染物外， 地下水中還存在嚴重的Fe，Mn，NH3|N超標問題. 微生物菌群： 石油烴污染地下水中存在的土著微生物菌群， 未進行刻意富集培養.

1.3" 研究方法

1.3.1 維生素種類識別與最佳含量

取58 mL含有10 mg/L的烷烴污染溶液于60 mL密閉棕色玻璃瓶中， 分別加入不同種類的維生素， 使VC，VB1和VB3的質量濃度分別為25，50，100，200 μg/L， VB6，VB12和VH的質量濃度分別為5，10，25，50 μg/L. 同時設置空白對照組（有微生物和石油烴， 不添加維生素）和無菌對照組（有維生素和石油烴， 無微生物）. 所有處理設置3個平行樣， 在10 ℃的黑暗環境中， 以120 r/min振蕩培養， 7 d后測定各樣品中微生物量和石油烴質量濃度. 地下水中微生物量由紫外分光光度計測定OD600值確定. 石油烴質量濃度采用氣質聯用儀進行測試， 測試條件： 進樣器和檢測器的溫度分別為300，330 ℃， 進樣量0.2 μL， 載氣為氦氣， 流速20 mL/min， 不分流進樣. 使用DB|624色譜柱（20 m×0.18 mm， 1.00 μm）進行分離， 先60 ℃保持2 min， 10 ℃/min上升至250 ℃， 保持2 min， 以20 ℃/min上升至280 ℃， 保持10 min， 再繼續以30 ℃/min上升至300 ℃， 保持30 min， 烷烴碎片設置為57，71，85.

1.3.2 維生素生物刺激效果分析

取58 mL含有10 mg/L的烷烴污染溶液于60 mL密閉棕色玻璃瓶中， 加入1.3.1節獲得的最佳維生素組分， 同時設置空白對照組和無菌對照組， 所有處理設置3個平行樣， 在10 ℃的黑暗環境中， 以120 r/min振蕩培養， 分別在第1，2，3，4，5，6，7天的相同時刻測定地下水中微生物量和石油烴質量濃度， 分別對維生素投加前、 投加后7 d的地下水樣本進行16S rRNA測序， 分析維生素投加下石油烴污染地下水中的土著微生物群落響應特征.

2 結果與討論

2.1 維生素刺激下土著微生物生長狀況

以最佳無機鹽成分為基礎進行維生素優化， 維生素刺激下微生物群落在7 d時的生長狀況如圖1所示.

由圖1可見， VB1，VB3，VC和VH對土著微生物的生長有抑制作用， 抑制程度由強到弱為VCgt;VB3gt;VHgt;VB1. 石油烴降解菌通常依賴氧化石油烴獲得碳源和能量， 此類微生物使用氧化酶將石油烴氧化為可代謝產物， 從而實現石油烴分解. VC具有抗氧化能力， 可中和氧化劑， 抑制氧化反應， 當VC存在于石油烴污染的地下水時， 可能會干擾土著微生物的氧化作用， 抑制它們對石油烴的降解過程； VB3經代謝會生成尼克酸和尼克酸的衍生物， 這些代謝產物在高濃度下可對微生物產生毒性作用， 干擾它們的生長和代謝過程， 說明VB3會抑制微生物生長." 土著微生物的生長狀況與VB1，VC和VH質量濃度之間沒有明顯的相關性， 但與VB3的質量濃度在一定程度上呈負相關， 即隨著VB3質量濃度的增加， 微生物的OD600值逐漸減小. 高質量濃度的VB3對一些微生物具有毒性， 當微生物環境中VB3的質量濃度過高時， 可干擾微生物的細胞代謝和生長， 導致微生物受到損害. VB6和VB12對微生物的生長有促進作用， VB12參與微生物DNA的合成和促進甲基化反應， 可提高微生物對不同營養物質的利用能力， 從而實現促進微生物快速生長. 隨著VB6和VB12質量濃度的增加， 土著微生物的OD600值呈先增大后減小再增大最后趨于穩定的狀態. VB6和VB12在微生物中具有抗氧化作用， 有助于減輕氧化應激對微生物的不利影響， 對在降解石油烴的環境中生存和生長的土著微生物起重要作用. 5 μg/L VB12 和 25 μg/L VB6 條件下的微生物生長情況（OD600 = 0.020 92， 0.023 30）相對較好， 表明VB12和VB6在這兩個質量濃度下可能對微生物的生長有積極影響， 綜合考慮經濟成本， 選擇5 μg/L VB12為最佳維生素質量濃度.

2.2 維生素刺激下土著微生物對正構烷烴降解效果的影響

維生素刺激下微生物降解烷烴規律如圖2所示.

由圖2可見， 添加維生素對正構烷烴的降解率有影響， 在不同維生素的不同質量濃度條件下， 降解率存在差異， 隨著維生素質量濃度的增加， 正構烷烴的降解率一般呈上升趨勢. 不同質量濃度的VB1，VB3和VC刺激微生物降解正構烷烴的降解率為73.91%～85.56%， 其中100 μg/L VB1 條件下的正構烷烴降解率最高，" 表明維生素VB1對正構烷烴降解具有顯著的促進作用，" 200 μg/L VC 條件下的正構烷烴降解率最低， 比未添加維生素略低， 可見VC有抑制作用， 這是由于微生物降解烷烴的營養基質主要通過各種無機鹽參與， VC在中性和堿性條件下， 易受光線、 金屬離子鐵和銅的影響而被破壞所致." 因此， VC對正構烷烴降解無明顯影響. 雖然VB1對微生物的生長和代謝通常是必需的， 但在大多數自然環境中， 微生物可獲得足夠的VB1滿足其生長需求， 而無需額外供應， 說明VB1的供應通常不會成為限制微生物降解石油烴的因素. 5 μg/L VB12，10 μg/L VH和25 μg/L VB6 條件下的降解率分別為89.60%，89.27%和88.97%， 說明VB12，VH和VB6在特定質量濃度下對正構烷烴降解在一定程度上有促進作用." VB12促進作用最明顯，

主要原因為： 1） VB12是以輔酶的形式存在， 它可增加葉酸的利用率，" 促進脂肪、 碳水化合物和蛋白質的新陳代謝， 進而促進土著微生物的生長， 提高烷烴降解率；"" 2） VB12含有鈷元素， 鈷是一些微生物酶的輔因子， 這些酶在降解石油烴的過程中發揮作用， 適量的VB12可作為鈷的來源， 有助于維持此類酶的活性， 提高微生物降解石油烴的能力. 石油烴降解菌通常具有多樣的代謝途徑， VB6可能促進了這些不同代謝途徑中酶的活性， 從而提高了微生物對多種石油烴的降解效率.

最佳質量濃度維生素刺激下微生物生長狀況和降解烷烴規律如圖3所示." 綜合土著降解菌的生長規律、 烷烴降解效果以及經濟成本，" 5 μg/L VB12的效果相對最好， 維生素組分優化后烷烴降解率為73.91%～89.60%， 綜上考慮選用5 μg/L VB12作為微生物生長營養基質的成分.

2.3 維生素刺激下微生物生長過程及石油烴降解特征

2.3.1 維生素刺激下微生物生長過程

維生素刺激前后土著微生物菌群生長和烷烴降解規律如圖4所示." 由圖4（A）可見： 微生物刺激前，" 0～2 d時微生物快速生長， OD600值逐漸升高， 第2天達到0.016 7， 表明前期養分充足， 有利于微生物大量繁殖， 處于對數增長期， 之后OD600值變化較小， 說明微生物處于穩定增長期； 維生素刺激后， 微生物在0～2 d內快速生長， 菌密度大幅度提升， 與維生素刺激前微生物生長規律相似， 但土著微生物菌群生長速度更快， OD600值達到0.027 3， 是營養基質優化前的1.63倍." 由圖4（B）可見：" 維生素刺激前， 在降解初期降解率迅速提高， 大約3 d達到穩定， 7 d微生物對烷烴的降解率為49.82%～51.39%， 說明基礎營養鹽能有效刺激土著微生物菌群增長， 持續發揮降解烷烴作用；" 維生素刺激后， 降解規律與刺激前相似， 在降解初期降解率迅速提高， 約3 d基本達到穩定，" 與微生物生長曲線相符， 7 d微生物降解烷烴的降解率約為91.17%， 表明基礎營養鹽能有效刺激土著微生物菌群增長， 持續發揮降解烷烴作用， 隨著土著菌量的增加， 烷烴降解效率增加.

2.3.2 維生素刺激下土著微生物菌群對石油烴的降解特征

用烷烴質量濃度和降解時間擬合降解動力學方程， 結果列于表1. 由表1可見， 微生物對烷烴的降解過程符合二級動力學方程， R2均大于0.900， 擬合曲線如圖5所示.

2.3.3 維生素刺激下土著微生物群落響應特征分析

微生物質量濃度和 Alpha多樣性指數列于表 2. 由表 2可見， 經最佳維生素刺激后（A1），" 微生物質量濃度為 2.28 mg/L， 而原生地下水中的微生物質量濃度為0.56 mg/L， 增加了3.07 倍， 表明優化后的維生素對微生物生長有顯著促進作用， 提供了更多種類和量的營養物質， 為不同類型的土著微生物提供了更多的資源， 使它們更容易找到所需的營養物質， 從而促進其生長和繁殖."" Chao值為108.59、 Ace值為118.59， 物種總數減少， 原因是不同微生物種群之間存在競爭和合作作用， 而優化后可能會改變這些相互作用的動態， 對某些微生物的生存和繁殖產生積極或消極影響， 表明營養基質對土著微生物菌群的組成具有選擇性. Shannon 指數為1.86、 Simpson 指數為 0.32， 說明優化后生物多樣性降低， 通常提供更多種類和量的營養物質后， 微生物之間的競爭更激烈， 某些微生物可能更有效地利用這些資源， 而其他微生物在競爭中受到排擠， 只有少數種類能在激烈的競爭中存活， 最終導致微生物群體的多樣性降低， 與Chao 值和 Ace 值的結果一致. 在烷烴降解反應發生后（A2）， 微生物的質量濃度為 9.54 mg/L， 是降解前的4.18倍， A2的操作分類單位（OTUs）數量也增加， 表明土著微生物的物種總數增加， 菌群多樣性提高， 說明烷烴降解反應對微生物菌群的豐富度有積極促進作用.

圖6為維生素刺激前后土著微生物菌群的相對豐度. 由圖 6（A）可見， 門水平下， 在石油烴降解過程中， 由于不同微生物種類的生長和代謝反應， 可能會導致某些菌門的相對豐度增加， 而其他菌門的相對豐度減少， 因此這種變化可反映不同微生物群體的相對活躍性和適應性. 維生素刺激后Proteobacteria（變形菌）菌群相對豐度為38.58%， Firmicutes（厚壁菌）菌群相對豐度為58.19%， 說明營養基質優化后改變了土著菌的菌群豐度， Firmicutes高于Proteobacteria對營養基質的響應程度， Proteobacteria和Firmicutes菌門包含較多常見的石油烴降解菌， 表明營養基質配方能成功刺激出具有石油烴降解能力的土著微生物. 在烷烴降解反應發生后多樣性增加， Proteobacteria菌群相對豐度為85.85%， 相對豐度顯著增加， 表明它們在降解過程中的活動性顯著提高， 在降解石油烴的過程中， 優勢菌門由Firmicutes和Proteobacteria變為Proteobacteria和Bacteroidetes（擬桿菌）. Proteobacteria在石油烴降解過程中生物活性被激發， 發揮主導降解作用. Proteobacteria菌群在石油烴降解中的高相對豐度反映了它們在該過程中的重要性.

由圖6（B）可見， 屬水平下， 經維生素刺激后， Bacillus（芽孢桿菌）菌群的相對豐度為54.56%， Aquabacterium（湖水水狀桿菌）菌群的相對豐度為12.58%， 與維生素刺激前相比， 菌群相對豐度發生了顯著變化， 表明營養基質優化后刺激了土著烷烴降解菌的活性. 在烷烴降解反應發生后， 菌群多樣性增加， 主要以Pseudomonas（綠膿桿菌）， Caulobacter（柄桿菌）和Variovorax（貪噬菌）為優勢菌屬，" Pseudomonas，Caulobacter和Variovorax等菌屬是常見的烷烴降解菌屬， 它們在烷烴降解中具有較高的降解能力， 這些菌屬在刺激后相對豐度增加， 從而增加了它們在微生物群體中的重要性. 優化的營養基質可能提供更多種類和數量的營養物質， 有助于支持優勢菌屬的生長和代謝， 它們在烷烴降解過程中的生物活性被激發， 證明了營養基質對刺激土著降解菌生長的可靠作用， 適量營養物質的供應會激發優勢菌屬的生物活性， 從而促進烷烴降解過程.

3 結 論

1） 在最佳營養基質基礎上， 向石油污染地下水中添加不同種類和質量濃度的維生素進行7 d生物修復， 發現不同種類維生素對石油烴生物降解刺激效果不同. VB1，VB3，VC和VH對微生物的生長有抑制作用， VB6和VB12對微生物的生長有促進作用， VC，VB1和VB3對正構烷烴降解率無明顯影響， VB6，VB12和VH在一定程度上促進了正構烷烴的降解.

2） 當地下水中烷烴質量濃度為10 mg/L時， 在10 ℃、 低氧條件下， 加入5 μg/L維生素VB12的最佳營養基質， 7 d時烷烴降解率可達91.17%， 烷烴的降解規律符合二級降解動力學方程， R2均大于0.900.

3） 加入最佳營養基質后， 菌群相對豐度顯著提高， 表明加入高效維生素后的營養基質刺激了土著烷烴降解菌的活性， 生物活性在烷烴降解過程中被激發， 證明了營養基質對刺激土著降解菌生長的可靠作用.

參考文獻

［1］ WANG J L，" ZHANG Y L，" WANG X，" et al. Natural Polysaccharide Polymer Network for Sustained Nutrient Release to Stimulate the Activity of Aromatic Hydrocarbon|Degrading Indigenous Microflora Present in Groundwater . Science of the Total Environment，" 2023，" 892： 164669|1|164669|15.

［2］ WANG J L， ZHANG Y L， DING Y，" et al. Comparing the Indigenous Microorganism System in Typical Petroleum|Contaminated Groundwater . Chemosphere，" 2023，" 311： 137173|1|137173|14.

［3］ OMOIKE A I， HADMON D. Slow|Releasing Permanganate Ions from Permanganate Core|Manganese Oxide Shell Particles for the Oxidative Degradation of an Algae Odorant in Water . Chemosphere，" 2019，" 223：" 391|398.

［4］ WANG J L， ZHANG Y L， DING Y，" et al. Analysis of Microbial Community Resistance Mechanisms in Groundwater Contaminated with SAs and High NH+4|Fe|Mn . Science of the Total Environment，" 2022，" 817： 153036|1|153036|14.

［5］ LI J， MA N， HAO B Y， et al. Coupling Biostimulation and Phytoremediation for the Restoration of Petroleum Hydrocarbon|Contaminated Soil . International Journal of Phytoremediation，" 2022，" 25（6）：" 706|716.

［6］ SHIHI A， AYDIN S， INCE B， et al. Reconstruction of Bacterial Community Structure and Variation for Enhanced Petroleum Hydrocarbons Degradation through Biostimulation of Oil Contaminated Soil . Chemical Engineering Journal，" 2016，" 306：" 60|66.

［7］ SHIHI A， AYDIN S， INCE B， et al.Evaluation of Microbial Population and Functional Genes during the Bioremediation of Petroleum|Contaminated Soil as an Effective Monitoring Approach . Ecotoxicology and Environmental Safety，" 2016，" 125： "153|160.

［8］ WU M L， WU J L， ZHANG X H， et al. Effect of Bioaugmentation and Biostimulation on Hydrocarbon Degradation and Microbial Community Composition in Petroleum|Contaminated Loessal Soil . Chemosphere，" 2019， 237： 124456|1|124456|8.

［9］ ZENELI A，" KASTANAKI E， SIMANTIRAKI F， et al. Monitoring the Biodegradation of TPH and PAHs in Refinery Solid Waste by Biostimulation and Bioaugmentation . Journal of Environmental Chemical Engineering，" 2019，" 7（3）：" 103054|1|103054|7.

［10］ 石麗華. 維生素B12類似物對食品微生物的抑菌機理研究 . 杭州： 浙江工商大學，" 2018. （SHI L H. Antibacterial Mechanism of Vitamin B12 Analogues in Food Microbes . Hangzhou： Zhejiang Gongshang University， 2018.）

［11］ 歐陽經鑫， 李秋粉， 周華， 等. 維生素B6的生物學功能及其抗炎作用機制 . 動物營養學報， 2023， 35（5）：" 2738|2747. （OUYANG J X，" LI Q F，" ZHOU H，" et al. Biological Function and Anti|inflammatory Mechanism of Vitamin B6 . Chinese Journal of Animal Nutrition， 2023， 35（5）：" 2738|2747.）

［12］ 吳小杰， 左凱悌， 劉艷麗. 維生素對微生物絮凝劑REA|11合成的影響 . 湖南工程學院學報（自然科學版），" 2013， 23（4）：" 59|61. （WU X J，" ZUO K D，" LIU Y L. Preliminary Study on Effect of Vitamins on Production of Bioflocculant REA|11 . Journal of Hunan Institute of Engineering （Natural Science Edition），" 2013， 23（4）：" 59|61.）

［13］ 李海軍， 林建群， 林建強， 等. 氮源與維生素對鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus）高效生產L|乳酸影響的研究 . 食品與發酵工業，" 2007（2）：" 22|26. （LI H J，" LIN J Q，" LIN J Q，" et al. Effects of Nitrogen Sources and Vitamins on Production of L|Lactic Acid with High Efficiency Using Lactobacillus rhamnosus . Food and Fermentation Industries， 2007（2）：" 22|26.）

［14］ 林桐梅， 趙慧艷. 葉酸和維生素B6、 B12對不穩定型心絞痛并高同型半胱氨酸患者預后的影響 . 中國臨床保健雜志，nbsp; 2011， 14（3）：" 301|303. （LIN T M，" ZHAO H Y. Effect of Folic Acid，" Vitamin B6， B12 on Prognosis of Patients with Unstable Angina Pectoris and High Homocysteine . Chinese Journal of Clinical Health Care，" 2011， 14（3）：" 301|303.）

［15］ 茍德國. 吹掃捕集|氣相色譜法同步測定水樣中苯系物和鹵代烴的方法研究 . 南京： 南京農業大學， 2014. （GOU D G. Simultaneous Determination Method of BTEX and Vhh in Water by Purge|and|Trap|Gas Chromatography . Nanjing： Nanjing Agricultural Uniwersity， 2014.）

［16］ 蘇俊濤， 石家萱， 孫愛麗， 等. 石油烴降解菌LYC|1和LYC|2的篩選及其降解效能研究 . 給水排水，" 2022，" 48（增刊2）： 311|318. （SU J T， SHI J X， SUN A L， et al. Screening Identification and Degradation Characteristics of Petroleum Hydrocarbon Degrading Bacteria . Water amp; Wastewater Engineering，" 2022，" 48（Suppl 2）：" 311|318.）

［17］ 張煜偉， 張賽， 涂悅， 等. 葉酸和維生素B6及維生素B12缺乏對腦梗死大鼠甲基代謝及認知功能的影響 . 中國醫藥， 2018， 13（12）：" 1882|1885. （ZHANG Y W， ZHANG S， TU Y，" et al. Effect of Folic Acid， Vitamin B6 and B12" Deficiency on Methylation Metabolism and Cognitive Function in Cerebral Infarction Rats . China Medicine， 2018， 13（12）：" 1882|1885.）

［18］ 焦迎暉， 張惟材， 謝莉， 等. 維生素C發酵中伴生菌對氧化葡糖桿菌的影響 ." 微生物學報， 2002， 29（5）： 35|38. （JIAO Y H，" ZHANG W C，" XIE L， et al. Effects of Bacillus Ceries on Gluconobacter Oxydans in Vitamin C Fermentation Process . Microbiology Bulletin， 2002， 29（5）： 35|38.）

［19］ RENATA K， OLIVIER C. Vitamin B12 Absorption：" Mammalian Physiology and Acquired and Inherited Disorders . Biochimie， 2013， 95（5）：" 1002|1007.

［20］ 朱煜. 過氧化鈣緩釋氧劑對微生物降解苯系物的強化效能和機理研究 . 應用化工， 2020， 49（4）：" 916|920. （ZHU Y. Improvement and Mechanism of CaO2|Based Oxygen Slow|Releasing Granular on Microbial Degradation of BTEX . Applied Chemical Industry， 2020， 49（4）： 916|920.）

（責任編輯： 單 凝）