檳榔堿對H2O2誘導SH-SY5Y神經細胞氧化應激損傷的保護作用及機制研究

摘""要：本研究通過建立過氧化氫（H2O2）誘導的SH-SY5Y神經細胞氧化應激模型，旨在探究檳榔堿對氧化應激誘導神經細胞損傷的保護作用及其作用機制。采用CCK-8法檢測細胞活力，采用分光光度法檢測乳酸脫氫酶（LDH）釋放、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）活性，采用流式細胞術檢測細胞凋亡、線粒體膜電位，采用Western"blot技術檢測Nrf2、HO-1、Keap1、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表達。結果表明：檳榔堿干預均能有效降低細胞凋亡并顯著上調線粒體膜電位；在提高SOD、CAT水平的同時降低MDA水平；140"μmol/L檳榔堿處理能夠顯著上調Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白的表達（Plt;0.001，Plt;0.0001），并下調Keap1、Bax、Caspase-3蛋白的表達（Plt;0.001，Plt;0.0001）。表明檳榔堿能夠有效改善H2O2誘導的氧化應激損傷，其作用機制與激活Nrf2/HO-1信號通路、提升細胞抗氧化活力、調控Bcl-2/Bax/Caspase-3信號通路和抑制細胞凋亡有關。

關鍵詞：檳榔堿；SH-SY5Y；氧化應激；神經保護；作用機制中圖分類號：R285.5""""""文獻標志碼：A

Neuroprotective"Effect"and"Mechanism"of"Arecoline"on"H2O2-induced"Damage"in"SH-SY5Y"Cell

SUN"Yuan1，2，4，"WANG"Danyang2，"SUN"Jing2，"BAI"Yajuan1，2，3，"FAN"Bei2，3，"SONG"Hongbo4，"JI"Jianbang1，3，5*，"LU"Cong1，2，3，5*，"WANG"Fengzhong1，2，3*

1."National"Nanfan"Research"Institute"（Sanya），"Chinese"Academy"of"Agricultural"Sciences，"Sanya，"Hainan"572024，"China;"2."Institute"of"Food"Science"and"Technology，"Chinese"Academy"of"Agricultural"Sciences，"Beijing"100193，"China;"3."Sanya"Institute，"Hainan"Academy"ofnbsp;Agricultural"Sciences，"Sanya，"Hainan"572025，"China;"4."College"of"Food"Science，"Fujian"Agriculture"and"Forestrynbsp;University，"Fuzhou，"Fujian"350002，"China;"5."Haikou"Key"Laboratory"of"Areca"Processing"Research，"Haikou，"Hainan"570100，"China

Abstract："The"aim"of"this"study"was"to"explore"the"protective"effect"of"arecoline"on"the"cell"model"of"H2O2-induced"oxidative"stress"damaged"model"in"SH-SY5Y"cells"and"elucidate"its"mechanism."Cell"viability"was"detected"by"CCK-8"assay."Spectrophotometry"was"used"to"detect"LDH"release，"MDA，"SOD，"and"CAT"contents."Flow"cytometry"was"used"to"detect"cell"apoptosis"and"mitochondrial"membrane"potential."Western"blot"was"used"to"detect"the"expressions"of"Nrf2，"HO-1，"Keap1，"Bcl-2，"Bax"and"Caspase-3."Arecoline"could"reduce"cell"apoptosis"and"significantly"increase"mitochondrial"membrane"potential."The"level"of"SOD"elucidateand"CAT"increased"while"the"level"of"MDA"decreased."Arecoline"140"μmol/L"group"could"significantly"up-regulate"the"protein"expression"of"Nrf2，"HO-1"and"Bcl-2"（Plt;0.001，"Plt;0.0001），"and"down-regulate"the"protein"expression"of"Keap1，"Bax"and"Caspase-3"（Plt;0.001，"Plt;0.0001）."Conclusions："arecoline"can"effectively"improve"H2O2-induced"oxidative"stress"injury"in"SH-SY5Y"cell"by"activating"the"Nrf2/HO-1"signaling"pathway，"enhancing"the"activities"of"antioxidant"enzymes"and"regulating"the"oxidation"reduction"system"of"cells，"as"well"as"regulating"the"Bcl-2/Bax/Caspase-3"signaling"pathway"and"inhibiting"cell"apoptosis.

Keywords："arecoline;"SH-SY5Y;"oxidative"stress;"neuroprotection;"mechanism"of"action

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2024.06.017

檳榔（Areca"catechu"L.）為棕櫚科（Palmaceae）檳榔屬（Areca）常綠喬木，是我國南部熱帶亞熱帶地區的經濟作物之一。近年國家廣播電視總局發文禁止宣傳檳榔及其產品，同時國家食品藥品監督管理總局對檳榔下達限制加工生產令，導致我國檳榔產業遭遇生存危機。除食用價值外，檳榔具有驅蟲[1-2]、消腫鎮痛[3]、消食化積[4-5]、抗炎抗氧化[6]、抗病毒[6]、改善神經系統[7-10]等多種藥理活性，藥用檳榔位列我國“四大南藥”之首，因此深入挖掘檳榔的藥用價值，解析其作用機制，將檳榔回歸南藥是目前我國檳榔產業尋求發展的重要路徑之一。

檳榔堿是檳榔中重要的活性物質之一，具有擬膽堿作用、阻止神經抑制效應[11]、增強內源性促腎上腺皮質激素的釋放[12]、改善阿爾茨海默病（Alzheimer’s"disease，"AD）病人認知能力[13-14]、抗抑郁[15]等活性，檳榔堿具備良好的神經功效挖掘及開發利用價值。然而，目前檳榔堿的生物活性功能尚未被完全發掘，特別是檳榔堿的神經保護功效研究相對空缺，已知生物活性功能的作用機制并不清楚，有待進一步深入研究。過氧化氫（H2O2）避光保存下性質相對穩定，并且是一種極易穿過細胞膜的外源活性氧，在其穿過細胞膜進入到細胞后，促進細胞內產生大量活性氧，導致細胞發生一系列氧化應激反應[16]。因此，H2O2誘導的SH-SY5Y神經細胞損傷常作為一種經典的體外氧化應激模型。檳榔堿改善氧化應激所導致神經細胞損傷的研究未見報道，其作用機制尚不清楚。因此，本研究采用檳榔堿作用于H2O2損傷的SH-SY5Y神經細胞體外氧化應激模型，從抗氧化、抑制細胞凋亡兩方面探究檳榔堿的神經保護作用，以期為檳榔堿神經功能評價及開發利用提供理論依據。

1""材料與方法

1.1""材料

1.1.1""主要試劑""SH-SY5Y人神經母細胞瘤細胞、SH-SY5Y完全培養基（武漢尚恩生物技術有限公司）；檳榔堿（上海源葉生物科技有限公司）；DMEM培養基、0.25%"Trypsin-EDTA"Gibco；磷酸鹽緩沖液（PBS"1×）（Hyclone）；無血清細胞凍存液（蘇州新賽美生物科技有限公司）；BCA試劑盒、丙二醛（MDA）檢測試劑盒、總超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒、乳酸脫氫酶（LDH）釋放檢測試劑盒、線粒體膜電位檢測試劑盒（JC-1）、RIPA裂解液（碧云天生物技術公司）；DMSO、CCK-8細胞活性檢測試劑盒、Keap1（北京索萊寶科技有限公司）；Annexin"V-FITC"Apoptosis"Detection"Kit（美國BD公司）；0.45"μm"PVDF膜、ECL（Millipore公司）；顯影定影試劑（Servicebio公司）；Caspase-3、β-actin（CST公司）；Nrf2、HO-1（Proteintech公司）；Bcl-2、Bax（ABCAM公司）；HRP標記山羊抗兔（Jackson）。

1.1.2""主要儀器與設備""細胞培養箱（Herocell"180），上海潤度生物科技有限公司；低溫冷凍離心機，德國sigma公司；流式細胞儀CytoFLEX；酶標儀（spectra"MAX190）Molecular"devices；超微量核酸/蛋白分析儀，英國BioDrop"μLite；電泳儀，美國伯樂Bio-Rad；凝膠成像系統（FluorChen"HD2），美國Alpha；Olympus"BX53倒置光學顯微鏡，日本Olympus公司；垂直電泳儀、轉印電泳儀，Tanon公司；掃描儀，EPSON公司。

1.2""方法

1.2.1""細胞培養""SH-SY5Y細胞用含10%胎牛血清、1%青鏈霉素的完全培養基，置于37"℃飽和濕度、5%體積分數的CO2培養箱中培養。48"h更換新培養基，次日進行傳代培養。取對數生長期的細胞進行后續試驗。

1.2.2""檳榔堿對SH-SY5Y細胞活力的影響""將處于對數生長期的細胞按6×105個/mL密度接種于96孔板中，每孔100"μL，每組設置5個復孔。檳榔堿干預組中加入含有不同檳榔堿濃度（25、50、100、150、200、250、300、350、400"μmol/L，編號依次為T1～T9）的DMEM培養基，對照組（CK）加入等量的DMEM培養基。培養結束時，每孔加入10"μL"CCK-8工作液，孵育合適時間，酶標儀調至450"nm處，測量各孔的吸光度（optical"density，"OD）值。

1.2.3""檳榔堿對H2O2誘導SH-SY5Y細胞氧化損傷的影響""（1）SH-SY5Y細胞H2O2氧化損傷模型的建立。細胞鋪板按照1.2.2處理。設置對照組（CK）和H2O2損傷組（50、100、150、200、250、300"μmol/L，編號依次為A1～A6），培養24"h后，每孔加入10"μL"CCK-8溶液，孵育合適時間，酶標儀調至450"nm處，測量各孔的OD值。

（2）檳榔堿對H2O2誘導SH-SY5Y細胞損傷的影響。細胞鋪板按照1.2.2處理，設置對照組（CK）、H2O2模型組（150"μmol/L）、H2O2（150"μmol/L）+檳榔堿（35、70、140"μmol/L）干預組（編號依次為B1～B3）。在培養結束時，每孔加入10"μL"CCK-8溶液，孵育合適時間，酶標儀調至450"nm處，測量各孔的OD值。

1.2.4""檳榔堿對H2O2誘導SH-SY5Y細胞神經保護作用""將處于對數生長期的細胞按6×105個/mL密度接種于6孔板中，每孔2"mL，每組6個復孔，孵育24"h后，按對照組（CK）、模型組（H2O2）、檳榔堿組、檳榔堿+H2O2組處理細胞。除去原培養基，加入檳榔堿（35、70、140"μmol/L）預保護24"h后，各檳榔堿組加入H2O2處理24"h，其中CK組僅加入DMEM完全培養基，模型組加入H2O2（150"μmol/L），檳榔堿+H2O2組加入檳榔堿（35、70、140"μmol/L）及H2O2（150"μmol/L）。分組處理細胞后檢測各項指標。

（1）LDH釋放率檢測。分組處理細胞24"h后，按照試劑盒說明書對細胞LDH釋放率進行檢測。

（2）細胞凋亡檢測。分組處理細胞24"h后，參照Annexin"V-FITC"Apoptosis"Detection"Kit試劑盒說明書染色，避光、室溫孵育15"min，孵育結束后在30"min內用CytoFLEX流式細胞儀檢測細胞凋亡情況并計算凋亡率。

（3）線粒體膜電位檢測。分組處理細胞24"h后，參照線粒體膜電位檢測試劑盒（JC-1）說明書染色，避光、室溫孵育15"min，孵育結束后在30"min內用CytoFLEX流式細胞儀檢測細胞線粒體膜電位。

（4）細胞內SOD、過氧化氫酶（CAT）活性和MDA含量測定""分組處理細胞24"h后，1000"r/min離心5"min，收集細胞沉淀，使用預冷的RIPA蛋白裂解液裂解細胞，置于–4"℃充分裂解30"min，并每隔5"min振蕩30"s。裂解結束后于4"℃"12"000"r/min離心5"min，取上清液，參照BCA試劑盒說明書計算細胞總蛋白，根據SOD、MDA、CAT檢測試劑盒說明書操作步驟，酶標儀檢測吸光度值。

（5）相關蛋白表達檢測。細胞蛋白提取：分組處理細胞24"h后，1000"r/min離心5"min，收集細胞沉淀，使用預冷的RIPA蛋白裂解液裂解細胞，置于–4"℃充分裂解30"min，并每隔5"min振蕩30"s。裂解結束后于4"℃"12"000"r/min離心5"min，取上清液，對蛋白進行定量。

蛋白濃度測定及樣品制備。按照BCA蛋白定量試劑盒使用說明書操作。繪制標準曲線并計算蛋白濃度。①根據所測目的蛋白的分子量，配制8%～10%分離膠。②將待測蛋白樣品以每孔30"μg上樣。③電泳：濃縮膠恒壓90"V，約nbsp;20"min；分離膠恒壓120"V，通過預染蛋白marker確定電泳停止時間。④轉膜：去除濃縮膠、保留分離膠，裁剪合適大小的0.45"μm孔徑的PVDF膜，轉膜300"mA恒流，60"min。⑤封閉：取出PVDF膜完全浸沒于5%"BSA-TBST中，水平搖床孵育1"h逆轉錄（RT）。⑥一抗孵育：利用5%"BSA-TBST稀釋一抗，4"℃水平搖床孵育過夜。次日，用TBST洗膜3次，每次10"min。⑦二抗孵育：利用5%"BSA-TBST稀釋二抗，山羊抗兔IgG室溫孵育1"h后TBST洗膜3次，每次10"min。⑧膠片曝光：滴加ECL到膜的蛋白面，反應3～5"min后曝光2"min，顯影2"min，定影。

1.3""數據處理

采用SPSS"26.0和GraphPad"Prism"8.0軟件進行數據分析及繪圖，利用Image-PRO軟件進行灰度分析，多組間比較采用單因素方差分析（one-way"ANOVA），利用LSD法驗證兩兩比較的顯著性（Plt;0.05）。

2""結果與分析

2.1""檳榔堿對SH-SY5Y細胞存活率的影響

如圖1所示，在檳榔堿處理細胞48"h后，檢測細胞存活率。與CK相比，T2～T4處理中，即檳榔堿濃度在50～150"μmol/L濃度范圍內，細胞存活率呈現出隨檳榔堿濃度升高而上升的趨勢，在檳榔堿濃度為150"μmol/L時SH-SY5Y細胞存活率最大，當繼續增大檳榔堿濃度時SH-SY5Y細胞存活率明顯下降，且成劑量依賴性，具有統計學意義（Plt;0.0001）。

2.2""檳榔堿對H2O2誘導SH-SY5Y細胞氧化損傷的影響

2.2.1""H2O2誘導SH-SY5Y細胞氧化損傷模型的建立""H2O2誘導細胞氧化損傷反應便于發生，并且H2O2容易獲得，避光保存時性質相對穩定可控，是研究細胞氧化應激損傷最常用的體外評價模型[17-18]。如圖2所示，將H2O2系列濃度作用于SH-SY5Y細胞24"h時，H2O2能劑量依賴性地抑制SH-SY5Y細胞的增殖，在H2O2濃度為50"μmol/L時，對細胞損傷甚微，細胞存活率約為100%，而在H2O2濃度為100"μmol/L時細胞損傷較小，細胞存活率在75%左右，未達到造模要求。當H2O2濃度大于150"μmol/L時抑制作用過強，H2O2濃度為150"μmol/L時，細胞存活率約50%，較為適中，差異具有統計學意義（Plt;0.0001）。因此，最終造模條件為150"μmol/L"H2O2作用24"h。

2.2.2""檳榔堿對H2O2誘導SH-SY5Y細胞存活率的影響""如圖3所示，將檳榔堿作用于H2O2誘導的SH-SY5Y細胞24"h時，與CK相比，H2O2模型組的細胞活力顯著降低（Plt;0.0001）；與H2O2模型組相比，檳榔堿組在35、70、140"μmol/L三個濃度干預下均能顯著提升氧化損傷細胞模型的存活率（Plt;0.0001）。

2.3""檳榔堿對H2O2誘導SH-SY5Y細胞神經的保護作用

2.3.1""細胞LDH釋放率""如圖4所示，與CK相比，H2O2模型組的細胞LDH活性顯著升高（Plt;"0.001），H2O2誘導使LDH大量釋放，產生細胞毒性，表明細胞發生死亡。在檳榔堿干預后，與H2O2模型組相比，檳榔堿各干預組的LDH活性顯著下降（Plt;0.001），表明檳榔堿能顯著降低H2O2造成的細胞毒性作用。

2.3.2""細胞凋亡情況""Annexin-V/PI雙染色法可用于區分壞死細胞、早期凋亡細胞及晚期凋亡細胞。如圖5A所示，Q4為正常細胞，Q3為早凋細胞，Q2為晚凋細胞，Q1為死亡細胞，試驗操作中也會造成細胞的機械性死亡（Q1象限）。依據圖5B流式細胞術結果顯示，與CK相比，H2O2模型組由于含有H2O2，導致凋亡細胞顯著增加（Plt;0.0001）；而在檳榔堿干預后，凋亡細胞較模型組顯著下降（Plt;0.01，Plt;0.0001）。

2.3.3""線粒體膜電位""線粒體膜電位（mitochondrial"membrane"potential，"MMP）的下降是線粒體膜損傷和細胞凋亡的早期指標，線粒體膜電位的失衡預示著細胞凋亡的發生[19]。如圖6所示，150"μmol/L"H2O2可以使線粒體膜電位明顯下降，說明H2O2誘導使得線粒體膜內外電勢差下降，并且破壞了線粒體膜的完整性，與CK相比，極顯著下降（Plt;0.0001）；與H2O2模型組相比，檳榔堿各濃度處理組均顯著升高線粒體膜電位（Plt;0.001，"Plt;0.0001），減輕SH-SY5Y細胞的氧化損傷。

3.3.4""胞內MDA含量和SOD、CAT活性""MDA是脂質過氧化物，一定程度上反映了細胞內的氧化程度[20]，而抗氧化酶SOD、CAT等是抗氧化的重要因素[21-22]，通過制約氧化損傷來維持細胞內氧化-抗氧化平衡。如圖7所示，H2O2誘導后，H2O2模型組細胞中的MDA含量顯著高于CK（Plt;0.01），而SOD和CAT活性則顯著下降（Plt;0.0001）；在檳榔堿干預后，與H2O2模型組相比，檳榔堿高劑量組（140"μmol/L）均能顯著下調MDA水平（Plt;0.001），并提高抗氧化物SOD、CAT活性（Plt;0.01，"Plt;0.0001）。表明在檳榔堿干預后提高了細胞內的抗氧化物水平。

2.3.5""相關蛋白表達分析""（1）Nrf2/HO-1信號通路相關蛋白。核因子促紅細胞生成素相關因子-2（nuclear"factor"E2-related"factor-2，"Nrf2）是作用于機體氧化應激調節中樞中重要的抗氧化轉錄因子[23]。激活后的Nrf2與抗氧化反應的元件（antioxidant"response"element，"ARE）結合[24]，被轉移到細胞核中，上調血紅素加氧酶1（heme"oxygenase-1，"HO-1）的表達以達到減輕氧化應激的目的。通常情況下，Keap1與Nrf2在細胞質結合為二聚體，并作為Nrf2的內源性抑制劑，以維持細胞內Nrf2穩態[25]。如圖8所示，與CK相比，

H2O2模型組中的Nrf2、HO-1蛋白水平顯著下降（Plt;0.0001），對Nrf2/HO-1信號通路有負調控功能的Keap1蛋白水平顯著升高（Plt;0.0001）。與H2O2模型組相比，檳榔堿干預組能顯著提高Nrf2、HO-1蛋白水平（Plt;0.05，Plt;0.01，Plt;0.001，Plt;0.0001）；顯著下調Keap1蛋白水平（Plt;0.01，Plt;0.0001）。結果表明，檳榔堿可通過提高Nrf2/HO-1信號通路中的Nrf2、HO-1蛋白水平，抑制Keap1蛋白水平來減輕H2O2對SH-SY5Y細胞的氧化損傷。

（2）Bcl-2/Bax/Caspase-3信號通路相關蛋白。細胞凋亡是一個由多種因素和多種蛋白共同調控的復雜生理過程，其中，Bcl-2、Caspase家族蛋白是細胞凋亡的關鍵調節分子，線粒體是其調控內在凋亡途徑的靶點[26]。線粒體形態的改變、外膜電位變化與細胞損傷、凋亡密切相關[27]。如圖9所示，與CK相比，H2O2模型組中的Bcl-2蛋白水平顯著下降（Plt;0.001），而Bax、Caspase-3蛋白水平顯著提高（Plt;0.001，Plt;0.0001）。與H2O2模型組相比，檳榔堿干預組能顯著提高Bcl-2蛋白水平（Plt;0.05，Plt;0.01，Plt;0.0001），而顯著下調Bax、Caspase-3蛋白水平（Plt;0.05，Plt;0.01，Plt;0.001，Plt;0.0001）。結果表明，檳榔堿可通過提高Bcl-2/Bax/Caspase-3信號通路中的Bcl-2蛋白水平，抑制Bax和Caspase-3蛋白水平來減輕H2O2對SH-SY5Y細胞的氧化損傷。

3""討論

近年來，氧化應激被認為是多種神經退行性疾病中一個重要的致病因素[28]。細胞內的氧化-抗氧化失衡會促使細胞發生氧化應激[29]，進而損傷線粒體功能、DNA、RNA蛋白質和脂質或誘發細胞凋亡，對機體造成不可逆傷害[30]。研究表明，低濃度檳榔堿能上調血紅素加氧酶-1[31]、鐵蛋白

輕鏈、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、谷氨酸-半胱氨酸連接酶催化亞基和谷胱甘肽還原酶[32]。檳榔水提醇沉物可作為一種潛在的鎮痛、抗炎抗氧化劑[6]。石翠格等[33]發現100"μmol/L檳榔堿能夠逆轉ox-LDL所致的內皮細胞損傷，并下調炎癥因子表達，其作用機制可能與激活內皮細胞乙酰膽堿靶點有關，這一點在張偉等[34]的研究中得到證實，并且張偉等[34]發現1×10–5"mol/L檳榔堿能下調小鼠巨噬細胞中炎癥因子表達從而減輕炎癥水平，其作用機制可能與過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）有關。裴海月等[15]研究發現在連續給予檳榔14"d后，小鼠體內SOD、CAT活性明顯升高，且MDA含量顯著下降，表明檳榔具有較好的抗氧化活性。此外，檳榔堿能通過提高細胞的總抗氧化能力，降低MDA的產生來減輕鏈尿佐菌素（STZ）誘導的INS-1細胞氧化損傷[35]。本研究發現，檳榔堿在50～200"μmol/L濃度范圍內對SH-SY5Y細胞無毒性作用；在150"μmol/L"H2O2誘導24"h條件下，以檳榔堿35、70、140"μmol/L三個濃度對細胞進行預保護處理，可以有效降低H2O2對細胞的氧化損傷，使細胞活力以及細胞內線粒體膜電位升高，減少細胞凋亡，降低MDA的產生，提高細胞內SOD、CAT活性，檳榔堿各濃度組均能上調Nrf2、HO-1蛋白水平并下調Keap1蛋白表達水平。該結果表明，檳榔堿的抗氧化作用與Nrf2/HO-1/Keap1通路有關，能負調控Keap1蛋白水平，降低Nrf2泛素化降解，提高下游抗氧化蛋白HO-1水平，增強細胞內抗氧化酶活性，減少氧化物的產生，以維持細胞內氧化-抗氧化平衡。

H2O2誘導使活性氧大量增加，導致線粒體內外膜電位損耗、滲透壓改變，進而導致線粒體膜破裂，細胞凋亡的發生變得不可逆轉。本研究結果表明，檳榔堿可有效調控Bcl-2/Caspase-3/Bax凋亡通路，下調凋亡因子Caspase-3、Bax的表達水平，上調抗凋亡蛋白Bcl-2的表達水平，阻止Caspase-3的活化進而發生級聯反應。此前研究表明，檳榔堿干預能上調抑凋亡基因Bcl-2的表達，保護胰腺與β細胞[36]。表明抗凋亡是檳榔堿發揮神經細胞保護作用的另一作用機制。

綜上所述，在無毒濃度范圍內，檳榔堿可有效清除LDH、MDA，并能夠提高抗氧化酶SOD、CAT活性，在改善H2O2誘導的細胞氧化應激方面表現出良好的效果，其作用機制可能與激活抗氧化信號通路Nrf2/HO-1/Keap1，并抑制凋亡信號通路Bcl-2/Caspase-3/Bax的表達有關。本研究結果可為檳榔堿神經活性的深入挖掘提供數據支持，并為檳榔用于神經調節類健康產品的開發奠定理論基礎。

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