野生香菇母種純化與保藏培養基篩選

摘要：【目的】篩選野生香菇的母種純化與保藏培養基，為培養和保藏野生香菇菌株種質資源提供適宜條件。【方法】將從吉林省安圖縣采集到的野生香菇菌株培養成母種，再分別設置4種純化與保藏培養基配方，比較培養后菌絲的生長情況與菌落的顏色差異，篩選適宜的培養基配方。【結果】母種純化培養基中以配方四（馬鈴薯200 g、木屑10 g、黃豆粉10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L）表現最優，其菌絲在第3 d開始萌發，菌絲生長速度最快，達0.51 cm/d，長勢旺盛、白色，菌落無色素。母種保藏培養基中以配方A（細木屑78%、麥麩20%、石灰1%、石膏1%）的表現好，其菌絲萌發率高，長勢旺盛且整齊，菌落無色素，能保藏15個月。【結論】通過研究篩選出野生香菇適宜的母種純化與保藏培養基，為香菇野生資源的收集純化與長期保藏奠定了基礎。

關鍵詞：香菇；母種；培養基；純化；保藏

中圖分類號：S646.12" " " " " " " " " " " "文獻標識碼：A" " " " " " " " " " "文章編號：2095-5774（2024）04-0308-06

Culture Selection of Purification and Preservation of Mother Spawn

From Wild Lentinula edodes

Wang Xu，Wang Xin，Hu Zhiqiang*，Du Zhongwei，Li Jian，Piao Jiyan，Sun Xiuxia，Wu Wenlin

（Yanbian Academy of Agricultural Sciences，Yanji，Jilin 133000，China）

Abstract：【Objective】In order to select the culture to purificate and preservate of wild Lentinula edodes，to provide suitable conditions for cultivating and preserving germplasm resources of wild Shiitake strains.【Method】Cultured from strain comes to spawn of Shiitake which collected from Antu County，Jilin Province，set up four kinds of purification and preservation medium，compared the difference of growth of mycelium and the colorof the colonies.【Result】Both hyphal may germinate in different purificated and preserve cultures of the spawn of L. edodes，but has big differences.The results showed that the hyphal of L. edodes could grow in all 4 culture，and formula 4（patato 200 g，sawdust 10 g，soybean powder 10 g，glucose 20 g，agar 20 g，water 1 L）was much more suitable for the growth of this strain，which was better than other culture conditions. And the growth rate of mycelium was the highest，reaching 0.51 cm/d，vigorous，white，and the colonies without pigment. Formula A（wood chips 78%，wheat bran 20%，lime 1%，gypsum 1%）was more suitable for long-term culture and preservation of mother spawn，and the germination rate of mycelium is higher，and its growth is vigorous and neat，and the colonies without pigment，may preserve 15 months. 【Conclusion】Studies on selecting the cultures for purification and preservation of wild L. edodes，which laid a foundation for the collection，purification and long-term preservation of wild resources of L. edodes.

Key words：Lentinula edodes；Mother spawn；Culture；Purification；Preservation

香菇（Lentinula edodes）隸屬于擔子菌門（Basidiomycota ）、傘菌綱（Agaricomycetes）、傘菌目（Agaricales）、光茸菌科（Omphalotaceae）、香菇屬（Lentinula），是我國主要的栽培食用菌種類之一，已有悠久的栽培歷史［1］。其富含較高的蛋白質、維生素以及多種礦質元素，有著山珍、菇中之王等美稱，香菇具有延緩衰老、降血壓血脂及膽固醇、提高機體免疫功能等作用［2］。伴隨“一帶一路”“精準扶貧”和“鄉村振興”等重大發展機遇，香菇、黑木耳等食用菌產業成為許多地區農業經濟的支柱產業［3-4］。

優良菌種是食用菌生產最重要的基礎性生產資料和關鍵環節，對食用菌發展起著至關重要的作用，加上科學合理的栽培管理措施，才能獲得高產穩產的子實體［5-6］。目前香菇母種一般采用PDA斜面保藏法，該方法簡單易行，并能夠實時觀察保藏菌種的菌絲生長情況，但PDA培養基不含有木質、纖維素等有機物［7-9］。長期保藏需進行不斷繼代培養、復壯、馴化，并通過利用木屑、礦物油、液氮、甘油、冷凍干燥等方法或技術來實現［10-11］。

本研究對長白山區野生香菇資源進行收集與利用，充分了解長白山區香菇的分布和類型，通過對分離的香菇菌株進行篩選，能夠摸索野生香菇菌絲的生長特性。通過利用不同培養基質對野生香菇母種培養條件進行篩選，并基于木屑等原材料對菌種保藏條件進行摸索。初步探討香菇母種培養基的適宜配方和保藏條件，從而有效提高香菇菌種質量，以期篩選出適合規模化生產、應用的培養條件及配方，為香菇產業發展提供更好的理論依據。

1材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株分離于采自吉林省安圖縣福星林場的香菇子實體樣本，野外生長情況見圖1。標本保藏于延邊朝鮮族自治州農業科學院標本室，菌株保藏于食用菌所菌種保藏室。利用徠卡 DM2000顯微鏡觀察孢子、鎖狀聯合等形態學形態特征，結果為孢子印白色，孢子光滑、無色、橢圓形至卵圓形、大小為（5～7）×（3～4）μm，雙核菌絲有鎖狀聯合，經檢索相關資料鑒定為香菇（Lentinula edodes）。

1.2 試驗方法

1.2.1母種培養

利用PDA斜面培養基進行野生香菇菌株的分離與培養，培養溫度為25 ℃。PDA培養基配方：馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1Ｌ，pH自然。

1.2.2母種純化培養基篩選

母種純化、篩選培養基制作時，設置4種配方。配方一：加富PDA培養基，馬鈴薯（去皮）200 g、MgSO4 2 g、KH2PO4 2 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L，pH自然；配方二：馬鈴薯（去皮）200 g、玉米粉10 g、麥麩10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L，pH自然；配方三：馬鈴薯（去皮）200 g、玉米粉10 g、黃豆粉10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L，pH自然；配方四：馬鈴薯（去皮）200 g、木屑10 g、黃豆粉10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L，pH自然。

1.2.3 母種保藏培養基

母種保藏培養基制作時，設置4種配方。配方A：細木屑78%、麥麩20%、石灰1%、石膏1%；配方B：細木屑78%、精糠20%、石灰1%、石膏1%；配方C：細木屑60%、精糠20%、黃豆粉10%、玉米面8%、石灰1%、石膏1%；配方D：PDA斜面培養基。

1.2.4培養基制作

按照試驗配方稱取相應的材料，置于１L水中煮制，保持沸騰狀態30 min后過濾，將過濾好的溶液倒入鍋中繼續煮沸，依次加入瓊脂和葡萄糖等，混合加熱后分裝三角瓶中。

1.2.5 滅菌及倒平板

將配置好的母種純化、保藏培養基置于滅菌鍋中，高溫高壓（121 ℃）滅菌30 min。降溫后在紫外滅菌30 min的超凈工作臺中，將不同試驗培養基分別倒入無菌的培養皿（Φ - 9 cm）中，每個培養皿裝液量約18 mL，靜置、冷卻。

1.2.6 接種及培養

將制作好的純化培養基靜置24 h無冷凝水后接種，將接種（接種塊大小Φ - 0.5 cm）后的母種標記好，每組4個重復，放入25℃的恒溫培養箱中暗光培養10 d。將接種后的保藏菌種置于25℃的恒溫培養箱中暗光培養，每組30個重復，菌絲長滿后置于4～6℃冰箱中保存。

1.2.7 測量與分析

母種純化培養基篩選試驗自接種24 h后，間隔24 h觀察和記錄菌絲萌發時間、菌落色素；菌絲萌發后利用十字交叉法及畫線法記錄長勢，并測量菌落的生長直徑，測定香菇菌株平均生長速度。母種保藏培養基試驗記錄萌發率，觀察菌絲整齊度、菌落色素有無等，查看保藏期間菌絲長勢并記錄菌株保藏時間。相關數據采用Excel 2007、SPSS等軟件進行數據處理和統計分析。

2結果與分析

2.1 不同母種純化培養基對野生香菇菌絲生長的影響

野生香菇菌絲在不同配方母種純化培養基里的生長情況如表1、圖2所示，分離的野生香菇菌株在不同的培養基中均能生長，但生長情況存在較大的差異。配方二和配方四中菌絲均在第3 d開始萌發，配方一和配方三均為第4 d；菌絲長勢以配方四的最優，為旺盛，配方三其次，配方一、二則為一般；菌絲生長速度也以配方四的最快，達0.51 cm/d，但與配方二、三之間無顯著差異，僅顯著快于配方一。配方一、四的菌落無色素，而配方二、三的菌落有色素。4種母種純化培養基中配方中菌絲在第3 d開始萌發，菌絲生長較快、長勢旺盛、白色，菌落無色素；配方三次之，長勢均優于其他對照。結合菌絲萌發時間、生長速度、長勢等生長情況及菌落色素有無情況，結果表明配方四為香菇母種純化最佳配方。

2.2 不同母種保藏培養基對野生香菇菌絲生長的影響

利用4種培養基進行香菇母種保藏對比試驗，觀測不同培養基內菌絲長勢、整齊度、萌發率及菌落色素等情況，從表2及圖3可以看出不同條件下香菇母種均能萌發，但也存在差異。4種配方培養基的菌絲萌發率為94.9%～97.8%，其中配方A萌發率最高，配方C次之，二者差異不顯著，但都顯著高于配方D。萌發后配方A的菌絲長勢旺盛，配方C、D次之，配方B較一般；配方A的菌絲整齊度整齊，優于其他處理，配方B的菌絲比較雜亂；配方B的菌落有產生少量色素，其他配方無色素。綜合保藏時間、萌發率、菌絲長勢及整齊度、菌落色素有無等生長情況，結果表明配方A萌發率高，菌絲生長情況好且保藏時間能達到15個月，保藏時間明顯長于其他處理，更適于香菇菌株的長期保存。

3 結論與討論

優良菌種的生長須有其適宜的生長環境，在適宜的培養條件下，其生理代謝才能正常進行，表現出優良的性狀，而最根本條件為適宜的培養基，以保證優良菌種為前提進行母種培養基的篩選及優化和保藏，能夠保證母種的質量與活力。史紅鴿等添加木屑后優化香菇母種培養基［9］，但本純化試驗培養基在PDA培養基的基礎上加入細木屑、麥麩、黃豆粉等濾汁，為其生長提供更加豐富的營養，并對篩選菌種退化原因及復壯有一定的促進作用［12］，在配方四（馬鈴薯200 g、木屑10 g、黃豆粉10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L）培養條件下利于保持菌種的特性。

姜寧等以小米粒為培養基質，探索香菇菌種保藏方法［13］。而本保藏培養基篩選利用木屑、精糠、玉米面等替代料作為試驗材料，能夠提高分解纖維素的能力和抗病能力，與PDA斜面保藏相比菌絲生長速度更快，菌絲潔白粗壯，有效保持菌絲活力及分解纖維素能力。配方A（細木屑78%、麥麩20%、石灰1%、石膏1%）培養條件下菌絲生長旺盛、濃密，保存時間長、萌發率高，有效延長菌種保藏時間4～6個月，能夠長期保持菌種優良特性，防止菌種退化。

野生香菇母種培養中，伴隨菌絲在不同培養條件下生長，生物量的增加，菌絲鎖狀聯合數量、菌絲形態等都會發生相應的變化［14］，菌絲不同培養基中出現較明顯的區別。綜合不同培養基中菌絲的萌發時間、長勢、色素有無等因素，結果表明配方四（馬鈴薯200 g、木屑10 g、黃豆粉10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L）更適合該菌株母種培養，配方A（細木屑78%、麥麩20%、石灰1%、石膏1%）適合母種保藏，但關于菌絲出現退化、老化的特征有待進一步研究。

參考文獻：

［1］戴玉成，楊祝良．中國藥用真菌名錄及部分名稱的修訂［J］．菌物學報，2008，27（6）： 801-824．

［2］劉春如，易誠.香菇的營養價值和藥用價值［J］.中國林副特產，2002（1） ：52-53．

［3］李玉．后疫情時代中國食用菌產業的可持續發展［J］.菌物研究，2021，19（ 1） ： 1-5.

［4］李玉．中國食用菌產業發展現狀、機遇和挑戰［J］.菌物研究，2018，16（ 3） ： 125-131．

［5］李玉．菌物資源學［M］.北京： 中國農業出版社，2013.

［6］張金霞．中國食用菌菌種學［Ｍ］．北京：中國農業出版社，2011．

［7］徐瑞雅，齊志廣，賈耐兵，等．食用菌最佳母種培養基的篩選［J］．河北農業科學，2007，11（1）： 23-24.

［8］何培新，張定法，孟麗，等．食用菌母種培養基的試劑化制備及應用［J］．中國食用菌，2000，19（2） ： 7-8.

［9］史紅鴿，魏銀初，班新河，等．正交實驗法優化香菇母種培養基［J］.北方園藝，2020（19）： 129-133.

［10］張瑞穎，胡丹丹，左雪梅，等．食用菌菌種保藏技術研究進展［J］.食用菌學報，2010，17（4）：84-88.

［11］孔維麗，袁瑞奇，孔維威，等．食用菌菌種保藏歷史、現狀及研究進展概述［J］.中國食用菌，2015，196（5）：5-9.

［12］吳春玲，吳學謙，鄭巧平，等．香菇菌種性能衰退的原因及復壯技術［J］. 中國食用菌，2006，（5）： 9-11.

［13］姜寧，李玉，周峰，等．一種香菇菌種保藏方法初探［J］. 食用菌，2020，42 （5）： 22-23，27.

［14］王玉青．香菇種質資源的鑒別及保藏方法的研究［D］.福州：福建農林大學，2009.

（責任編輯：許" " 玲）