TP-ELISA與TPPA兩種方法在孕婦梅毒螺旋體篩查中的對比

聶映 由志鈺 黃亞梅

【摘要】目的：對TP-ELISA（梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗）與TPPA（梅毒螺旋體明膠凝集實驗）兩種方法在孕婦梅毒螺旋體篩查中的應用比較，以優化梅毒血清學篩查方案。方法：分別選取86例TP-ELISA結果陽性或弱陽性（S/co值≥1）以及8例TP-ELISA結果陰性（S/CO值<1）的孕婦血標本，采用TPPA進行檢測，對兩種方法所得的檢測結果進行比較分析。結果：對于TP-ELISA結果陰性（S/CO值<1）的8例標本，TPPA檢測結果為陰性;TP-ELISA結果弱陽性（1≤S/CO值<4）的6例標本，TPPA檢測結果全為陰性;而TP-ELISA結果陽性（S/CO值≥4）的80例標本，TPPA檢測結果陽性率為98.75%。結論：利用TP-ELISA可實現大批量樣本的自動化處理，但TP-ELISA陽性結果尤其是弱陽性結果需要聯合TPPA確認，并進行追蹤復查以獲得更為準確的判斷。

【關鍵詞】TP-ELISA; TPPA;梅毒螺旋體篩查

梅毒是一種由梅毒螺旋體感染而引起的慢性性傳播性疾病，具有高度傳染性，屬于醫院檢驗科傳染病檢測的常規項目。梅毒感染機體臨床表現復雜，可引起全身各組織和器官產生慢性系統性病變，嚴重危害機體健康。孕婦感染梅毒，可經由胎盤傳染給胎兒，引發宮內感染進而導致胎兒流產、早產或導致成活胎兒患有先天梅毒。因此，出于優生優育及傳染病防控的目的，對孕婦進行梅毒篩查是至關重要的[1]。目前，針對孕婦梅毒篩查，常采用TP-ELISA（梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗）及TPPA（梅毒螺旋體明膠凝集實驗）兩種梅毒抗原血清學方法進行檢測。但由于兩種方法在靈敏性及特異性等多個方面存在差異，可導致梅毒檢出率不一致，也容易導致臨床醫生難于做出正確判斷[2]。為此，本研究擬對TP-ELISA與TPPA兩種方法進行比較分析，以探討孕婦梅毒血清學篩查方案。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇近來于我院做梅毒篩查的孕婦94例，其中86例TP-ELISA結果陽性或弱陽性（S/CO值>1），8例TP-ELISA結果陰性（S/CO值<1）。對以上標本進行TPPA檢測。

1.2 材料和方法

1.2.1 材料

材料及試劑TP-ELISA操作采用煙臺煙臺艾德康生物科技有限公司全自動酶免儀;TP-ELISA及TPPA檢測試劑盒分別購自北京萬泰生物藥業股份有限公司和珠海麗珠試劑公司。

1.2.2 檢測方法

（1） TP-ELISA：按照煙臺煙臺艾德康生物科技有限公司全自動酶免儀使用說明書，設置好各項參數并準備好血清標本及相應試劑，儀器自動完成測試操作及讀數。（2） TPPA：首先，將100μ1生理鹽水加入U型板第1個孔，后面7孔每孔加入25μl生理鹽水;然后，第1孔加入25μl待測血清，混勻后取出25μl加入第2孔，稀釋至第8個孔，棄掉25μl稀釋血清;最后，在第3個孔加入25μl未致敏粒子，第4至8孔均加入25μl致敏粒子，混勻后室溫靜置2h，結果判讀參照文獻[3]，以血清稀釋度1：80作為陽性最低稀釋度報告標準。

2 結果

2.1 TP-ELISA和TPPA兩種檢測結果比較

在所檢的94例孕婦血標本中，8例TP-ELISA結果陰性的標本，TPPA檢測結果同樣為陰性，符合率為100%;而86例TP-ELISA結果陽性（80例）或弱陽性標本（6例），TPPA檢測結果為陽性的標本數為79例，符合率為91.86%（見表1）。進一步的分析發現，在TP-ELISA結果為弱陽性值（1≤S/CO值<4）的6例血標本檢測中，TPPA結果均為陰性;而TP-ELISA結果陽性（S/CO值>4）的80例標本，TPPA檢測結果陽性標本數為79例，未檢出的一例標本為TP-ELISA結果S/CO值介于4～5之間，陽性檢測結果符合率為98.75%。

2.2 TP-ELISA S/CO值與TPPA抗體效價關系分析

為了進一步探討TP-ELISA與TPPA檢測結果的關系，我們對TP-ELISA S/CO值與其相對應的TPPA抗體效價進行深入分析。如圖l所示，在TP-ELISA S/CO值大于4，TPPA抗體效價總體趨勢上是隨著S/CO值上升而上升的，比如TPPA檢測效價為1280對應的TP-ELISA檢測值絕大多數分布在S/CO≥20。但我們也同時注意到，這兩種檢測方法的檢測結果并不是成線性關系的，這值得廣大臨床檢驗工作者注意。

3 討論

研究表明，近年來，隨著社會經濟快速發展，我國梅毒發病率逐年上升，而先天性梅毒感染上升趨勢明顯，防控形勢嚴峻H。機體在感染梅毒螺旋體約兩周后即可產生特異性抗體，主要包括IgG和IgM兩種特異性抗體，前者為治愈后也終生存在，而后者在機體存在時間較短[5]。通過檢測受檢者血清中的梅毒特異性抗體，即可對梅毒進行實驗室篩查。實驗室梅毒血清學特異性抗體檢測方法主要是TP-ELISA和TPPA兩種方法，具有很高的特異性和敏感性。

TP-ELISA是采用酶聯免疫吸附法原理，在微孔板上包被梅毒螺旋體抗原，以雙抗原夾心法同時檢測IgM和IgG兩種特異性抗體，陽性結果S/CO值與血清中特異性抗體濃度成正相關。TP-ELISA檢測法操作簡單、測試費低廉且易于自動化，適用于醫院大規模梅毒抗體篩查，是當前最廣泛使用的梅毒特異性抗體檢測方法，也被作為實驗室梅毒特異性抗體檢測的首選方法[6]。但研究發現，利用TP-ELISA檢測法進行梅毒篩查，由于受檢者患有自身免疫疾病等原因可導致假陽性結果的產生，也可由于鉤狀效應的原因導致假陰性結果的產生[7-8]。TPPA作為國際公認的梅毒確診的首選檢測方法，是利用明膠顆粒包裹純化后的梅毒螺旋體毒株制成抗原，檢測受檢者血清中梅毒特異性抗體及效價，特異性及靈敏度均較好。然而，TPPA檢測法所需試劑的成本高，檢測費相對于TP-ELISA也較高。與此同時，TPPA法需要檢驗人員對血清標本梯度稀釋，不能自動化操作，結果判讀也依賴于肉眼，結果準確性也依賴于檢驗人員的工作經驗，因而不適合于實驗室大批量的梅毒篩查工作。

在本項研究中，TP-ELISA檢測結果陰性的8例標本，TPPA檢測結果也均為陰性。而對于TP-ELISA檢測結果弱陽性（1 ≤S/CO值<4）的6例標本，TPPA結果為陰性，說明TPPA特異性較TP-ELISA更好。值得注意的是，在TP-ELISA檢測結果陽性的80例標本中，僅有一例S/CO值介于4～5的標本，TPPA檢測結果為陰性，這說明隨著S/CO值得增大，TPPA與TP-ELISA的陽性檢測符合率就越高，所以TP-ELISA結果陽性的標本，需要利用TPPA法進一步確認。

綜上所述，TP-ELISA適用于孕婦梅毒的大批量自動化篩查，但陽性結果需要通過TPPA法進一步確認，既能節約時間和醫療費用成本，也能減少誤診。

（通訊作者：黃亞梅）

參考文獻

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