男科門診患者人乳頭瘤病毒感染基因型分析

劉艷，沈倩云，程文國

揚州大學醫學院附屬醫院 揚州市婦幼保健院檢驗科，江蘇揚州 225001

人乳頭瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）是隸屬于乳多空病毒科乳頭瘤病毒屬的一組無包膜環狀雙鏈DNA病毒，有極強的嗜上皮細胞屬性，可引起人類皮膚及黏膜組織的病變，目前已鑒定出 200多種亞型，40余種與生殖道感染有關。HPV感染不但可引起生殖器疣，還可能引起女性宮頸癌和外陰癌、男性陰莖癌及男女性肛門癌和口咽癌等[1-5]。近年來，隨著女性HPV感染情況的研究和宮頸癌防治工作的深入，男性HPV感染情況也逐漸引起研究者的重視[5-7]。男性HPV感染大多數為隱性感染或亞臨床感染，容易被忽略，且男性感染HPV后可通過性接觸傳染給性伴侶，從而增加性伴侶被感染的風險[6-9]，因此對男性進行HPV篩查顯得尤為重要。本研究回顧性分析258例男科門診患者37種HPV基因分型檢測結果，為男性HPV感染的干預和治療提供科學依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2018年7月至2022年12月就診于揚州市婦幼保健院男科門診的258例男性患者的外生殖器脫落細胞樣本，年齡20～67歲，平均（33.99±9.26）歲。收集同期就診的1436例女性體檢者及931例宮頸疑似HPV感染的婦科患者宮頸脫落細胞樣本作為對照組，年齡19～87歲，平均（42.96±11.86）歲。納入標準：①患者于揚州市婦幼保健院初次采樣檢測；②未行相關治療措施；③無性病史。患者及家屬均知曉本研究并簽署知情同意書。本研究經揚州市婦幼保健院倫理委員會審批通過。

1.2 樣本采集

樣本采集前24h內患者無性行為。男性樣本用一次性采樣拭子稍用力對龜頭、冠狀溝、系帶、包皮和尿道口反復進行3～6次旋轉摩擦，取得脫落上皮細胞，然后將拭子放入裝有專用細胞保存液的試管中，擰緊管蓋，作好標識。女性樣本由醫生以窺陰器暴露宮頸，將一次性宮頸采樣刷于宮頸口輕輕地順時針旋轉5圈，取出宮頸刷放入裝有專用細胞保存液的試管中，擰緊管蓋，作好標識。樣本立即送檢或置于4℃冰箱保存，2周內檢測。

1.3 儀器與試劑

采用潮州凱普生物化學有限公司提供的HPV分型檢測試劑盒，包括DNA提取試劑盒、聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒、雜交試劑盒以及杭州博日科技有限公司的TC-96/G/H（b）C型基因擴增儀和凱普HHM-3型醫用核酸分子快速雜交儀進行HPV基因分型檢測。

1.4 檢測方法

采用PCR體外擴增和導流雜交的方法檢測37種HPV基因亞型，其中包括18種高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、26、73、82；19種低危型：HPV6、11、42、43、44、81（CP8304）、34、40、54、55、57、61、67、69、70、71、72、83、84。

1.4.1 HPVDNA 分離提取樣本振蕩均勻，取0.5ml樣本至離心管中，14 000轉/min離心1min，棄上清液，加入細胞裂解液提取DNA，嚴格按照DNA提取試劑盒說明書進行操作，取1μl提取好的DNA樣本作為模板。

1.4.2 PCR擴增 按PCR擴增試劑說明書進行操作，反應體系為25μl，包括PCR混合液23.25μl、Taq酶0.75μl、提取的DNA模板1μl，混勻。PCR擴增程序：95℃預變性9min，95℃變性20s，55℃退火30s，72℃延長30s，共40個循環；72℃延長5min；4℃保持。

1.4.3 雜交過程擴增產物 95℃變性5min，冰水浴2min，加入雜交孔內進行導流雜交10min，雜交液沖洗、加封阻液、加酶標液和顯色液等操作步驟按照雜交試劑盒說明書進行。

1.4.4 結果判定 根據膜條HPV亞型分布位置判斷結果，陽性點為清晰可見的藍紫色圓點，多個圓點即為多重感染。

1.5 統計學方法

采用SPSS21.0統計學軟件對數據進行處理分析，計數資料以例數（百分率）[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 男科門診患者HPV感染情況與女性組結果的比較

258例男科門診患者（男性患者組）中HPV陽性者103例，感染率39.92%。1436例女性體檢者（女性體檢組）中HPV陽性者195例，感染率13.58%。931例宮頸疑似HPV感染的婦科患者（女性患者組）HPV陽性者348例，感染率37.38%。男性患者組感染率與女性體檢組比較，差異有統計學意義（P<0.001）；男性患者組與女性患者組比較，差異無統計學意義（P=0.456）。男性患者組感染類型與女性體檢組差異有統計學意義（P=0.032）；男性患者組與女性患者組差異無統計學意義（P=0.192），見表1。

表1 三組受試者的HPV感染類型比較[n（%）]

2.2 男科門診患者HPV感染狀態與女性組結果的比較

103例男科門診陽性患者單一亞型感染59例，占57.28%，二重及以上感染（多重感染）44例，占42.72%，最多十重感染；單一亞型感染以高危型為主，二重及多重感染以高危型及高低危混合型為主，見表2、表3。男性患者組感染狀態與女性體檢組相比，差異有統計學意義（P<0.001），男性患者組與女性患者組差異無統計學意義（P=0.102）。

表2 男性HPV陽性患者感染狀態與女性組的比較[n（%）]

表3 男性HPV陽性患者不同感染狀態時的感染類型（n）

2.3 男科門診患者HPV感染的年齡分布

男科門診患者及HPV陽性者年齡分布均主要集中于20～29歲和30～39歲階段，其次為40～49歲，50歲以上年齡段相對較少。HPV感染的高峰年齡為20～39歲，占74.75%，各年齡段HPV檢出率差異無統計學意義（P=0.297），見表4。

表4 258例男性就診者HPV感染的年齡分布

2.4 HPV亞型分布情況

37種HPV基因亞型中，男性患者組除HPV57、67、69、83型外，其他亞型均有檢出。男性患者組檢出率位列前5位的是HPV52、58、51、54、61型。女性體檢組和女性患者組除HPV57、69、72、26型外，其他亞型均有檢出，位列前5位的是HPV52、16、58、53、61型。HPV各基因亞型檢出率見表5。

表5 男性患者組與女性體檢組和女性患者組基因亞型分布比較[n（%）]

2.5 男性HPV感染者就診原因

103例男性感染者就診主要原因：健康查體（包括患者性伴侶確診HPV感染主動要求檢測者）75例，占72.82%；生育檢驗15例，占14.56%；不育癥5例，占4.85%；外生殖器炎癥或有贅生物5例，占4.85%；病毒性疣2例，占1.94%；男性勃起障礙1例，占0.97%。

3 討論

HPV能引起人體皮膚及黏膜的鱗狀上皮增生，且不同型別HPV的致病力存在差異，國際癌癥研究協會（International Agency for Research on Cancer，IARC）根據其與腫瘤發生危險性的高低，把HPV亞型分為低危型和高危型，其中低危型HPV感染尤其是HPV6型和HPV11型與外生殖器尖銳濕疣等良性病變有關，高危型HPV持續性感染與女性宮頸癌的發病及男性陰莖癌和口咽癌等病變密切相關[1-5]。HPV感染被認為是男性和女性感染相關癌癥的主要原因之一[1]。本研究主要探討男科門診患者HPV感染及其基因型的分布特點及與女性兩組結果的比較，有助于男性HPV相關性疾病的防治及降低HPV相關腫瘤的發生。

根據流行病學調查發現我國男性HPV的總體感染率與西方國家相比處于較低的水平，且國內普通男性HPV感染情況及基因亞型分布特征存在地區性差異[10]。耿見忠[11]報道貴州地區男性HPV感染率為76.59%；張新鵬等[12]報道北京東南地區男性HPV感染率為64.30%；鐘陽青等[13]報道東莞地區男性HPV感染率為58.33%，與本研究結果存在不同程度的差異。本研究檢測258例男科門診患者樣本，HPV感染率為39.92%，與程連娜等[14]報道麗水地區男性HPV感染情況相似，與其他地區比較處于相對較低的水平，分析原因可能為樣本來源不同，本研究采集樣本多為無癥狀健康體檢或生育檢查患者。本研究顯示HPV陽性樣本中感染HPV高危型占58.25%，與貴州地區及北京東南地區以低危、高危混合感染為主不同，可能為地區性差異[11-12]；本研究以單一亞型感染為主，占57.28%，與東莞地區、麗水地區及海南地區的報道基本一致[13-15]。

本研究顯示男科門診患者及HPV陽性患者年齡均主要集中于20～29歲和30～39歲，HPV感染的高峰年齡為20～39歲，占74.76%，與鐘文英等[16]報道基本一致；各年齡組HPV檢出率差異無統計學意義，但50歲以上患者HPV檢出率較高，因此中老年男性的生殖健康也值得重視。本研究檢測的37種HPV基因亞型中，男性患者組除HPV57、67、69、83型外，其他亞型均有檢出。

目前HPV感染已成為全球最常見的性傳播疾病之一，配偶感染HPV可增加性伴侶被感染的風險，有研究報道配偶宮頸HPV感染男性外生殖器HPV感染率高[6-7]。吳正沐等[17]研究女性HPV感染患者的男性性伴侶感染HPV型別與女方基本一致，吻合率高達97.70%。本研究顯示男性患者HPV感染率和感染類型及感染狀態與女性患者差異無統計學意義，與女性體檢者相比差異有統計學意義，表明除與女性健康體檢者有差異，男性患者與女性患者HPV感染情況基本一致，均以高危型感染為主，且以單一亞型感染為主。女性組除HPV57、69、72、26型外，其他亞型均有檢出，女性組檢出率位列前5位的是HPV52、16、58、53、61型，低危型以HPV61（7.73%）、HPV81（6.45%）、HPV54（5.89%）為常見亞型，高危型以HPV52（22.285）、HPV16（14.92%）、HPV58（11.79%）為常見亞型，與男性患者相比略有不同，這與邵玲俐等[18]研究結果相似。

隨著HPV在人群中篩查工作的開展，研究發現與異性戀男性相比，男男性行為者的口腔和生殖器HPV感染率更高[8-9]。研究表明在男男性行為者中，HPV疫苗接種對預防肛門生殖器和口腔HPV是有效的，尤其是在年輕時接種[19]。2018年10月5日，美國食品藥品監督管理局（Food and Drug Administration，FDA）批準九價HPV疫苗的補充申請，將使用該疫苗的年齡范圍擴大到27～45歲女性和男性成人的接種，而此前九價HPV疫苗只適用于9～26歲女性或男性。近年來，隨著女性HPV感染研究和宮頸癌防治工作的深入，男性HPV疫苗接種也將逐漸引起大家的重視[20]。有研究顯示男性HPV感染可能影響精子活力、增加畸形率，從而降低精液質量，影響男性生育能力，尤其是對單純精子活力減低的原發性不育男性，應當考慮到精液HPV感染的可能并予以檢測[21-22]。

綜上所述，本研究結果顯示男科門診患者HPV感染率較高，以高危型感染為主，且以單一亞型感染為主，感染的高峰年齡為20～39歲，各地區應重視男性HPV感染患者及各基因型的檢測。由于HPV可通過性接觸傳播，因此對男性生殖健康的監測還可降低性伴侶感染HPV的風險，減少HPV相關疾病的發生。本研究采集的樣本量較小，不能完全反映本地區的男性HPV感染情況，因此還需大量數據進一步研究，為男性HPV感染的干預和治療提供科學依據。