支氣管沖洗液細胞塊HE切片及免疫組化染色在肺癌病理診斷與鑒別診斷中的應用價值

史永燦

（山東省濟寧市金鄉縣人民醫院病理科，山東 濟寧 272200）

肺癌是全球范圍內常見的癌癥之一，也是導致癌癥相關死亡的主要原因。臨床上，準確的肺癌病理診斷和鑒別診斷對于制定有效的治療方案和預后評估至關重要。支氣管沖洗液細胞學檢查作為一種無創性的檢查方法，在肺癌的早期診斷、鑒別診斷和療效監測等方面具有廣闊的應用前景。傳統的肺癌組織學診斷通常需要通過活檢獲得組織標本，然后進行石蠟包埋、切片染色等多個步驟，流程繁瑣且耗時[1]。相比之下，支氣管沖洗液細胞學檢查是一種近年來備受關注的研究熱點，尤其是在胸部疾病的早期診斷和鑒別診斷中具有重要的臨床應用前景。該檢查方式是用生理鹽水沖洗患者的肺部，再行回收并對其中的細胞樣本進行細胞學檢測，因其具有簡便無創、侵襲性小等特點，在臨床實踐中備受青睞。如果能夠有效結合支氣管沖洗液細胞學檢查與其他組織學和免疫組化技術，有望為肺癌等疾病的早期診斷和治療提供更加準確和及時的幫助。免疫組化染色是通過特定抗體結合組織中的特定抗原，然后利用化學方法使其呈色，從而對組織中的抗原進行定性定量檢測的技術[2]。免疫組化染色技術在癌癥的診斷和治療中被廣泛應用，對于肺癌的鑒別診斷和分子亞型的判定起著重要作用。結合支氣管沖洗液細胞塊蘇木精- 伊紅（HE）切片和免疫組化染色技術，有望提高肺癌病理診斷的準確性和可靠性[3]?；谶@一研究背景，本研究選取了支氣管沖洗液細胞塊HE 切片和免疫組化染色技術，結合兩者的特點，旨在探討其在肺癌病理診斷及鑒別診斷中的應用價值，為提高肺癌診斷的準確性以及本病的早期干預提供新的思路，推動肺癌的早期診斷和治療取得新的突破，具體研究方法和結果報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

本研究應用隨機抽樣法選取2021 年9 月至2023年9 月期間我院收治的支氣管沖洗液陽性患者118 例作為研究對象，其中包含分型明確與不明確的患者。在這些患者中，有男性患者73 例，女性患者45 例；其最小年齡為49 歲，最大年齡為73 歲，平均年齡為（60.32±9.08）歲。

1.2 方法

1.2.1 儀器設備 本研究所用的儀器設備包括低速離心機（安必平醫藥科技有限公司生產，型號SC-3612）和微量振蕩器等，所有儀器設備在應用前均已完成檢查準備工作，符合實驗標準。

1.2.2 檢查方法 液基薄層細胞學檢查方法：取支氣管沖洗液與檢查保存液，將兩種液體等量均勻混合在一起。取適量的混合液靜置30 min，然后置于振蕩器中進行振動處理，振動時間為10 min。振動結束后將液體倒入離心管中，置于離心機中離心10 min，離心速度為每分鐘1832 r。離心結束后，去除上部分的液體，在剩余液體中加入適量的緩沖液，再次搖晃均勻，并重復離心操作。再次離心完成后振蕩細胞塊，并將其涂抹試劑后放置于制片板上，添加樣本后靜置10 min進行巴氏染色并封片。制備液基細胞塊、HE 切片與免疫組化染色的具體操作步驟如下：（1）液基細胞塊制備：將振動處理后的混合液倒入離心管中，置于離心機中進行離心處理，離心時間為10 min，離心速度為每分鐘1832 r。離心結束后，去除上部分的液體，在剩余液體中加入適量的緩沖液，再次搖晃均勻，重復離心操作。再次離心完成后，振蕩細胞塊，將其涂抹在制片板上。（2）HE 切片制備：將涂抹好細胞塊的制片板放入切片機中，切取適當厚度的切片，然后將切片放入染色缸中，進行HE 染色。染色結束后，用封片膠封片，晾干備用。（3）免疫組化染色：將染色后的切片放入抗原修復液中，進行抗原修復。修復結束后，用磷酸緩沖鹽水（PBS）沖洗切片，然后將切片放入含有第一抗體的孵育盒中，4 ℃孵育過夜。次日，用PBS 沖洗切片，再將切片放入生物素化二抗的孵育盒中，室溫孵育1 ～2 h。用PBS 沖洗切片，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素，室溫孵育1 ～2 h。最后，用DAB 顯色劑進行顯色，觀察切片的染色效果。若需要進一步加深染色，可加入適量復染劑（如蘇木精）進行復染。染色結束后，用封片膠封片，晾干備用。本研究中所用的抗體包括：Ki-67、TTF-1、CK7、Syn、CD56、p63、CK5/6、Naspin-A。

1.3 觀察指標

觀察并比較液基薄層細胞學檢查與支氣管沖洗液細胞塊HE 切片及免疫組化染色檢查的肺癌分型檢出率。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0 軟件進行數據的統計分析與處理，計數資料以% 表示，用χ2 檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

對118 例支氣管沖洗液陽性患者進行液基薄層細胞學檢查，發現肺鱗狀細胞癌患者43 例，肺腺癌患者7 例，小細胞肺癌患者19 例，肺癌分型檢出率為58.47% ；對118 例支氣管沖洗液陽性患者進行支氣管沖洗液細胞塊HE 切片及免疫組化染色檢查，發現肺鱗狀細胞癌患者57 例，肺腺癌患者25 例，小細胞肺癌患者19 例，肺癌分型檢出率為85.59%。相較于液基薄層細胞學檢查，支氣管沖洗液細胞塊HE 切片及免疫組化染色檢查的肺癌分型檢出率更高，差異有統計學意義P＜0.05）。詳見表1。

表1 兩種檢查方法的肺癌分型檢出率

3 討論

肺癌是臨床常見的癌癥之一，是肺部細胞異常增殖所形成的惡性腫瘤。肺癌通常分為兩種類型：小細胞肺癌和非小細胞肺癌。其中小細胞肺癌是一種侵襲性較強的癌癥，在確診時多已經擴散至其他部位。而非小細胞肺癌則更為常見，占肺癌總數的80% ～85%。肺癌的主要病因是吸煙，過度吸煙會增加罹患肺癌的風險。暴露于二手煙、空氣污染、放射線和臭氧等環境中也會增加肺癌的發病風險。此外，家族遺傳因素、一些化學藥物、石棉等也可能引起肺癌[4]。肺癌早期通常無明顯癥狀，隨著病情的惡化，患者可能出現咳嗽、咳痰、咯血、呼吸困難、胸痛、聲音嘶啞、體重減輕等癥狀?；颊咭坏┏霈F上述癥狀，應盡快就醫并進行相應檢查[5]。根據肺癌的類型、分期以及患者的身體狀況，可選擇手術、放療、化療、靶向治療、免疫治療等治療方案。手術是治療肺癌的常見方式，通過手術可將腫瘤切除。放療和化療可以有效控制腫瘤的擴散和生長。靶向治療和免疫治療是近年來新興的治療方式，通過干擾腫瘤細胞的生長、增強機體免疫功能來治療肺癌[6]。肺癌患者的預后取決于多種因素，包括腫瘤類型、分期、患者的年齡和健康狀況等。早期診斷和綜合治療對于改善患者的預后具有重要意義。然而，由于肺癌的發病風險較高且早期通常無癥狀，大多數肺癌患者在確診時已進展至晚期，因此其治療難度非常大?？傮w來說，肺癌是一種常見且危險的癌癥，可給患者的身心健康造成極大的影響。近年來隨著醫療技術的進步和治療手段的不斷改進，肺癌患者的生存率和生活質量均有了較大的提高。早期診斷和綜合治療是控制肺癌進展的關鍵，希望通過不懈的努力，肺癌能夠早日得到有效控制和治療[7]。

薄層細胞學在纖維支氣管鏡檢查中應用廣泛，可以幫助診斷活檢鉗無法到達的部位，從而提高陽性診斷率。然而，在細胞學診斷中，特別是對于分化差的癌癥，有時形態上存在相似點，例如非角化型鱗癌和腺癌都可能出現明顯的核仁，可以是單個散在或者松散成群，僅憑形態很難做出準確的診斷，經?；\統地診斷為非小細胞肺癌[8]。一方面，這可能是由于診斷醫師的經驗不足，另一方面，細胞學本身存在著一定的局限性。通過使用HE 切片和免疫組化染色法，可以彌補上述檢測方法的不足。細胞塊HE 切片及免疫組化染色是一種在病理學診斷中廣泛應用的檢查方法，該方法通過對細胞塊進行HE 染色和免疫組化染色，觀察細胞形態學和抗原性的變化，能夠對疾病進行診斷和鑒別診斷。HE 染色是一種常用的組織染色方法，分別染色細胞核和細胞質，從而呈現細胞形態和組織結構[9]。蘇木精與細胞核中的核酸結合后，會使細胞核呈現藍色；伊紅則與細胞質中的蛋白質結合，使細胞質呈現紅色。這種染色方法能夠清晰地顯示組織細胞的形態和結構，便于病理學家觀察和診斷。HE 切片廣泛應用于肺癌、乳腺癌、胃癌、結直腸癌等惡性腫瘤的病理診斷中。通過觀察細胞形態學和結構的變化，可以對腫瘤的良惡性、分化程度、侵襲性和轉移性等進行評估，為臨床治療提供重要依據。免疫組化染色是一種檢測特定抗原或抗體表達的方法，應用于各種腫瘤和炎癥性疾病的診斷中。通過檢測特定抗原或抗體的表達，可以評估腫瘤的分子分型、預后和治療策略。同時還可以協助鑒別病原體、評估疾病的活動度及指導治療方案。研究發現，細胞塊HE切片及免疫組化染色具有高分辨率和敏感性，能夠清晰地顯示細胞形態學和抗原性的變化，這使得病理學家能夠對疾病進行精確的診斷和鑒別診斷，提高臨床診斷和治療的準確性。細胞塊HE 切片及免疫組化染色可以提供豐富的病理學信息，包括細胞形態、組織結構、抗原表達等，這些信息有助于臨床醫生全面了解患者的病情，為治療方案的制定提供更多依據[10]。

本研究采用先行HE 切片、再開展免疫組化染色的方法，旨在達到定位腫瘤細胞的效果，利于肺癌的病理診斷與鑒別診斷。在實際操作過程中，若發現患者的癌細胞數量較少或幾乎沒有，可以省略免疫組化染色步驟，從而提高檢測效率。在完成切片和染色后，通過抗體組合染色，可以對患者的腫瘤病理情況進行詳細分析。本研究中，不同分型的肺癌患者表現出差異化的染色結果，經支氣管沖洗液細胞塊HE 切片及免疫組化染色，肺癌分型檢出率達到85.59%，而液基薄層細胞學檢查的肺癌分型檢出率僅為58.47%，明顯體現出前者的優越性。深入分析這一結果，首先，HE 切片和免疫組化染色的組合能夠更準確地定位腫瘤細胞，為病理診斷和鑒別診斷提供有力支持。尤其是在癌細胞數量較少的情況下，免疫組化染色能夠提高檢測的準確性，避免誤診和漏診。其次，抗體組合染色能夠針對不同的腫瘤類型，呈現出特定的染色結果，為腫瘤分型提供依據。本研究中，抗體組合染色分型檢出率達到85.59%，顯著高于液基薄層細胞學檢查的58.47%。這說明抗體組合染色在腫瘤診斷方面的敏感性和特異性較高，有助于臨床醫生對患者進行精細化管理。此外，本研究方法還具有以下應用優勢：一方面，通過HE 切片和免疫組化染色的優化組合，可以降低檢測成本，提高檢測效率。另一方面，抗體組合染色能夠滿足臨床對腫瘤診斷的精準性需求，有助于提高患者的治療效果和生存率。需要注意的是，小細胞肺癌的惡性程度較高，因此Ki-67 的表達具有較高的參考價值。在腫瘤細胞較少的情況下，如果考慮為小細胞肺癌，需要與淋巴瘤進行鑒別，并借助PAX-5 進行診斷分析。

綜上所述，支氣管沖洗液細胞塊HE 切片及免疫組化染色在肺癌病理診斷和鑒別診斷中具有較高的應用價值，能夠為臨床醫生提供可靠的診斷依據，值得在臨床上廣泛應用。