KRAS、NRAS及BRAF基因突變狀態(tài)對結(jié)直腸癌術(shù)后輔助化療患者預(yù)后的影響

譚晶,高波

(駐馬店市中心醫(yī)院 病理科,河南 駐馬店 463000)

以手術(shù)為主、化療為輔的綜合治療是目前結(jié)直腸癌的常見治療方法,先通過外科手術(shù)將腫瘤病灶及周圍部分腸管切除,再通過術(shù)后輔助化療消除患者體內(nèi)殘余癌細(xì)胞,可緩解因腫瘤導(dǎo)致的腹痛、便秘等不適癥狀,挽救患者生命[1-2]。但有研究指出,結(jié)直腸癌患者術(shù)后殘留的部分具有Mex3a蛋白活性的腫瘤干細(xì)胞,可通過保持潛伏狀態(tài)來躲避化療藥物,并于化療結(jié)束后某段時間內(nèi)自動激活,導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,不利于結(jié)直腸癌患者的預(yù)后[3]。隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)具有Mex3a蛋白活性的腫瘤干細(xì)胞需通過相關(guān)信號傳導(dǎo)通路來完成細(xì)胞增殖[4]。而KRAS、NRAS及BRAF基因是腫瘤細(xì)胞增殖過程信號通路上的激酶[5]。因此,或可通過研究上述基因的突變狀態(tài)來預(yù)估結(jié)直腸癌患者復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,通過采取分子靶向藥物提前干預(yù),阻斷與腫瘤生長和轉(zhuǎn)移相關(guān)信號傳導(dǎo)通路,抑制腫瘤細(xì)胞復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,改善預(yù)后。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集駐馬店市中心醫(yī)院于2019年3月至2021年12月收治的65例結(jié)直腸癌患者病例資料進(jìn)行回顧性研究。65例患者中男42例,女23例;年齡51～68歲,平均(60.32±3.21)歲;原發(fā)部位直腸19例,左半結(jié)腸27例,右半結(jié)腸19例;組織學(xué)類型腺癌48例,其他17例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合《中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2017版)》[6]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn),且經(jīng)病理學(xué)檢查確診;(2)臨床分期Ⅱ～Ⅲ期;(3)接受結(jié)直腸癌外科手術(shù)治療;(4)術(shù)后已完成4個周期的輔助化療;(5)術(shù)后接受KRAS、NRAS及BRAF基因檢測;(6)臨床病歷及隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)術(shù)后化療未按時參加或曾中途中斷;(2)合并其他惡性腫瘤;(3)手術(shù)與化療未全程于醫(yī)院完成;(4)術(shù)前已接受放療。本研究經(jīng)駐馬店市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 方法

1.2.1一般資料收集

設(shè)計一般資料調(diào)查表,通過查閱電子病歷統(tǒng)計所有患者性別、年齡、體重、腫瘤直徑、原發(fā)部位、組織學(xué)類型、大體類型、臨床分期、腫瘤分化程度、手術(shù)方式。

1.2.2基因突變檢測

取經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋的結(jié)直腸癌標(biāo)本,通過艾德FFEP DNA/RNA核酸提取試劑提取DNA,通過熒光PCR法檢測標(biāo)本中KRAS、NRAS及BRAF基因突變情況,檢測區(qū)段為KRAS(外顯子2、外顯子3、外顯子4)、NRAS(外顯子2、外顯子3)、BRAF(外顯子15),檢測試劑盒為人類KRAS/NRAS/BRAF基因突變聯(lián)合檢測試劑盒,其中擴(kuò)增程序圖分為3個階段,第一階段1個循環(huán),溫度為95 ℃,時間5 min;第二階段共15個循環(huán),以溫度95 ℃循環(huán)25 s,64 ℃循環(huán)20 s,72 ℃循環(huán)20 s;第三階段共31個循環(huán),以溫度93 ℃循環(huán)25 s,60 ℃循環(huán)35 s,72 ℃循環(huán)20 s。在第三階段溫度60 ℃時,采集信號并記錄循環(huán)數(shù)閾值值,若信號出現(xiàn)明顯擴(kuò)增曲線且ct值<26,則檢測結(jié)果為KRAS、NRAS及BRAF基因突變型,其余為野生型。

1.2.3結(jié)直腸癌化療后預(yù)后判定

通過查閱隨訪資料,統(tǒng)計所有患者化療結(jié)束后1 a內(nèi)是否復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,將復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移病例納入預(yù)后不良組,其余病例納入預(yù)后良好組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 預(yù)后情況

術(shù)后1 a,65例結(jié)直腸癌術(shù)后輔助化療患者中預(yù)后良好55例(84.62%);預(yù)后不良10例(15.38%)。

2.2 一般資料

兩組性別、原發(fā)部位、組織學(xué)類型、腫瘤分化程度等一般資料對比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 兩組一般資料對比

2.3 KRAS、NRAS及BRAF基因突變情況

65例患者中KRAS基因突變24例(36.92%);NRAS基因突變5例(7.69%);BRAF基因突變4例(6.15%)。不同預(yù)后KRAS、NRAS及BRAF基因突變狀態(tài)對比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同預(yù)后患者KRAS、NRAS及BRAF基因突變情況

2.4 KRAS、NRAS及BRAF基因突變狀態(tài)對結(jié)直腸癌術(shù)后輔助化療患者預(yù)后的影響

將KRAS、NRAS及BRAF基因突變狀態(tài)作為自變量,賦值情況見表3;將結(jié)直腸癌術(shù)后輔助化療患者預(yù)后作為因變量(預(yù)后良好=0,預(yù)后不良=1)。logistic回歸分析結(jié)果顯示,KRAS、NRAS及BRAF基因突變型可影響結(jié)直腸癌術(shù)后輔助化療患者預(yù)后(P<0.05)。見表4。

表3 自變量賦值情況

表4 KRAS、NRAS及BRAF基因突變狀態(tài)對結(jié)直腸癌術(shù)后輔助化療患者預(yù)后的影響

3 討論

越來越多的研究表明,癌癥的產(chǎn)生、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移與患者某些基因異常突變密切相關(guān)[7-8]。基因突變狀態(tài)的檢測可便于醫(yī)者更為深入地了解癌癥的產(chǎn)生和繁殖過程,為個性化治療方案的制定和實(shí)施提供有力依據(jù)。結(jié)直腸癌中KRAS、NRAS及BRAF基因是癌細(xì)胞繁殖過程中最常見的3種突變基因。本研究結(jié)果顯示,KRAS和NRAS基因突變型與結(jié)直腸癌術(shù)后化療不良預(yù)后有關(guān)。分析原因,可通過產(chǎn)生RAS蛋白來抑制腫瘤細(xì)胞的繁殖和生長[9],當(dāng)KRAS基因發(fā)生突變后,RAS蛋白上的酶活性被降低,可通過反復(fù)刺激靶分子使KRAS基因處于永久激活狀態(tài),打破細(xì)胞的正常生長規(guī)律,并使細(xì)胞內(nèi)部信號傳導(dǎo)紊亂、細(xì)胞大量增殖并最終誘發(fā)結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,不利于預(yù)后[10-11]。此外,隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)KRAS基因和NRAS基因突變還可使腫瘤相關(guān)啟動子出現(xiàn)異常甲基化改變[12]。而基因異常甲基化改變會通過降低患者體內(nèi)正常細(xì)胞基因的甲基化水平,升高抑癌基因的甲基化水平來激活結(jié)直腸癌體內(nèi)原癌基因,并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生、增殖、分化和轉(zhuǎn)移,最終導(dǎo)致腫瘤病灶再次出現(xiàn)[13]。因此,對于KRAS和NRAS基因突變型結(jié)直腸癌患者,可于術(shù)后化療過程中聯(lián)合貝伐珠單抗、瑞格非尼等可抑制腫瘤細(xì)胞增殖、阻斷原癌基因表達(dá)的分子靶向藥物,以降低結(jié)直腸癌術(shù)后化療復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險,改善預(yù)后。

BRAF基因可通過使下游信號蛋白中的絲氨酸或蘇氨酸基團(tuán)磷酸化來將外部信號介導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)部,抑制異常的細(xì)胞增殖[14]。本研究結(jié)果顯示,BRAF基因突變型的結(jié)直腸癌術(shù)后化療患者,復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率非常高,提示BRAF基因突變狀態(tài)影響結(jié)直腸癌患者的預(yù)后。分析原因,BRAF基因突變后激酶活性被增強(qiáng)至以前的幾百倍,持續(xù)性激活RAF/絲裂原活化蛋白激酶信號通路后引起化療后殘留的少許腫瘤細(xì)胞無限增殖、分化和代謝,形成復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移病灶,不利于結(jié)直腸癌患者的預(yù)后[12,15]。此外,作為最常見的原癌基因,BRAF基因突變型可通過激活激活RAF-MEK-ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來阻斷正常細(xì)胞間的信號傳遞鏈,并誘發(fā)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榘┘?xì)胞,是腫瘤發(fā)生、浸潤或轉(zhuǎn)移的重要驅(qū)動因素[16]。因此,對于BRAF基因突變型的結(jié)直腸癌患者,癌細(xì)胞可能會在短時間內(nèi)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散,如不采取措施及時中斷BRAF基因活性,即使經(jīng)手術(shù)和化療殺滅體內(nèi)所有癌細(xì)胞,化療后也有較高復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移率。可通過應(yīng)用相關(guān)靶向藥物、擴(kuò)大手術(shù)范圍、縮短隨訪時間等方式來降低術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移率,改善預(yù)后。

4 結(jié)論

KRAS、NRAS及BRAF基因突變型可對結(jié)直腸癌術(shù)后輔助化療患者不良預(yù)后產(chǎn)生影響,臨床根據(jù)NRAS和BRAF基因突變狀態(tài)采取適當(dāng)措施干預(yù),改良預(yù)后。