吡非尼酮浸泡生物羊膜對兔青光眼模型濾過術后瘢痕形成的作用

張 帥,姚貽華,鄭揚菁,吳 平,朱益華

0引言

青光眼濾過術是目前治療青光眼的主要方式之一,盡管近年來青光眼濾過術有了很大進步與改良,但術后過度纖維增殖、瘢痕形成引起濾過通道堵塞而導致的手術失敗仍屢見不鮮。術中應用抗增殖藥物是防止青光眼濾過術后濾過通道纖維瘢痕化的重要手段[1]。臨床常用的術中抗增殖藥物主要有絲裂霉素C(mitomycin C,MMC)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)[2-3],但這些藥物的抗增殖作用持續時間較短,且局部應用所引起的術后并發癥不容忽視,術后低眼壓、濾過泡漏、術后感染甚至眼內炎導致失明等嚴重并發癥時有發生[4-6]。因此,尋求一種安全有效又毒副反應小的藥物或更優給藥方式以延長抗增殖作用的持續時間,從而達到更高的手術成功率仍是臨床上期待解決的問題。吡非尼酮(Pirfenidone,PFD)是一種新型的廣譜抗纖維化藥物,能夠有效防止和控制瘢痕的形成[7]。作為一種新型小分子抗代謝藥物,其具有廣譜的抗炎抗纖維化作用,能抑制膠原合成,下調多種細胞因子的產生,以及阻止成纖維細胞增殖,從而達到抗瘢痕的效果[8]。Kasar等[9]研究發現PFD可作為青光眼濾過術中抗增殖藥物MMC的有效替代藥物,而Westermeyer等[10]研究則表明0.5%PFD可以有效對抗青光眼濾過術后結膜的纖維化,且副作用很小,可以長期應用。羊膜作為眼科常用的生物材料,在多種角結膜眼病的治療中應用廣泛[11]。近年來,羊膜在青光眼濾過術中的應用愈發成熟[12],而羊膜移植聯合小梁切除術是其在青光眼濾過術中最常見的應用[13],且安全性與有效性均得到很好驗證[6]。然而,目前對于羊膜在青光眼濾過術中的應用研究多集中在促進上皮生長、抗炎、抗纖維化、抗菌及低免疫源性等生物學方面,而對于其機械結構相關的應用則鮮有報道,其5層海綿狀的微觀結構,使其可以像海綿一樣吸附容納一定的藥物,成為優良的釋藥系統[14]。目前,關于PFD浸泡生物羊膜在青光眼濾過術中的抗瘢痕作用尚不明確,本研究擬將PFD浸泡生物羊膜用于兔青光眼模型濾過術中,評價其在濾過術后的抗瘢痕效果及安全性,探討青光眼濾過區瘢痕化治療給藥的新途徑。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1實驗動物和分組72只清潔級成年同種系新西蘭白兔,雌雄不限,體質量2.5-3.0 kg,8-12周齡,裂隙燈顯微鏡檢查眼前節排除眼部疾病,由福建醫科大學實驗動物中心提供,在相同環境下適應性飼養1 wk,動物飼養房和清潔級環境均達標準條件(濕度40%,溫度18-25 ℃,光照與黑暗時間分別是12 h)。以右眼為實驗眼,72只實驗兔全麻下右眼(72眼)前房注入0.3%卡波姆溶液0.1 mL誘導青光眼模型,造模成功后隨機分為0.5%PFD+生物羊膜組、單純生物羊膜組、MMC組和空白對照組,每組實驗兔18只18眼。實驗遵循國家科學技術委員會發布的《實驗動物管理條例》,遵從《善待實驗動物的指導性意見》的相關倫理學規定,經福建醫科大學附屬第一醫院醫學倫理委員會醫學研究與臨床技術應用分會審核批準{批文號:閩醫大附一倫理醫研[2019]060號}。

1.1.2主要試劑和儀器主要試劑:PFD粉末(美國Sigma公司);生物羊膜(江西瑞濟生物工程技術有限公司);卡波姆940(山東正大福瑞達藥業集團);戊巴比妥鈉粉末(德國Merck公司),用生理鹽水制成3%戊巴比妥鈉溶液備用;MMC粉末(日本協和發酵工業株式會社),配成0.2 mg/mL備用;轉化生長因子(TGF)-β1親和純化兔抗體(sc-146,美國Santa Cruz公司)。主要儀器:回彈式眼壓計(SW500,天津索維電子科技有限公司);光學顯微鏡(日本Olympus 公司);裂隙燈顯微鏡(蘇州六六視覺股份有限公司);石蠟組織包埋機與切片機(德國Leica公司)。

1.2方法

1.2.1兔青光眼模型的制備采用前房注射復方卡波姆溶液的方法建立兔青光眼模型[15]。將150 mg卡波姆940粉末與12.5 mg地塞米松磷酸鈉粉末溶于50 mL生理鹽水中,制成含0.3%卡波姆和0.025%地塞米松的復方卡波姆溶液。采用3%戊巴比妥鈉注射液4-5 mL肌肉注射全麻成功后,以右眼為實驗眼,于顳上方位角膜緣處用1 mL注射器針頭進針,抽取0.1 mL房水然后在前房瞳孔區注入等量的0.3%復方卡波姆溶液,術畢氧氟沙星眼膏點眼。操作均由同一位醫生完成。造模成功的標準[15]:眼壓穩定升高(>22 mmHg),持續時間>1 wk視為造模成功,期間眼壓下降者可重復注射0.3%復方卡波姆溶液1次。

1.2.2兔青光眼模型濾過術的實施青光眼濾過術前取10 mg PFD粉末溶于2 mL超純水中,制成濃度為5 mg/mL(0.5%)PFD溶液,將干燥生物羊膜(4 mm×5 mm)于無菌操作下浸泡于2 mL PFD溶液中5-10 min。所有實驗兔均在造模成功后進行小梁切除術。麻醉方法同青光眼模型的制備,無菌生理鹽水沖洗后常規消毒鋪巾,開瞼器開瞼,上直肌縫線固定,制作以穹窿部為基底的結膜瓣及3 mm×4 mm 1/2厚度的鞏膜瓣,分離至角膜透明區內1 mm,穿刺進入前房,緩慢放出房水,剪除約1 mm×2 mm相當于小梁的深層鞏膜組織,并行虹膜根部切除,0.5%PFD+生物羊膜組在鞏膜瓣下放置上皮層朝上4 mm×5 mm大小的PFD溶液浸泡的生物羊膜,單純生物羊膜組在鞏膜瓣下放置上皮層朝上4 mm×5 mm大小的生理鹽水浸泡的復水生物羊膜,羊膜前端距小梁切口后緣1 mm,10-0尼龍線將羊膜在鞏膜瓣兩角各縫合1針,MMC組在鞏膜瓣下放置浸有0.2 mg/mL MMC的棉片3 min后立即采用生理鹽水沖洗,空白對照組制作鞏膜瓣后,不放入任何植入物,后續依次縫合鞏膜瓣與結膜瓣完成手術,術后氧氟沙星眼膏涂眼。手術均由同一位醫生完成。

1.2.3臨床觀察指標

1.2.3.1眼壓情況分別于造模前、造模后1、3、7、10 d,濾過術后1、3、7、14、21、28 d于清醒狀態下采用回彈式眼壓計測量術眼眼壓,測量3次取平均值。

1.2.3.2濾過泡情況根據Kronfeld濾過泡形態和功能分型法[16],將濾過泡分為4型:Ⅰ型(微小囊泡型):薄壁、無血管、多呈微囊狀;Ⅱ型(扁平彌散型):扁平、彌散、蒼白狀、相對壁厚;Ⅲ型(瘢痕型):無濾過泡,結膜充血微隆起,結膜下廣泛黏連,在鞏膜表面多血管外觀;Ⅳ型(包裹型):局部圓頂狀隆起,呈囊狀增生,成為致密的球筋膜空腔。Ⅰ、Ⅱ型為功能性濾過泡,Ⅲ、Ⅳ型無功能濾過泡,記錄功能性濾過泡的生存時間。

1.2.3.3毒副作用和并發癥情況濾過術后1、3、7、14、28 d采用裂隙燈顯微鏡檢查術眼情況,觀察有無結膜漏、角膜潰瘍、淺前房、低眼壓等并發癥。為便于準確觀察,將前房內炎癥反應予以分級,分級標準:0級為無細胞或光斑;1級為輕度,輕度到中度細胞或光斑;2級為中度,大量細胞和光斑,但無纖維素滲出;3級為顯著,纖維素滲出較多;4級為重度,纖維素滲出非常多。淺前房定義為術后1 d未形成前房或前房形成數天后又消失。前房深度分級標準[17]:淺Ⅰ級,全周前房極淺,周邊前房呈裂隙狀小于1/5角膜厚度;淺Ⅱ級:可分a、b兩型,Ⅱa級:僅虹膜小環以內有極淺前房,Ⅱb級:僅瞳孔區內有極淺前房;淺Ⅲ級:虹膜、晶狀體全部與角膜相貼,前房完全消失。

1.2.4病理學檢查

1.2.4.1組織標本的制備濾過術后28 d,各組隨機選取6只實驗兔于耳緣靜脈注射過量戊巴比妥鈉溶液實施安樂死,立即摘除右眼眼球放入福爾馬林液中固定48 h,剪取濾過區組織(結膜、鞏膜)4 mm×2 mm后依次浸入70%、80%、95%、95%、100%、100%乙醇各40 min進行梯度脫水,并垂直角膜緣方向石蠟包埋后以4 μm厚連續切片,制成石蠟切片,4 ℃保存備用。

1.2.4.2HE染色取石蠟切片按照福建醫科大學附屬第一醫院病理科標準操作流程在不同濃度二甲苯及無水乙醇中固定脫蠟后進行蘇木精-伊紅(HE)染色,并脫水透明樹膠封片,在100倍光學顯微鏡下觀察濾過區增生情況,炎癥細胞為球形,成纖維細胞為長條狀,細胞核藍色深染,每張切片隨機選擇5個視野,記數成纖維細胞和炎癥細胞數量,取平均值,拍照并記錄數據。

1.2.4.3Masson染色取石蠟切片同HE染色步驟脫蠟后進行蘇木精、麗春紅及苯胺藍染色,脫水透明樹膠封片,在100倍光學顯微鏡下觀察膠原纖維增生情況,藍色為膠原纖維,細胞質、肌纖維和紅細胞呈紅色,細胞核呈藍褐色,拍照采集圖像。

1.2.4.4免疫組織化學染色取石蠟切片同HE染色步驟脫蠟后進行磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗、抗原修復、血清封閉、滴入稀釋后的兔抗兔TGF-β1多克隆抗體(工作濃度1∶100),室溫孵育后滴加DAB顯色劑顯色,并脫水透明樹膠封片。每張切片隨機選取5個視野,在400倍光學顯微鏡下觀察TGF-β1抗原表達情況,以細胞漿顯深棕色為強陽性反應,淡黃色為弱陽性反應,呈細顆粒狀或彌漫性分布,拍照并采集圖像,采用Image J圖像分析系統獲取TGF-β1陽性細胞光密度值,取平均值。

2結果

2.1眼壓情況造模前,4組實驗兔右眼眼壓基本一致,差異無統計學意義(F=0.417,P=0.741)。造模后1 d,4組實驗兔右眼眼壓即開始升高,于造模后2、4 d分別有5、3只實驗兔右眼眼壓較前降低,且前房白色絮狀混濁反應消失,故分別給予重復注射0.3%復方卡波姆溶液1次,繼續監測所有實驗兔右眼眼壓,造模后10 d眼壓皆可達26-31 mmHg,且4組實驗兔右眼眼壓基本一致,差異無統計學意義(F=0.107,P=0.956,表1),表明造模成功。

表1 各組造模前后眼壓比較

濾過術后1、3、7、14、21、28 d,4組實驗兔右眼眼壓比較,具有時間差異性、組間差異性及交互效應(F時間=405.145,F組間=417.86,F時間×組間=9.405,均P<0.001,表2)。濾過術后1、3、7 d,4組實驗兔右眼眼壓比較,MMC組<0.5%PFD+生物羊膜組<單純生物羊膜組<空白對照組,差異均有統計學意義(P<0.01);濾過術后14、21、28 d,4組實驗兔右眼眼壓比較,0.5%PFD+生物羊膜組

表2 各組濾過術后眼壓比較

2.2濾過泡情況濾過術后1 d,4組實驗兔右眼濾過泡均呈現扁平彌散外觀,而隨著觀察時間的延長,各組實驗兔右眼濾過泡出現不同變化。0.5%PFD+生物羊膜組與MMC組于濾過術后28 d時仍可見功能性濾過泡,且0.5%PFD+生物羊膜組較MMC組隆起更明顯,新生血管更少,而空白對照組與單純生物羊膜組分別于濾過術后14、21 d變為無功能濾過泡。Kaplan-Meier生存分析曲線顯示,4組實驗兔右眼濾過術后濾過泡存活率具有明顯統計學差異(log rank=16.803,P=0.01,圖1)。

圖1 各組濾過術后濾過泡的Kaplan-Meier生存分析曲線。

2.3毒副作用和并發癥情況濾過術后28 d內,4組實驗兔右眼結膜均可見不同程度的充血及角膜混濁與水腫,但均未出現明顯的結膜漏、角膜潰瘍及淺前房等并發癥,前房存在不同程度的炎癥反應,各組間炎癥反應情況差異無統計學意義(H=2.250,P=0.522,表3)。

表3 濾過術后28 d內各組前房炎癥反應情況比較 眼

2.4病理學檢查情況HE染色結果顯示,濾過術后28 d,4組實驗兔右眼濾過區炎癥細胞和成纖維細胞數量差異均有統計學意義(P<0.001,圖2,表4),其中0.5%PFD+生物羊膜組實驗兔右眼濾過區成纖維細胞和炎癥細胞數量均較單純生物羊膜組、MMC組與空白對照組更少,差異均有統計學意義(P<0.05);單純生物羊膜組與MMC組、空白對照組比較,差異均有統計學意義(P<0.05);MMC組與空白對照組比較,差異有統計學意義(P<0.001)。

圖2 各組濾過術后28 d濾過區病理變化 黑箭頭示炎癥細胞,黃箭頭示成纖維細胞,紅箭頭示TGF-β1陽性細胞。

Masson染色結果顯示,濾過術后28 d,0.5%PFD+生物羊膜組實驗兔右眼濾過區可見中等量的膠原纖維增生,顏色淺,膠原之間排列整齊;單純生物羊膜組可見大量膠原纖維組織增生,顏色深,膠原之間排列密集;MMC組可見較多量膠原纖維增生,顏色略深,膠原之間排列仍規則,稍緊密;空白對照組可見大量膠原纖維增生,顏色深,膠原纖維紊亂排列,并形成密集瘢痕(圖2)。

免疫組織化學染色結果顯示,濾過術后28 d,0.5%PFD+生物羊膜組實驗兔右眼濾過區著染TGF-β1細胞漿面積小,顏色淺;單純生物羊膜組可見較多量細胞漿著染TGF-β1,顏色深;MMC組可見細胞漿中等量著染TGF-β1,顏色較深;空白對照組可見細胞漿大量著染TGF-β1,顏色深。4組實驗兔右眼濾過區TGF-β1陽性細胞光密度值差異有統計學意義(P<0.001,圖2,表4),其中0.5%PFD+生物羊膜組實驗兔右眼濾過區TGF-β1陽性細胞光密度值較單純生物羊膜組、MMC組與空白對照組更小,差異均有統計學意義(P<0.05);單純生物羊膜組與MMC組、空白對照組比較,差異均有統計學意義(P<0.05);MMC組與空白對照組比較差異有統計學意義(P<0.001)。

3討論

研究表明,青光眼濾過術后濾過通道堵塞的主要原因是濾過區成纖維細胞持續增殖,以葡萄糖胺聚糖和膠原為主的細胞外基質的形成與沉積,導致結膜下組織纖維發生瘢痕化,最終引起濾過術所建立的外引流通道變得狹窄甚至完全關閉[18]。而TGF-β、血小板衍化生長因子(PDGF)和血管內皮生長因子(VEGF)等細胞因子的過度表達在青光眼濾過術后瘢痕形成過程中扮演關鍵作用,這些細胞因子可以誘導成纖維細胞的活化與增殖,并向受損組織遷移,導致纖維化的產生[19]。Zhu等[20]研究通過分離青光眼濾過術后結膜囊成纖維細胞進行培養,證實TGF-β可促進成纖維細胞過度活化,導致細胞增殖、遷移和細胞外基質合成,瘢痕出現,而通過對TGF-β進行調控則可抑制其對成纖維細胞的激活作用。Millá等[21]發現青光眼濾過術后濾過區增殖明顯的患者結膜囊成纖維細胞培養液中VEGF與TGF-β濃度比正常人明顯升高。而Sun等[22]發現在青光眼濾過術后結膜下注射抗VEGF藥物康柏西普可提高濾過泡存活率。因此,通過抑制TGF-β、PDGF及VEGF等細胞因子進而抑制成纖維細胞增殖和向受損組織遷移將減少纖維化及瘢痕的形成,達到抗青光眼濾過術后濾過區瘢痕化的效果。臨床實踐與研究發現,建立青光眼濾過術的實驗模型有助于了解術后切口愈合過程,進而揭示瘢痕形成的原因,而兔是青光眼濾過術實驗模型最常用的動物,因其角膜平均水平徑與人眼非常接近,可以在兔眼上進行與人眼一樣的青光眼濾過術[23],且在濾過術中或術后應用抗增殖藥物、濾過術中在結膜瓣與鞏膜瓣下植入生物材料機械隔離濾過區結膜與鞏膜及對給藥方式進行改良讓抗增殖藥物在濾過區存留時間盡可能延長是對抗青光眼濾過術后濾過區瘢痕形成的有效措施[19]。故本實驗對兔進行青光眼造模后施行經典的小梁切除術,觀察青光眼濾過術后眼壓、濾過泡、毒副作用及并發癥等指標,并對濾過區組織進行病理檢查[24]。

PFD作為有效的細胞因子抑制劑,其可通過下調肝、腎、肺等多種器官纖維化過程中成纖維細胞生長因子(bFGF)、TGF-β、結締組織生長因子(CTGF)、PDGF等多種細胞因子的活化與表達,從而降低成纖維細胞的生物學活性,引起基質膠原合成被抑制與細胞增殖的減少,進而發揮抗瘢痕作用[25-31],并可通過抑制白介素(IL)-6等炎性介質及腫瘤壞死因子(TNF)-α的分泌發揮抗炎效果[32]。PFD還可通過抑制Ⅰ型與Ⅲ型膠原蛋白的表達達到抗纖維化的作用[33]。特發性肺纖維化是其目前主要臨床適應證,研究亦證實PFD對心臟、腎臟及肝臟的纖維化和多發性硬化癥等纖維化疾病有較好的療效[29]。在眼科領域,PFD也被證實可通過上述途徑發揮其優良的抗纖維化作用[34]。陳旭等[35]進行的體外實驗結果顯示,通過下調TGF-β/Smad通路中TGF-β3的表達,PFD可以抑制兔Tenons囊成纖維細胞增殖。Jung等[36]將PFD應用于Ahmed青光眼引流閥植入術后的兔眼,通過對濾過泡組織進行HE染色、Masson染色及免疫組織化學染色發現PFD可以抑制TGF-β及CTGF的活化,減少膠原沉積,并提出PFD可作為青光眼術后抗增殖的有效手段。Sun等[37]對兔眼局部使用PFD后發現0.5%的PFD是一個比較安全有效的濃度。Zhong等[38]發現在兔青光眼模型濾過術后滴用0.5%的PFD滴眼液可提高小梁切除術后濾過泡的存活率,進一步證明PFD可能成為青光眼濾過術中有效且安全的抗瘢痕藥物。

羊膜存在于胎盤的最內層,薄且透明,不含神經、血管和淋巴組織,不產生明顯免疫源性,無同種異體排斥反應,組織相容性高,故具有良好的安全性[39]。得益于冷凍與干燥技術的發展,羊膜的獲取變得更加容易,價格也更加低廉,且在保證其生物、物理和組織學特性的條件下,羊膜還可以進行長時間保存[40]。羊膜的多層細胞結構與富含的多種細胞因子使其具有抗炎、抗瘢痕、抗菌及促進組織再生修復等優良特性[41-42]。因此,將羊膜應用于青光眼小梁切除術中,達到了良好的抗瘢痕效果。本研究結果顯示,與空白對照組相比,單純生物羊膜組濾過泡存活率提高,可維持更低的術后眼壓,減輕炎癥細胞與成纖維細胞增生,抑制TGF-β1表達,減少青光眼濾過術后濾過區膠原纖維的沉積,且對組織刺激性小,毒副作用輕,無明顯并發癥,安全性高。Yadava等[43]在原發性青光眼患者小梁切除術中植入羊膜并進行為期1 a的隨訪觀察,發現羊膜組在維持更低的眼壓、提高濾過泡存活率方面有明顯優勢,且無明顯并發癥。

在電子顯微鏡下可見羊膜由上皮細胞層、基底膜、致密層、成纖維細胞層和海綿層構成,而網狀纖維和膠原纖維布滿基底膜,這些纖維之間相互纏繞形成網狀結構,網孔之間直徑大小約為0.5-15 μm[6],類似海綿結構,故可以像海綿一樣吸附定量的藥液,容納定量的藥物,成為一種“藥庫”,任何直徑小于羊膜網孔的微粒物質均能儲存其中。由于杰出的組織支架作用,生物羊膜在口腔和牙周手術、眼科、心臟等領域已經得到廣泛應用[14]。Zou等[44]曾將PFD與5-500 nm的納米顆粒脂質體相結合制成平均粒徑為346.6±62.21 nm的PFD脂質體,故將生物羊膜浸泡于0.5%的PFD溶液中,羊膜將會包含一定量的PFD。Ling等[45]研究描述了生物羊膜在PBS中降解的過程,從第1 wk到第4 wk,生物羊膜重量逐漸減少至8%,且膠原纖維不斷變薄,密度不斷降低,最后微絨毛丟失,失去結構的完整性,呈現出空心與多孔的外觀,表明隨著時間推移,其微觀結構可逐漸降解,故儲存于纖維支架內的藥物顆粒可以被逐漸釋放,是一個持續而緩慢的動態過程。研究發現,青光眼術后約14 d,羊膜將于鞏膜組織內溶解,對羊膜進行交聯,則可延長羊膜的溶解時間[46],而青光眼濾過術后濾過區瘢痕形成通常在術后14 d[47]。本研究中,單純生物羊膜組、MMC組與空白對照組三組眼壓在濾過術后14 d后升高幅度較大,這與切口的瘢痕愈合機制有關,切口在濾過術后約14 d愈合,瘢痕形成,其后濾過通道不斷被堵塞,故隨著時間延長眼壓出現明顯升高,而0.5%PFD±生物羊膜組在術后各觀察時間點眼壓變化較平穩,波動較小,能在更長時間保持更低的眼壓,提示儲存于羊膜組織中的PFD可隨著羊膜膠原纖維的逐漸降解而被緩慢地釋放出來,在術后瘢痕形成期內不斷維持局部有效的藥物濃度,效果優于一次性給藥。Zhang等[48]通過2 a時間隨訪觀察5-Fu浸泡生物羊膜聯合小梁切除術在原發性開角型青光眼患者中的療效發現,5-Fu浸泡生物羊膜可以長時間維持濾通道的通暢、降低術后眼壓、減輕相關并發癥,從而提高小梁切除術的成功率,這與本研究方法大致相同,不同之處在于生物羊膜負載藥物不同,但研究結果基本相似。

此外,本研究進行組織病理檢查結果證明,0.5%PFD浸泡生物羊膜組可以在兔青光眼模型濾過術后一定時間內抑制濾過區膠原纖維的沉積,維持濾過通道的開放,具有明顯且持久的抗瘢痕作用。Fayzullin等[49]在動物實驗中將聚乳酸和PFD結合制成藥物輸送系統并通過HE染色與免疫組織化學染色等方法觀察到持續的抗纖維化作用,本研究也用類似方法得出相同結論。本研究還發現0.5%PFD浸泡生物羊膜對兔眼組織刺激性小,毒副作用少,無明顯并發癥,安全性高,這與Zhong等[38]關于PFD對兔眼的毒性反應研究結果相一致。

綜上,本研究發現PFD浸泡生物羊膜在兔青光眼模型濾過術后的抗瘢痕效果是多重的,其既可以利用羊膜的物理學特性機械隔離濾過區結膜與鞏膜起到機械屏障的抗纖維化作用,又能夠通過羊膜自帶的多種細胞因子而發揮抗炎、抗瘢痕的生物學特性,還可以利用羊膜的組織學特性成為一種優良的緩釋系統,以增加抗瘢痕藥物在局部的存留時間,達到持久的抗瘢痕效果。這種將抗瘢痕藥物與緩釋系統相結合的方法有望成為青光眼濾過術后抗瘢痕治療的新方向與新希望。然而,該方法的長期療效和安全性及更優的給藥組合還需要更多的實驗與研究證實,如通過交聯的方式延長羊膜的降解時間,通過納米技術將PFD制成更穩定安全的脂質體,并進行多中心、大樣本的臨床試驗進一步確定其在臨床實踐中的作用。