CD4+CD25+Foxp3+Treg在子癇前期患者外周血中表達的意義及與妊娠結局的相關性分析

牛慶玲 張 芳 周 穎

鄭州大學附屬鄭州中心醫院產科 (河南 鄭州 450000)

子癇前期(preeclampsia，PE)是妊娠期特發疾病，其病因和發病機制仍未完全明確，臨床表現為妊娠20周后出現高血壓和蛋白尿，并伴有惡心嘔吐等癥狀，對母胎健康均造成了嚴重影響[1-2]。CD4+CD25+調節性T淋巴細胞(Treg)是一類免疫調節細胞，在機體外周免疫耐受、移植免疫耐受及母胎免疫耐受中均有重要作用[3]。叉頭框蛋白3(forkheadbox protein 3，Foxp3)是控制CD4+CD25+Treg發育、功能和效能的關鍵基因。研究[4]表明，CD4+CD25+Treg的免疫抑制活動性主要體現于FoxP3陽性的CD4+CD25+Treg部分。另有研究[5]顯示，CD4+CD25+FoxP3+Treg存在于妊娠的各個時期，在母體外周血中均有廣泛存在，是妊娠期重要的免疫耐受調節工具。目前，關于CD4+CD25+FoxP3+Treg在PE患者外周血中的表達相關研究較多，但關于其對妊娠結局的影響仍未明確。故本研究將分析CD4+CD25+Foxp3+Treg在PE患者外周血中表達的意義及與妊娠結局的相關性，以期為PE不良妊娠結局的防治研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2020年1月～2023年1月收治的PE患者112例為疾病組。

納入標準：疾病組入院后經詢問癥狀體征、體格檢查及生化檢測確診為PE，且符合《婦產科學》[6]的診斷標準：妊娠20周后收縮壓/舒張壓≥140/90 mmHg，24 h尿蛋白≥0.3 g或隨機尿蛋白(+)或肌酐＞0.3；孕前月經周期規律、孕期明確；自然受孕。排除標準：存在妊娠期糖尿病、妊娠期貧血、妊娠期肝內膽汁淤積等其他非妊娠子癇疾病；存在輸血史者；存在結核及免疫治療史者。另根據年齡、孕周匹配選取健康孕婦60例為健康組。PE患者根據病情嚴重程度分為輕度組(74例)、重度組(38例)，分組標準參照《婦產科學》。依據妊娠結局情況分為不良組(27例)與良好組(85例)。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 入院后第2天抽取晨空腹外周靜脈血5 mL，肝素鈉抗凝，分離外周血單核細胞，調整濃度。抗體CD4+、CD25+、Foxp3及同型對照各20 μL，加入細胞懸液100 μL，混勻后室溫下避光孵育30 min，3000 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，棄上清液，上機檢測。儀器為德國默克密理博公司生產的Guava/easycyte 6-2L流式細胞儀檢測，各抗體均購于美國eBioscience公司。

1.2.2 臨床資料收集 收集不良組與良好組的臨床資料，包括年齡、胎數、孕次、產次、孕前體質量指數(body mass index，BMI)、發病孕周、入院時血壓[收縮壓(systolic blood pressure，SBP)、舒張壓(diastolic blood pressure，DBP)]、妊娠終止時間、分娩方式、實驗室指標[24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清尿酸(blood uric acid，BUA)、血清Cr、血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、天冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase，AST)、丙氨酸氨基轉移酶(alanine amiotransferase，ALT)、血小板計數(platelet count，PLT)]。

1.3 統計學處理用SPSS 24.0統計學軟件分析數據，計量資料以(±s)表示，組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析；計數資料以[n(%)]表示，組間比較用檢驗；Logistic進行多因素回歸分析。相關性分析用Spearman相關性分析法。P<0.05為有統計學差異。

2 結 果

2.1 一般資料比較4組年齡、孕周、孕次、是否初產資料比較，差異無統計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 一般資料比較

2.2 外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平及不良妊娠結局比較疾病組、輕度組、重度組外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于健康組，有統計學差異(P<0.001)。疾病組、重度組外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于輕度組，且重度組低于疾病組，差異有統計學意義(P<0.001)。疾病組、輕度組、重度組不良妊娠結局發生率均高于健康組(P<0.01)。疾病組、重度組不良妊娠結局發生率高于輕度組，且重度組高于疾病組，有統計學差異(P<0.01)。見表2。

表2 CD4+CD25+Foxp3+Treg水平及不良妊娠結局比較

2.3 不良組與良好組臨床資料差異分析不良組與良好組的胎數、分娩方式構成比及年齡、孕次、產次、SBP、DBP、白蛋白、BUA、Cr、BUN、AST、ALT、PLT比較，無統計學差異(P>0.05)；不良組的孕前BMI、24 h尿蛋白定量高于良好組，終止妊娠時間早于良好組，外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于良好組，差異具有統計學意義(P<0.001)。見表3。

表3 臨床資料差異分析對比

2.4 Logistic多因素回歸分析以孕前BMI、妊娠終止時間、24 h尿蛋白定量、CD4+CD25+Foxp3+Treg自變量(均為連續變量)，預后情況為因變量(預后良好=0，預后不良=1)進行Logistic回歸分析，結果顯示孕前BMI、終止妊娠時間、24 h尿蛋白定量、CD4+CD25+Foxp3+Treg均是影響PE患者妊娠結局的危險因素(P<0.001)。見表4。

表4 Logistic回歸分析

2.5 C D 4+C D 2 5+Fox p 3+Treg 與妊娠結局相關性分析Spearman相關性分析顯示外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平與PE患者不良妊娠結局呈負相關(r=-0.722，P<0.01)。

3 討 論

PE可對母體臟器功能造成不可逆的損傷，并影響胎兒生長發育，是造成孕產婦死亡和圍生兒死亡的主要原因之一[7-9]。研究發現，PE患者存在血管內皮細胞抗體、免疫復合物、補體增加及Th1/Th2比值向誘導免疫排斥的Th1偏移情況，提示PE屬于母胎免疫不耐受疾病，一旦免疫耐受機制失衡，可出現PE、流產等病理性妊娠[10-11]。CD4+CD25+Foxp3+Treg能抑制機體免疫活性，在維持機體內環境平衡，調節免疫耐受中有重要作用。因此，明確CD4+CD25+Foxp3+Treg在PE患者外周血中的表達情況及對不良妊娠結局的影響。

Treg是維持機體外周免疫耐受的關鍵因素，包括來源于胸腺的天然Treg與外周誘導獲得的Treg[12]。CD4+CD25+T細胞即為來源于胸腺的天然Treg，其功能是保持機體內環境的穩定，抑制機體對異體物質的排斥作用，并影響其他T細胞功能，在胚胎生長發育的免疫耐受平衡中有重要的調節作用[13]。Foxp3是存在于細胞質內的轉錄因子，是Treg的主要標記表型之一[14]。Foxp3的mRNA及其編碼的蛋白僅特異性表達于CD4+CD25+Treg，是最適宜的Treg鑒定標記，對于控制CD4+CD25+Treg的功能有重要作用[15]。研究顯示[16]，CD4+CD25+Foxp3+Treg在正常妊娠早期有明顯增加，在妊娠中期稍微減弱，在分娩后可顯著下降。李穎證實PE患者的CD4+CD25+Foxp3+Treg水平下降可能與免疫耐受有關[17]。本研究結果顯示，PE患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表達下降，且與疾病的嚴重程度有關。

正常生理妊娠時，因母體可對胎兒產生免疫耐受而避免PE在內的妊娠期疾病及流產、早產等不良妊娠結局的發生[18]。PCD4+CD25+Foxp3+Treg的主要功能是免疫調節作用，在母胎耐受的形成中具有重要作用，其水平的異常變化可導致母體免疫紊亂。在PE患者中PCD4+CD25+Foxp3+Tre水平的下降使PE患者的機體內調控機制失衡，發生免疫耐受不良，并產生針對自身抗原成分的效應細胞、分子，引發免疫損傷，胎兒易受免疫攻擊被母體排斥，增加死胎、流產、早產等不良妊娠結局的發生風險[19]。樓向明等[20]認為，CD4+CD25+Foxp3+Treg能調控母胎界面免疫耐受的形成，影響妊娠結局的發展。葛榕等[21]認為提高PE孕鼠PCD4+CD25+Foxp3+Treg水平可調節對父系抗原的特異性免疫耐受，改善圍產期結局。本研究中Logistic回歸分析證實CD4+CD25+Foxp3+Treg是影響不良妊娠結局的相關因素，Spearman相關性分析顯示CD4+CD25+Foxp3+Treg與不良妊娠結局呈負相關。

綜上所述，CD4+CD25+Foxp3+Treg在PE患者外周血中表達下降，是不良妊娠結局的獨立危險因素，且與不良妊娠結局呈負相關。對于收治入院的PE患者，可通過檢測外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg對妊娠結局進行預測。