犬細小病毒病的流行特點及實驗室診斷概述

王鶴澎

犬細小病毒病是犬病中一種具有高度接觸性傳染的烈性傳染病，是由犬細小病毒(CPV)引起的。1982年，犬細小病毒病出現在我國的東北、華東和西南等地區，主要發生在警犬和良種犬中。隨著中國養犬數量的增加，犬細小病毒病的發病率也呈現上升趨勢，給我國養犬業與寵物行業的發展造成了極大的危害。感染CPV 的犬會在3～7 天內發病，表現為嚴重的腸胃炎、精神萎靡、嗜睡、嘔吐和發燒。CPV 也會影響心肌細胞，導致急性心力衰竭，通常犬會在出生后8 周內猝死。該病毒具有高度傳染性，可通過糞口途徑和無生命物體傳播。據了解，即使在接種過疫苗的犬舍中也會出現CPV 感染。目前已開發出幾種療法來治療這種疾病，但這些療法在可用性和成本方面都有其自身的局限性，且在診斷以及預防領域仍需要進一步改進，以解決與犬細小病毒病相關的問題。

一、病原特性

CPV 屬于細小病毒屬，是自然界內已知最小的病毒之一，其病毒粒子直徑為21～24nm，外觀呈圓形或六邊形。CPV 結構簡單無囊膜，為線形、單股負鏈DNA病毒，其基因組大小大約為5KB，包含兩個開放閱讀框（ORF）。一個ORF 編碼兩種非結構蛋白（NS1 和NS2），另一個編碼兩種囊膜蛋白（VP1 和VP2）。

最初的病毒株被命名為犬細小病毒 2 型（CPV-2），以區別于犬微小病毒（CPV-1），后者在基因上與CPV-2 無關。由于它的單鏈結構，細小病毒的突變率更接近RNA 病毒，所以CPV-2 出現幾年后，在1979年病毒的原始類型就被一種新的基因和抗原變異體所取代，也就是CPV-2a，其主要保護性抗原蛋白（VP2）的5 ～6 個氨基酸位置與原型不同。1984年，也發現了CPV-2b 的存在，即VP2蛋白發生了進一步的突變，它們兩者的區別是只有一個氨基酸的差異（在第426 個氨基酸殘基上，天冬酰胺突變為天冬氨酸）。有報道稱在2000年出現了第三種類型CPV-2c，其 VP2 蛋白的第426 個氨基酸殘基的天冬酰胺/天冬氨酸變為谷氨酸。這3 種變種在全球范圍內分布不一。

CPV 在環境中無處不在，并且可以在有利條件下存活1年以上。同時對不良環境的抵抗力非常強，即使在高溫或者低溫環境中也有一定的耐受力，比如在56℃能生存24 ～ 36 小時，在4℃能生存8 個月。并且CPV 對多種理化因素和常用消毒劑具有較強的抵抗力，如酒精、乙醚、醇類混合物以及氯仿，但福爾馬林、氧化劑、次氯酸鈉和強光照作用可將其滅活。

二、流行特點

CPV 具有極強的傳染性，在收容所、寵物店和繁殖犬舍的發病率極高，潛伏期一般是3 ～7 天。本病的主要傳染源為感染CPV 的犬，其糞便、尿、唾液和嘔吐物均帶病毒。感染通常是通過糞口途徑，即通過接觸受感染的犬的糞便或受污染的表面而獲得感染。該病的特征是臨床病程快，死亡通常發生在非受保護宿主出現體征后2～3 天。

自CPV-2 在中國被證實以來，該病呈地方流行趨勢，發病率和死亡率各不相同。自20 世紀70年代發現CPV 以來，該病的總體發病率有所下降，抗體水平保持穩定。但CPV 毒性顯著增強，對動物的破壞性更大，動物死亡率顯著上升，這在很大程度上可能是由于新出現的CPV 抗原變異所致。根據季節變化，犬細小病毒病全年都會發生。在中國不同地區，發病率隨季節而變化，其中春季、秋末和初冬感染更為嚴重，這可能與這些季節的晝夜溫差大、氣候多變以及犬和人的戶外活動頻率有關。

所有年齡段的犬都可能感染CPV，但CPV 的陽性率因犬的年齡而異。CPV 嚴重感染最常見于2 ～ 4 個月大的幼犬，1個月以下的犬發病率低很可能是由于獲得了母源抗體，而4 個月以上的犬發病率低很可能是由于適應性免疫反應的發展。所有品種都易患該病，盡管混合品種被描述為比許多純種品種更不易感。在CPV 確診病例中，純種犬的發病率最高，遠高于雜交犬和土生犬，原因是越來越多的純種犬被主人重視、及時送醫。此外，雜交犬和本地犬對CPV 的抵抗力更強的原因可能是這些犬能更好地適應當地的氣候和環境。公犬和母犬都可能感染CPV，但公犬的發病率更高，這與中國的犬類市場有關，大多數寵物店主要出售公犬，因為公犬的繁殖數量高于母犬，導致這些公犬的感染率較高。

三、致病機制

CPV 一旦進入體內，幾天后即可被釋放到血液中，再通過血液復制到局部淋巴組織，最后感染含有快速分裂細胞的其他器官，如骨髓、腸上皮隱窩細胞、口腔和心肌細胞。CPV 被健康犬攝入兩天后，就在咽部淋巴組織和腸系膜淋巴結內復制。在感染后3～5 天內，病毒的數量達到峰值，并優先影響腸上皮組織和淋巴組織，并引發病毒血癥。在宿主生命的前2 周中，心肌細胞的活躍分裂使病毒復制，導致心肌壞死和心肌炎。在年齡稍大的幼犬中，病毒在腸腺的生殖上皮進行復制，損壞小腸絨毛隱窩。腸隱窩細胞的喪失導致絨毛萎縮，形成嗜酸性核內包涵體，進一步導致吸收和消化能力降低，導致嘔吐和腹瀉等臨床癥狀，嚴重感染的幼犬腸腔內可能發生大量出血。CPV也可導致淋巴細胞死亡，進而使淋巴細胞減少，甚至導致泛白細胞減少癥。缺乏免疫力，再加上腸道細菌易位導致的菌血癥，如果不及時治療，患病犬極有可能出現膿毒性休克、全身炎癥反應綜合征、多器官衰竭和死亡。

四、實驗室診斷

在犬舍和收容所中，快速診斷CPV 感染尤為重要，以便隔離受感染的犬，防止易感動物繼發感染。臨床診斷并不明確，其他幾種病毒病原體也可能導致犬腹瀉，如冠狀病毒、腺病毒、輪狀病毒。因此，臨床疑似病例應始終通過實驗室檢測來確認。目前已開發出幾種CPV 感染的實驗室診斷方法，包括傳統方法、基于免疫學的檢測方法和基于分子的檢測方法。

（一）傳統方法

通過細胞培養技術分離病毒是診斷的金標準方法，雖然具有高度特異性，但費時、費力且昂貴，而且需要熟練的專業人員，因此應用范圍窄。

電子顯微鏡鑒別CPV 形態的靈敏度很低，不過可以通過免疫電子顯微鏡技術中的特異性抗體濃縮病毒顆粒，提高靈敏度。使用電子顯微鏡的缺點是需要高病毒載量才能進行檢測，且需要技術熟練的人員。

（二）免疫學檢測

目前已開發出多種免疫學方法用于直接鑒定CPV，包括酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、乳膠凝集試驗（LAT）、玻片抑制試驗-玻片凝集試驗（SIT-SAT）、血凝試驗（HA）、熒光抗體試驗（FAT）等。這些實驗室方法大多用于檢測 CPV 特異性抗原或抗體。

ELISA 是臨床醫生和從業人員最常用的檢測方法，用于從感染犬的糞便和血液中發現CPV。ELISA 用于檢測和定量抗原和目標特異性抗體，可以一次性檢測大量樣本，國內外已研制出多種試劑盒用于臨床，但易出現假陰性及假陽性結果。

LAT 是一種從體液中檢測抗原或抗體的臨床方法，在玻片上進行，可以在短時間內完成，判定結果容易，適用于現場檢測。

SIT 用于抗體分型，SAT 用于抗原檢測。這種檢測方法成本低、操作簡便，不需要熟練的專業人員。雖然LAT 和SITSAT 方法具有成本效益，但無法在市場上買到。

血凝試驗（HA）是一種滴定病毒的免疫學方法，依據的是病毒與紅細胞表面受體結合并導致病毒凝集的能力。此方法操作簡單、快速，適合大量樣本的快速檢測，但是由于HA檢測需要新鮮紅細胞，若紅細胞的存放和管理不善，可導致結果敏感性較差，還容易出現假陽性結果。

FAT 檢測分為兩種，一種是直接熒光抗體檢測，另一種是間接熒光抗體檢測，敏感性與ELISA 相當，但被檢病料的來源具有一定的局限性，用于死后檢測CPV。

免疫膠體金技術具有成本較低、穩定性好、反應速度快等優勢，是寵物臨床上使用最廣泛的一種檢測手段。但是，這種方法的靈敏度較低，特異性不高。

（三）分子檢測

早在 20 世紀 90年代初就有了核酸雜交檢測法。隨后，又開發出幾種PCR 檢測方法，與傳統方法相比，靈敏度和特異性都有所提高。針對CPV 開發的分子檢測方法包括聚合酶鏈式反應（PCR）、實時熒光定量PCR （RT-PCR）、多重 PCR（mPCR）、多肽核酸檢測法（PNA）、絕緣等溫 PCR 法（II-PCR）、環介導等溫擴增法（LAMP）、聚合酶螺旋反應（PSR）、重組酶聚合酶擴增檢測法（RPA）等。這些檢測方法大多能夠檢測糞便和血液樣本中的CPV，并具有高靈敏度及特異性。目前臨床最常用的分子方法為PCR 及RT-PCR。

PCR 是一種廣泛使用的革命性體外平臺，用于檢測和定量來自不同來源的各種病原體。PCR 技術還可用于擴增無法培養的病原體。PCR 一般應用于懷疑CPV 感染但通過免疫膠體金檢測板無法檢測時。由于PCR 檢測基于特定的引物對，因此具有高度特異性，使其能區分野毒感染和疫苗接種。

基于TaqMan 技術開發了RT-PCR 檢測方法，用于快速、特異、靈敏地檢測CPV DNA。與傳統PCR 相比，可在1 小時或更短時間內檢測目標基因，比傳統PCR 快得多。不過，這種檢測方法比較昂貴，需要專業實驗室才能進行檢測。

五、 結語

本文總結了犬細小病毒病的病原特性、流行特點、發病機理和實驗室診斷，為犬細小病毒病的診斷及控制提供了理論依據。未來的研究應更多地關注CPV 的結構生物學及分子致病機理，并基于此開發快速、低成本檢測系統，實現對犬細小病毒病臨床快速診斷。開發出經濟實惠的新型疫苗和治療方法，提高犬細小病毒病應對能力，從而降低該病的發生率及死亡率。