蛹蟲草菌株胞外發酵液抗氧化能力評價及優良菌株篩選

張疏雨，李劍梅，謝存一，柴林山，朱萬芹

（遼寧省微生物科學研究院，遼寧朝陽 122000）

蛹蟲草（Cordycepsmilitaris）又名北冬蟲夏草，分類學上屬于子囊菌亞門（Ascomycotina）、核菌綱（Pyreno?myce?tes）、球殼菌目（Sphaeriales）、麥角菌科（Clavicipti?aceae）、蟲草屬（Cordyceps）[1?2]。蛹蟲草廣泛分布于世界各地，在我國吉林、遼寧、河北、陜西、甘肅、安徽、山東、湖北、湖南、四川、貴州、福建、廣東、廣西、云南等地均有發現[3]，其主要化學成分有蛋白質、氨基酸、糖類、有機酸、生物堿、甾醇及酚類、無機元素和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）等，不僅具有極高的營養價值，而且具有抗癌、抗氧化、鎮定安眠、抗炎、治療心腦血管疾病等功效，已被國家科技部批注為新資源食品，極具營養保健食品的開發潛力[4?8]。目前，關于蛹蟲草子實體產量優化、活性成分含量優化、菌絲體收率提升等方面的研究已獲得一些成果[9?10]，特別是通過液體發酵法培養蛹蟲草菌絲體及發酵液，不僅周期短、條件簡單、產量高，而且有利于活性成分含量提升及目的組分的提取，已經成為了蛹蟲草的研究熱點[11?12]。

研究表明，蛹蟲草無性型液體發酵代謝產物及其發酵制品的水和乙醇提取物具有較強的抗氧化活性，其抗氧化能力與其對機體內自由基的清除密切相關，是抗氧化食品、保健品、化妝品原料的良好來源[13?15]，培養高抗氧化功能的蛹蟲草產品，可為蛹蟲草的開發利用提供新的商業市場。然而，蛹蟲草無性型液體發酵代謝產物產量及其抗氧化活性的高低在很大程度上取決于蛹蟲草菌種的生理生化活力，因而生產上迫切需要建立高抗氧化能力的蛹蟲草優良菌種評價篩選方法。目前，食用菌菌種的評價方法主要有分子生物學評價、試驗評價以及生理生化評價方法[16]。盡管蛹蟲草可以實現人工栽培，但生長周期長，通過結實性實驗來檢測蛹蟲草菌種質量費時費力；通過生理生化方法評價、鑒定蛹蟲草菌種具有實用、經濟、穩定等優點，是較為切實可行的方法之一。為篩選出抗氧化綜合能力強、高活力、生物學轉化率高的優良菌株，本試驗以10 株蛹蟲草菌株為研究對象，以菌株生長活力、發酵液胞外酶活力、抗氧化能力為指標，在相關性分析的基礎上建立線性回歸方程，確定定向篩選模型，創新確定有效評價蛹蟲草菌株抗氧化綜合能力的方法，并通過結實性試驗中的蛹蟲草生物學轉化率、子實體形態、蟲草素含量、生長周期等指標對模型進行可行性驗證分析，以期為蛹蟲草的開發利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 供試菌株

供試蛹蟲草菌株共10 株，種屬均為蛹蟲草（Cordycepsmilitaris）。供試菌株編號、品種及來源如表1所示。

表1 蛹蟲草供試菌株Table 1 Tested strains of Cordyceps militaris

1.1.2 培養基

PDA 平板培養基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，KH2PO43 g，MgSO41.5 g，維生素B110 mg，瓊脂15 g，pH 值自然，水1 000 mL。121 ℃高溫高壓滅菌保持30 min。

液體搖瓶培養基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，KH2PO43 g，MgSO41.5 g，維生素B110 mg，pH 值自然，水1 000 mL。121 ℃高溫高壓滅菌保持30 min。

栽培培養基所需營養液：MgSO41.0 g，KH2PO42.0 g，維生素B15 mg，配制成1 000 mL 溶液，備用。

麥粒培養基：650 mL 罐頭瓶，每瓶裝小麥粒35 g，麥粒∶營養液=1∶1.7（g/mL）。用聚乙烯膜包裹瓶口，再用橡皮筋扎緊，于121 ℃下滅菌1 h，冷卻，備用。

1.1.3 試劑

蟲草素標準品、乙酸鈉緩沖液（pH5.8，0.1 mol/L）：上海源葉生物科技有限公司；乙醇、葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、絡氨酸、磷酸二氫鉀、可溶性淀粉（分析純）：北京奧博星生物技術有限責任公司；3，5 二硝基水楊酸（3，5?dinitrosalicylic acid，DNS）顯色劑（分析純）：廈門海標科技有限公司；乙腈（色譜純）：天津星馬克科技發展有限公司；總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T?AOC）測定試劑盒、1，1?二苯基?2?三硝基苯肼（1，1?di?phenyl?2?picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除能力測定試劑盒、羥自由基清除能力測定試劑盒、超氧陰離子自由基清除能力試劑盒、2，2′?聯氮?雙?3?乙基苯并噻唑啉?6?磺酸[2，2′?azino?bis（3?ethylbenzothiazoline?6?sulfonic acid），ABTS]、磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer sa?line，PBS）：蘇州格銳思生物科技有限公司。

1.2 儀器與設備

BHC?1300IIA/B2 生物安全柜：上海力申科學儀器有限公司；SPH?2102 立式雙層大容量恒溫培養搖床：上海世平實驗設備有限公司；BCD?649WADV 冰箱：青島海爾股份有限公司；SPX?4501 生化培養箱：中儀國科（北京）科技有限公司；LDZX?75KBS 立式壓力蒸汽滅菌器：上海申安醫療器械廠；2695 高效液相色譜儀、2489 二極管陣列檢測器：沃特世科技（上海）有限公司；USUXA42508 C18 色譜柱（5μm，4.6 mm×250 mm）：安捷倫科技（上海）有限公司；KQ?50DA 型數控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；723N 可見分光光度計：上海儀電分析儀器有限公司；HH?2 數顯恒溫水浴鍋：常州市江南實驗儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 菌絲生長速度的測定

制備PDA 平板培養基（培養皿直徑90 mm），用打孔器取直徑6 mm 的相同菌齡菌絲塊，接種于PDA 培養基中部，置于（18±1）℃黑暗培養，十字交叉法劃線，當菌落直徑達到2 cm 時，在菌落邊緣畫線作為菌絲生長起始線，當生長最快的菌株即將長滿PDA 平板時取出所有的培養皿，在菌落邊沿畫終止線，用游標卡尺測量起始線與終止線之間的距離（不同方向測3 次，取平均值，精確到0.02 mm），將此距離除以培養時間（d）即為菌絲平均生長速度。記錄菌絲長勢及轉色后色澤，每個處理3 次重復。

1.3.2 發酵生物量的測定

液體搖瓶發酵：250 mL 錐形瓶中倒入100 mL 液體培養基，121 ℃高溫高壓滅菌30 min，冷卻備用；用打孔器取直徑6 mm 的平板培養基中相同菌齡菌絲塊，接種量為每瓶接種3 塊菌絲塊，于18 ℃、140 r/min條件下振蕩培養5～6 d，待長勢最好的菌株發酵菌球豐富、黏稠后停止培養，用多層紗布過濾，濾液備用，用蒸餾水將沉淀清洗3 次后，收集菌絲體，置于烘箱烘干（55 ℃）至恒重，稱重。每個處理3 個重復。

1.3.3 供試樣品液前處理

將1.3.2 中供試菌株發酵液的備用濾液于4 ℃、8 000 ×g離心10 min，取上清液移入新的離心管，0.22 μm 微孔濾膜過濾，得到胞外樣品液，用于胞外酶活力、抗氧化活性的測定。

1.3.4 β?葡萄糖苷酶活力測定

參照張曦文等[17]的測定方法，以葡萄糖的質量濃度為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標繪制標準曲線，求得線性回歸方程為Y=1.091 1X-0.034 8（R2=0.996 1）。于540 nm 處分別測定不同供試菌株胞外樣品液的吸光度，按照標準曲線方程計算胞外樣品液中葡萄糖的質量濃度，并計算酶活力。酶活單位規定為每秒鐘生成1 mmol/mL 的葡萄糖為一個酶活單位（U）。

1.3.5 蛋白酶活力測定

參照肇瑩等[18]的測定方法，以酪氨酸濃度為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標繪制標準曲線，求得線性回歸方程為Y=1.336 4X+0.007 3（R2=0.999 8）。于680 nm處分別測定不同供試菌株胞外樣品液的吸光度，按照標準曲線方程計算胞外樣品液中酪氨酸的質量濃度，并計算酶活力。酶活單位規定為1.0 mL 培養液中的酶量每秒鐘作用于底物釋放出酪氨酸的質量（μg）為1 個活力單位（U）。

1.3.6 淀粉酶活力測定

試管中加入1.5 mL 的0.5% 可溶性淀粉溶液（用pH5.8，0.1 mol/L 乙酸鈉緩沖液配制）作為底物，加入0.5 mL 胞外樣品液，混勻，38 ℃恒溫水浴保溫30 min，取出后立即加入DNS 試劑1.5 mL，沸水浴5 min，冷卻后用蒸餾水定容至10 mL，混勻，于540 nm 處測吸光度。以煮沸10 min 的粗酶液作對照。以每毫升樣品中的酶量與底物反應每分鐘內改變0.01 個OD 值為一個活力單位（U）。淀粉酶標準曲線方程：Y=1.110 7X+0.075 2（R2=0.998 8）。

1.3.7 抗氧化能力測定

1.3.7.1 總抗氧化能力測定

參考試劑盒使用說明，利用總抗氧化能力（T?AOC）測定試劑盒（ABTS 法）對供試樣品液進行總抗氧化能力的測定，按照公式（1）計算供試樣品液總抗氧化能力（T，μmol Trolox/mL）。

式中：A測定為樣品ABTS 的吸光度；A對照為樣品與PBS 混合液吸光度；A空白為ABTS 工作液與PBS 混合液的吸光度；D表示樣品的稀釋倍數。

1.3.7.2 DPPH 自由基清除率測定

參考試劑盒使用說明，利用DPPH 自由基清除能力測定試劑盒對供試樣品液進行DPPH 自由基清除率的測定。按照公式（3）計算供試樣品液的DPPH 自由基清除率（D，%）。

式中：A測定為樣品與DPPH 混合液吸光度；A對照為樣品與無水乙醇混合液吸光度；A空白為DPPH 與無水乙醇混合液吸光度。

1.3.7.3 超氧陰離子自由基清除率測定

參考試劑盒使用說明，利用超氧陰離子自由基清除能力試劑盒進行超氧陰離子自由基清除率的測定，按照公式（4）計算供試樣品的超氧陰離子自由基清除率（S，%）。

式中：A測定為測定管的吸光度；A對照為對照管的吸光度；A空白為空白管的吸光度。

1.3.7.4 羥自由基清除率測定

參考試劑盒使用說明，利用羥自由基清除能力測定試劑盒進行羥自由基清除率的測定，按照公式（5）計算供試樣品的羥自由基清除率（H，%）。

式中：A測定為測定管的吸光度；A對照為對照管的吸光度；A空白為空白管的吸光度。

1.3.8 模型的驗證

對10 株蛹蟲草供試菌株進行小麥基質人工培養[19]，并對菌株主要農藝性狀進行評價。將蛹蟲草液體菌種按照8 mL/瓶接種于麥粒培養基中，栽培條件：菌絲生長階段18 ℃避光培養8～10 d，待菌絲長滿基質后進行原基誘導培養，培養條件為300 lx 光照24 h、溫度20 ℃、空氣相對濕度不低于60%、二氧化碳濃度0.5%，當培養至20 d 左右，菌絲由白色變成均勻的橘黃色，且形成針尖狀原基時，用滅菌后的接種針在封口膜上扎眼通氣（一般扎2 排孔，每排扎3 個直徑約2 mm的小孔即可），進入子實體培養階段，當培養60 d 左右時，采收子實體，記錄子實體性狀，計算生物學轉化率、菌種生長周期，測定蟲草素含量。

1.3.9 蟲草素含量測定

參考NY/T 2116—2012《蟲草制品中蟲草素和腺苷的測定高效液相色譜法》[20]測定蛹蟲草子實體提取液中蟲草素含量。色譜條件：柱溫35 ℃；流動相，5%乙腈，95%水；流速1.0 mL/min；檢測時長18 min；紫外檢測波長260 nm；進樣量10μL。

標準曲線制作：稱取蟲草素標準品10 mg，去離子水溶解，用流動相定容至100 mL 搖勻，配成濃度為100μg/mL 蟲草素準品儲備液，4 ℃儲存備用。準確吸取蟲草素標準儲備液0.25、0.50、1.25、2.50、5.00、12.50 mL于25 mL 容量瓶中，用去離子水定容，搖勻，濃度為1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00 μg/mL，0.22 μm 微孔濾膜過濾。每個濃度的標準品溶液重復進樣3 次，得到相應峰面積，計算平均值。以蟲草素的濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標，得到蟲草素標準曲線y=34 479x+10 846（R2=0.998 3）。

樣品中蟲草素含量測定：將供試蛹蟲草子實體于55 ℃干燥至恒重，粉碎，過80 目篩，分析天平準確稱取（0.50±0.01）g 于刻度管中，按照液料比20︰1（mL/g）加入70% 乙醇，在60 ℃條件下超聲提取3 h，70% 乙醇定容至25 mL，混勻，經0.22 μm 微孔濾膜過濾，得到蛹蟲草子實體提取液，按照上述高效液相色譜法分析，重復進樣3 次，得到相應峰面積，計算平均值，并帶入到標準曲線中計算蟲草素含量。

1.4 數據分析處理

所有結果用平均值±標準差表示。采用Excel 軟件進行數據統計和分析。采用SPSS 19.0 軟件對數據進行相關性分析，以P＜0.05 表示差異顯著，以P＜0.01表示差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 菌株生長活力

2.1.1 菌株生長特性及發酵生物量

供試蛹蟲草菌株菌絲生長速度和發酵生物量結果見圖1，菌株的菌落形態見圖2。

圖1 蛹蟲草菌株的菌絲生長速度和發酵生物量Fig.1 Mycelial growth rate and fermentation biomass of Cordyceps militaris strain

圖2 蛹蟲草菌株的菌落形態Fig.2 Colony morphology of Cordyceps militaris strain

由圖1 可知，10 株蛹蟲草供試菌株菌絲生長速度相差較大，其中CH?1、CA?1 明顯快于其他菌株，菌絲生長速度為其他菌株的2 倍多，其次為CX?4、CY?1、CB?1、CX?3、CS?1，而CS?2、CX?1、CD?1 長速最慢；從發酵生物量看，CH?1、CA?1 要高于其他8 株菌株，其次為CX?4、CB?1、CS?2、CX?3、CX?1、CY?1、CD?1，CS?1 發酵生物量最低。由圖2 可知，在菌落狀態方面，轉色前，10 株供試菌株菌絲致密，呈絨毛狀，菌落顏色為白色，轉色后，除菌株CS?2、CX?1、CD?1 菌落形態為稀疏淺黃色外，其他7 株菌株菌落顏色為黃色至橘黃色，其中CX?4、CY?1、CB?1、CS?1、CX?3 菌落為黃色，CH?1、CA?1菌落為橘黃色，菌絲致密絨毛狀，長勢較好。綜合以上分析初步得到菌株CH?1、CA?1 在菌絲生長速度、菌落狀態、發酵生物量方面明顯優于其他菌株。

2.1.2 菌株胞外酶活力

食用菌在生長發育過程中產生胞外酶，食用菌胞外酶可以將天然谷物、木料等培養料中的糖類、蛋白質等大分子轉化成利于吸收的小分子物質，為其菌絲生長、原基分化、子實體生長發育提供營養物質[21]。10 株供試菌株胞外酶活力見圖3。

圖3 供試菌株胞外酶活力Fig.3 Extracellular enzyme activity of tested strains

由圖3 可知，供試10 株菌株發酵液胞外酶活力差異較大，CA?1 的β?葡萄糖苷酶酶活力明顯高于其他菌株，CH?1、CS?2、CX?4、CS?1、CX?3、CY?1、CB?1 次之，CD?1、CX?1 最低；CH?1 蛋白酶活力最高，CA?1、CS?2、CS?1、CB?1、CY?1、CD?1、CX?3 次之，CX?4、CX?1 活性最低；CX?1 淀粉酶活性最強，CA?1、CH?1、CS?1、CY?1、CX?4、CX?3、CB?1、CD?1、CS?2 活性依次降低。

2.2 菌株抗氧化能力

10 株供試蛹蟲草菌株胞外樣品液羥自由基清除率、超氧陰離子自由基清除率、DPPH 自由基清除率和總抗氧化能力結果見圖4。

圖4 供試菌株抗氧化能力Fig.4 Antioxidant activity of tested strains

由圖4 可知，CH?1 的羥自由基清除率超過了60%，明顯高于其他菌株；CA?1 的超氧陰離子自由基清除率最高，其次是CH?1、CD?1、CS?1；CX?4、CS?2 的DPPH 自由基清除率較高，CB?1、CH?1 次之；總抗氧化能力方面，CH?1、CA?1、CY?1 表現出了一定的優勢。

2.3 抗氧化綜合能力與生長活力指標的相關性分析及模型建立

隸屬函數是用于表征模糊集合的數學工具，為了能夠更簡單直觀的表達供試蛹蟲草菌株的抗氧化綜合能力，對羥自由基清除率、超氧陰離子自由基清除率、DPPH 自由基清除率和總抗氧化能力采用隸屬函數值法進行賦值計算，得到平均隸屬函數值，結果見表2。隸屬函數值的范圍為0～1，數值越大說明該菌株的抗氧化綜合能力越高。這里定義平均隸屬函數值代表蛹蟲草菌株抗氧化綜合能力。

表2 供試菌株隸屬函數值計算表Table 2 Calculation of membership function value of tested strains

使用SPSS 軟件對10 株蛹蟲草菌株的菌絲生長速度、搖瓶發酵生物量、胞外酶活力和抗氧化綜合能力進行相關性分析，結果見表3。

表3 蛹蟲草10 菌株指標相關性分析Table 3 Correlation analysis of indicators of Cordyceps militaris strain 10

由表3 可知，抗氧化綜合能力與發酵生物量、菌絲生長速度、β?葡萄糖苷酶活力、蛋白酶活力呈極顯著正相關（P＜0.01），發酵生物量與菌絲生長速度、β?葡萄糖苷酶活力呈極顯著正相關（P＜0.01），菌絲生長速度與β?葡萄糖苷酶活力、蛋白酶活力呈極顯著正相關（P＜0.01），β?葡萄糖苷酶活力與蛋白酶活力呈極顯著正相關（P＜0.01），淀粉酶活力與各活性指標有一定相關性。

為了進一步闡明10 個蛹蟲草菌株抗氧化綜合能力與發酵生物量、菌絲生長速度、β?葡萄糖苷酶活力、蛋白酶活力之間的內在聯系，采用多元線性回歸方法分析各解釋變量的影響程度，決定具有代表性的指標對抗氧化綜合能力的解釋水平。以抗氧化綜合能力作為因變量，以發酵生物量、菌絲生長速度、β?葡萄糖苷酶活力、蛋白酶活力為自變量，建立多元線性數學模型，模型公式如公式（6）所示。

式中：BY為蛹蟲草菌株抗氧化綜合能力；BFER為發酵生物量，g/100 mL；BCMD為菌絲平均生長速度，cm/d；BGLU為β?葡萄糖苷酶活力，U；BPRO為蛋白酶活力，U；A0為常數；A1、A2、A3、A4為變量系數。

運用SPSS 19.0 軟件進行多元線性回歸分析，結果見表4。

表4 多元線性回歸分析Table 4 Multiple linear regression analysis

由表4 顯著性分析可知，菌絲平均生長速度、發酵生物量、蛋白酶活力、β?葡萄糖苷酶活力對蛹蟲草菌株抗氧化綜合能力的貢獻程度依次遞減，這些變量具有一定的統計學意義。根據回歸模型，可以得到蛹蟲草菌株抗氧化綜合能力與發酵生物量、菌絲平均生長速度、β?葡萄糖苷酶活力、蛋白酶活力的數學模型，線性方程如公式（7）所示。

所有的指標中對蛹蟲草菌株抗氧化綜合能力貢獻最大的是菌絲平均生長速度，其次分別是發酵生物量、蛋白酶活力、β?葡萄糖苷酶活力。因此，可以根據此模型來快速篩選出具有高抗氧化綜合能力的蛹蟲草菌株：即通過比較菌絲的平均生長速度及生長狀況，初步篩選出菌絲生長快、致密、顏色鮮黃的菌株，然后通過比較菌株的搖瓶生物量，篩選出發酵生物量較高的菌株，最后測定菌株的蛋白酶活力、β?葡萄糖苷酶酶活力，從而篩選出具有高抗氧化綜合能力的蛹蟲草菌株。

2.4 模型的驗證

對10 株蛹蟲草供試菌株進行小麥基質人工培養，并對菌株主要農藝性狀進行評價，驗證栽培優勢菌株與模型選擇的優勢菌株是否一致。10 株蛹蟲草菌株子實體生物學性狀和外觀見表5 和圖5。

圖5 10 株蛹蟲草菌株子實體生長圖Fig.5 Growth of fruiting bodies of 10 Cordyceps militaris strains

表5 菌株子實體生物學性狀Table 5 Biological characteristics of fruiting bodies of strains

由表5、圖5 可知，菌株CH?1 與CA?1 子實體形成能力強、農藝性狀優良，子實體生物轉化率達到90%以上，CS?1、CS?2、CX?3、CX?4 子實體生物學轉化率達到50% 以上，CB?1、CD?1、CX?1、CY?1 菌株較差，子實體生物轉化率在50%以下；蛹蟲草CH?1、CA?1 菌株蟲草素含量較野生菌株（CX?4、CS?2、CX?1）高60%左右，菌株生長周期短10 d 左右，綜合子實體性狀、生物轉化率等指標，蛹蟲草CH?1、CA?1 菌株為優勢菌株，與模型選擇的菌株一致，表明抗氧化綜合能力高的菌株子實體農藝性狀也較好，說明模型具有一定可行性。

3 討論與結論

隨著社會經濟發展水平的提高，國內外市場對蛹蟲草的需求量急劇增加。研究表明，蛹蟲草發酵菌絲體也具有良好的生物活性，所以采用液體發酵技術大規模生產蛹蟲草菌絲體是滿足國內外市場需求的有效途徑，而發酵獲得的蛹蟲草菌絲體的產量及其抗氧化能力的高低在很大程度上決定了蛹蟲草菌種的優劣[21]。菌種優劣的評價通常采取出菇試驗來進行，但由于受多種因素影響，導致出菇試驗評價結果不穩定，并且實驗成本較高，周期比較長。目前，已有一些可以方便快捷評價菌種質量的相關報道：宋好倩[22]研究發現淀粉酶與蛹蟲草子實體的生長呈正相關，纖維素酶和淀粉酶活性在轉色期達到峰值；楊歡東[23]研究發現異硫氰酸烯丙酯（allyl?isothiocyanate，AITC）處理能夠有效保持SOD 酶活較高活性，提高鐵離子抗氧化能力（Ferric ion reducing antioxidant power，FRAP）值、DPPH自由基清除能力和ABTS 陽離子自由基清除能力；劉淑琴等[24]研究發現蛹蟲草子實體的產量與液體菌種的氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazolium chloride，TTC）酶活力呈正相關。

雖然相關研究對于蛹蟲草菌種質量評價具有重要意義，但從總體上來講，研究方法相對單一，難以綜合反映蛹蟲草菌株的生長活性和抗氧化活性的問題。本研究通過測定蛹蟲草菌株的菌絲生長活力、相關酶活及清除自由基等指標，對10 株供試菌株進行較為全面的評價，得到相關性分析結果：抗氧化綜合能力與發酵生物量、菌絲生長速度、β?葡萄糖苷酶活力、蛋白酶活力呈極顯著正相關（P＜0.01）；發酵生物量與菌絲生長速度、β?葡萄糖苷酶活力呈極顯著正相關（P＜0.01）；菌絲生長速度與β?葡萄糖苷酶活力、蛋白酶活力呈極顯著正相關（P＜0.01）；β?葡萄糖苷酶活力與蛋白酶活力呈極顯著正相關（P＜0.01）；這些生理生化指標可以作為蛹蟲草優良菌株篩選的重要指標。采用相關數據分析軟件建立得到了蛹蟲草菌株抗氧化綜合能力與發酵生物量、菌絲平均生長速度、β?葡萄糖苷酶活力、蛋白酶活力的數學模型，可以根據此模型來快速篩選出具有高抗氧化綜合能力的蛹蟲草菌株，克服了以往蛹蟲草菌株活力評價相關報道的單一性，通過結實性實驗對結果進一步驗證，表明抗氧化綜合能力高的菌株具有很好的子實體農藝性狀和生物轉化率，說明模型具有一定可行性，也為蛹蟲草優良菌種選育提供了一定的參考。