銀耳多糖對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)小鼠氧化性損傷所致疲勞的緩解作用

黃小蘭，黃少波，邵 麗

（1.重慶對(duì)外經(jīng)貿(mào)學(xué)院，重慶 401520；2.重慶市開(kāi)州區(qū)中醫(yī)院骨傷科，重慶 405400；3.重慶市開(kāi)州區(qū)中醫(yī)院兒科，重慶 405400）

隨著人們追求健康意識(shí)的提高，通過(guò)鍛煉來(lái)提高身體機(jī)能已成為大多數(shù)人的首選。適當(dāng)?shù)倪\(yùn)動(dòng)訓(xùn)練不僅能使身體更健康，還能改善睡眠和鍛煉身體[1]。然而，許多人的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度不當(dāng)，引起能量代謝（糖原等）失衡和代謝產(chǎn)物（脂質(zhì)過(guò)氧化物、乳酸、氨、離子等）積累，從而導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)疲勞的發(fā)生[2]。運(yùn)動(dòng)疲勞會(huì)進(jìn)一步破壞體內(nèi)氧化/抗氧化系統(tǒng)的平衡，并誘發(fā)一系列與疲勞相關(guān)的臨床表現(xiàn)，包括失眠、抑郁、認(rèn)知障礙等，這些破壞性損傷嚴(yán)重威脅著疲勞患者的健康和生活質(zhì)量[3]。由于其復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制，目前仍然無(wú)法獲得有效的藥物或策略來(lái)緩解疲勞。研究表明，氧化應(yīng)激，即活性氧（ROS）生成和抗氧化能力之間的不平衡，被認(rèn)為是疲勞的關(guān)鍵因素之一，力竭運(yùn)動(dòng)會(huì)引發(fā)ROS 的爆發(fā)，超過(guò)系統(tǒng)對(duì)ROS 解毒的能力，從而導(dǎo)致疲勞[4]。Nrf2 是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)，是維持細(xì)胞氧化還原穩(wěn)態(tài)的中心調(diào)節(jié)因子，在阻止氧化應(yīng)激和維持組織和器官氧化還原狀態(tài)的穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[5]，因此，通過(guò)靶向Nrf2 去除過(guò)量的ROS 將是一種很有前途的預(yù)防疲勞的有效策略，而天然抗氧化劑之所以受到關(guān)注，是因?yàn)槠潴@人的抗氧化能力和安全性。

銀耳是一種食用菌，具有多種生物學(xué)功能，包括免疫調(diào)節(jié)、抗癌、降血脂和降血糖等作用[6]。研究表明，采用不同劑量蕎麥銀耳連續(xù)灌胃小鼠30 d 后，均可延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，提高小鼠肝糖原含量，減少血清尿素氮的產(chǎn)生[7]。近年來(lái)，許多研究表明銀耳的活性成分是多糖，而且銀耳多糖（Tremella fuciformispolysaccharides，TFP）存在一定的抗氧化和抗炎作用[8]。已有研究顯示，銀耳多糖處理人真皮成纖維細(xì)胞可以抑制細(xì)胞中ROS 的增加。體外研究表明，銀耳多糖可以清除各種自由基，如超氧化物、羥基自由基等[7]，能有效降低非酒精性脂肪性肝病大鼠模型體內(nèi)炎癥水平[9]。然而，對(duì)TFP 在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中對(duì)氧化應(yīng)激和炎癥啟動(dòng)的調(diào)節(jié)中的作用知之甚少。已有文獻(xiàn)報(bào)道珍珠菇、杏鮑菇多糖能通過(guò)減輕氧化應(yīng)激發(fā)揮抗疲勞作用[10-11]，本研究假設(shè)TFP 可能對(duì)減輕力竭運(yùn)動(dòng)后的氧化損傷有效，采用TFP 預(yù)處理小鼠，并通過(guò)游泳運(yùn)動(dòng)建立力竭運(yùn)動(dòng)小鼠模型，探討TFP 對(duì)力竭性運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的氧化損傷的影響及其潛在的分子機(jī)制，以期為銀耳多糖的藥理研究做理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

雄性C57BL/6 小鼠 SPF 級(jí)，18～22 g，4 周齡，中國(guó)科學(xué)院上海動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（滬）2017-0005，每籠10 只，12 h 的明暗循環(huán)，以標(biāo)準(zhǔn)嚙齒動(dòng)物飲食和自來(lái)水進(jìn)行喂養(yǎng)，并保持在恒定的環(huán)境溫度（23±1 ℃）、濕度（55%±5%），動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)該實(shí)驗(yàn)程序（批準(zhǔn)號(hào)：2021-0312）；L6 大鼠骨骼肌細(xì)胞 齊氏生物科技有限公司（江陰市，中國(guó)），在含有10%胎牛血清和1%青霉素-鏈霉素的GIBCO DMEM 高糖培養(yǎng)基中，在37±2 ℃和5% CO2下培養(yǎng)；銀耳 重慶市玉屏菜市場(chǎng)；試劑盒LA、BUN、ROS、SOD、MDA、GSH-Px、TNF-α、IL-6 南京建成生物工程研究所；兔抗Nrf2、NQO1、HO-1、β-actin、HRP 標(biāo)記的羊抗兔IgG 二抗 碧云天生物技術(shù)有限公司。

DMIL LED 萊卡倒置熒光顯微鏡 德國(guó)徠卡公司；BIO-RAD 伯樂(lè)電泳成像系統(tǒng) 美國(guó)BIO-RAD公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 銀耳多糖的提取 準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥粉碎且過(guò)40 目的銀耳粉末，按照1:20 的物料比（w/v）加入蒸餾水，將樣品在100 ℃沸水中煎煮3 次，每次3 h，合并濾液，濃縮樣品，向濃縮液中加入無(wú)水乙醇，并使其終濃度為80%，離心（4000 r/min，4 ℃）15 min，收集沉淀物，丙酮洗滌三次，干燥，得到粗多糖。將其溶解在蒸餾水中至濃度為10 mg/mL，將溶液轉(zhuǎn)移到透析袋中，透析48 h，6 h 換水一次，減壓濃縮，與1/3 體積的Sevag 試劑（氯仿/正丁醇4:1，v/v）混合，攪拌30 min，3500 r/min 離心10 min，重復(fù)脫蛋白3 次。所得溶液濃縮至1/4 體積，D101 大孔樹(shù)脂純化，蒸餾水洗脫，收集濾液，濃縮、冷凍干燥得到銀耳多糖，苯酚-濃硫酸法檢測(cè)銀耳多糖含量為92.48%，其主要成分為甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和巖藻糖[12]。

1.2.2 細(xì)胞活力測(cè)定 將L6 細(xì)胞接種到96 孔板（1×104個(gè)/孔）中，采用終濃度分別為0、50、100、200、400 μg/mL 的TFP 處理48 h，更換110 μL（CCK-8 10 μL+培養(yǎng)基100 μL）培養(yǎng)基，5% CO2中37 ℃下孵育1.5 h，酶標(biāo)儀450 nm 測(cè)定吸光度值，計(jì)算細(xì)胞活力。細(xì)胞活力（%）=（A給藥-A空白）/（A對(duì)照-A空白）×100。

1.2.3 LA 水平檢測(cè) 將L6 細(xì)胞（1×104個(gè)/孔）接種在96 孔板，設(shè)置3 組，包括對(duì)照組、H2O2（200 μmol/L，預(yù)實(shí)驗(yàn)獲得）組、H2O2（200 μmol/L）+TFP（100μg/mL）組，5% CO2中37 ℃下孵育 48 h，按照LA試劑盒說(shuō)明書(shū)要求檢測(cè)上清中LA 的水平。

1.2.4 Western blot 實(shí)驗(yàn) 將L6 細(xì)胞（1×105個(gè)/mL）接種在6 孔板，參照“1.2.3”分組，孵育48 h，采用RIPA 裂解液裂解細(xì)胞，BCA 法檢測(cè)蛋白質(zhì)水平，將蛋白質(zhì)（30 μg）轉(zhuǎn)移在每個(gè)泳道中，SDS-PAGE 分離蛋白，并轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上。在室溫下用5%脫脂奶封閉1 h 后，用抗Nrf2（1:1000）、血紅素加氧酶-1（HO-1，1:10000）、NADPH 醌氧化還原酶-1（NQO-1，1:1000）、β-肌動(dòng)蛋白（1:2000）一抗孵育，4 ℃過(guò)夜。TBST 洗滌三次，二抗（1:1000）在室溫下孵育1 h，用TBST 清洗三次，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光溶液（ECL）處理?xiàng)l帶，Image J 軟件分析蛋白條帶。

1.2.5 動(dòng)物分組及給藥 C57BL/6 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為五組，即安靜組、模型組、TFP 組（50、100、200 mg/kg，預(yù)實(shí)驗(yàn)確定劑量），每組10 只，TFP 組連續(xù)灌胃TFP，模型組灌胃相同劑量的蒸餾水，每天1 次，連續(xù)2 周。

1.2.6 力竭運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通過(guò)重慶對(duì)外經(jīng)貿(mào)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查（編號(hào)：CSDW2022 005）。除了安靜組，其余各組小鼠進(jìn)行力竭游泳運(yùn)動(dòng)，游泳池（90×45×45 cm），裝滿(mǎn)水，溫度保持在36±2 ℃，水深35 cm。小鼠最初適應(yīng)游泳訓(xùn)練，每天20 min，持續(xù)3 d。末次給藥30 min 后進(jìn)行力竭運(yùn)動(dòng)：小鼠尾巴上附重（其體重的3%）游泳，通過(guò)觀察協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)的中斷和游泳失敗來(lái)確定疲勞。當(dāng)小鼠未能在3 s 內(nèi)返回表面呼吸時(shí)，立即記錄耐受時(shí)間，從眼竇靜脈叢取血，并以3000×g、4 ℃離心10 min 分離血清。然后，用戊巴比妥鈉（50 mg/kg）腹膜內(nèi)麻醉小鼠，處死小鼠，收集肝臟和骨骼肌并將其儲(chǔ)存在-80 ℃。

1.2.7 指標(biāo)的檢測(cè) 肝臟或骨骼肌采用PBS（0.1 mol/L，pH7.4）勻漿，將樣品3000×g、4 ℃離心10 min 分離上清，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)肝糖原（LG）、骨骼肌糖原（MG）；取血清，ELISA 法檢測(cè)血清中尿素氮（BUN）、乳酸（LA）、ROS、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、TNF-α、IL-6 和NF-κBp65 水平。Western blot 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Nrf2、HO-1、NQO-1 蛋白表達(dá)水平。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)值均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用Graph Pad Prism（5.0 版）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析。P＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 銀耳多糖對(duì)L6 細(xì)胞活力及外源性H2O2 誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的影響

為了探索TFP 對(duì)L6 細(xì)胞活力的影響，本研究進(jìn)行了細(xì)胞活力測(cè)定，發(fā)現(xiàn)高達(dá)400 μg/mL TFP 未觀察到細(xì)胞毒性（圖1A）。因此，在隨后的實(shí)驗(yàn)中使用了100 μg/mL TFP（預(yù)實(shí)驗(yàn)獲得）進(jìn)行試驗(yàn)。

圖1 銀耳多糖對(duì)L6 細(xì)胞活力及外源性H2O2 誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的影響Fig.1 Effect of Tremella fuciformis polysaccharides on L6 cell viability and oxidative stress induced by exogenous H2O2

圖1B 顯示，L6 細(xì)胞內(nèi)加入H2O2后，H2O2組培養(yǎng)液中LA 水平明顯增加，說(shuō)明該組細(xì)胞已經(jīng)出現(xiàn)LA 外漏，在加入TFP 后，細(xì)胞培養(yǎng)液的LA 水平明顯下調(diào)，說(shuō)明TFP 能夠減少LA 的外漏，拮抗H2O2所致的氧化損傷。研究顯示，Nrf2/HO-1 信號(hào)通路的激活可以抑制氧化應(yīng)激[13]。Nrf2 作為一種轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子，在細(xì)胞自我保護(hù)中發(fā)揮重要作用，是氧化應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。正常情況下，Nrf2 穩(wěn)定存在于細(xì)胞質(zhì)中，氧化應(yīng)激發(fā)生時(shí)，Nrf2 進(jìn)入細(xì)胞核，從而作用于HO-1，從而啟動(dòng)下游蛋白的表達(dá)，抵抗氧化應(yīng)激所致的毒性作用[14]。本研究表明，H2O2+TFP組Nrf2、HO-1、NQO-1 蛋白水平極顯著（P＜0.01）低于H2O2組（圖1C、圖1D），說(shuō)明TFP 可能通過(guò)激活Nrf2/HO-1 信號(hào)通路抑制氧化應(yīng)激的表達(dá)，減少氧化應(yīng)激損傷。

2.2 銀耳多糖對(duì)小鼠力竭游泳的影響

力竭游泳時(shí)間可以直接反映運(yùn)動(dòng)能力以及藥物的抗疲勞效果[15]，本研究評(píng)估了銀耳多糖對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間。結(jié)果顯示，銀耳多糖延長(zhǎng)了力竭游泳時(shí)間（圖2A），表明銀耳多糖具有有效的抗疲勞作用。此外，疲勞期間有一系列生物標(biāo)志物會(huì)發(fā)生變化，包括LA、BUN、肝糖原和肌糖原。其中，LA 是身體運(yùn)動(dòng)過(guò)程中產(chǎn)生的廢物，而力竭運(yùn)動(dòng)會(huì)導(dǎo)致血液中LA 增加[16]。BUN 是人類(lèi)蛋白質(zhì)代謝的主要終產(chǎn)物，其含量與運(yùn)動(dòng)性疲勞呈正相關(guān)，即BUN 消除得越快，疲勞緩解得越快[17]。

圖2 銀耳多糖對(duì)小鼠力竭游泳的影響Fig.2 Effect of Tremella fuciformis polysaccharides on exhaustive swimming in mice

此外，肌糖原是糖在肌肉中的儲(chǔ)存形式，反映了能量?jī)?chǔ)備，而肝糖原負(fù)責(zé)劇烈運(yùn)動(dòng)期間的直接能量供應(yīng)[18]。本研究結(jié)果顯示，與安靜組比較，模型組LA、BUN 極顯著（P＜0.01）增加，肝糖原、肌糖原極顯著（P＜0.01）降低，說(shuō)明力竭運(yùn)動(dòng)所致疲勞模型建立成功。與模型組比較，TFP 組（50、100、200 mg/kg）LA（P＜0.01）和BUN（P＜0.05，P＜0.01）的水平顯著降低，肝糖原和肌糖原的含量顯著（P＜0.05，P＜0.01）增加（圖2B～圖2E）；這些結(jié)果表明，銀耳多糖不僅能加速有害代謝產(chǎn)物的消除，還能恢復(fù)身體能量，從而緩解疲勞。

2.3 銀耳多糖對(duì)力竭游泳的小鼠氧化應(yīng)激水平影響

SOD 調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和自由基，MDA 反映氧化應(yīng)激的程度，ROS 是一種化學(xué)活性物質(zhì)，由氧分子組成，包括氧自由基、羥基自由基、過(guò)氧化氫[19]。在生理?xiàng)l件下，身體會(huì)產(chǎn)生一定量的ROS，這些ROS 會(huì)被體內(nèi)的SOD 和GSH-Px 等抗氧化劑清除，以阻止氧化損傷；然而，在疲勞等病理?xiàng)l件下，抗氧化酶的活性會(huì)受到阻礙，多余的ROS 會(huì)積聚，MDA 水平也會(huì)升高[20]。有規(guī)律的體育鍛煉已被證明可以增加人類(lèi)和動(dòng)物血液和組織中的抗氧化酶活性，這可歸因于一種補(bǔ)償反應(yīng)，以抵消與氧化應(yīng)激相關(guān)的可能有害影響。然而，其他研究報(bào)告稱(chēng)，劇烈運(yùn)動(dòng)會(huì)導(dǎo)致血液和組織中抗氧化酶活性急劇下降，而且過(guò)度的氧化應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致疲勞[21]，因此本研究研究了TFP 對(duì)小鼠力竭性運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的影響。本研究結(jié)果顯示，與安靜組比較，模型組ROS、MDA 極顯著（P＜0.01）增加，SOD、GSH-Px 極顯著降低（P＜0.01），說(shuō)明力竭運(yùn)動(dòng)所致小鼠體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)出現(xiàn)紊亂。與模型組比較，TFP 組（50、100、200 mg/kg）ROS（P＜0.01）、MDA（P＜0.05，P＜0.01）的水 平顯著降低，SOD、GSH-Px 的含量顯著（P＜0.01）增加（圖3A～圖3D），這些結(jié)果表明，TFP 的抗疲勞作用與其顯著的抗氧化特性有關(guān)。

圖3 銀耳多糖對(duì)力竭游泳的小鼠氧化應(yīng)激水平影響Fig.3 Effect of Tremella fuciformis polysaccharides on oxidative stress levels in mice after exhaustive swimming

2.4 銀耳多糖對(duì)力竭游泳的小鼠的炎癥水平的影響

本研究中，模型組小鼠血清中NF-κB 被激活，導(dǎo)致炎癥因子過(guò)度分泌。TFP 的干預(yù)可以抑制NFκBp65 的表達(dá)（圖4B），進(jìn)而抑制TNF-α、IL-6 的炎癥指標(biāo)（圖4A、圖4C），這與其他的研究結(jié)果一致[22]，NF-κB 的激活可刺激TNF-α、IL-6 等炎癥因子的表達(dá)，加重機(jī)體組織損傷。研究表明，炎癥和氧化應(yīng)激相互作用，持續(xù)的氧化應(yīng)激導(dǎo)致炎癥的發(fā)展，炎癥進(jìn)一步促進(jìn)大量氧自由基的產(chǎn)生，導(dǎo)致身體失衡[23]。本研究結(jié)果顯示，本研究結(jié)果顯示，與安靜組比較，模型組NF-κB、TNF-α、IL-6 的炎癥指數(shù)極顯著（P＜0.01）升高，提示模型組小鼠存在炎癥損傷。與模型組比較，TFP 組（50、100、200 mg/kg）NF-κB、TNF-α、IL-6 的水平極顯著（P＜0.01）降低（圖4A～圖4C），提示TFP 可能對(duì)氧化應(yīng)激和炎癥水平具有較好的調(diào)節(jié)作用。

圖4 銀耳多糖對(duì)力竭游泳的小鼠的炎癥水平的影響Fig.4 Effect of Tremella fuciformis polysaccharides on inflammation levels in exhausted swimming mice

2.5 銀耳多糖對(duì)力竭游泳的小鼠的Nrf2/HO-1 信號(hào)通路的影響

研究顯示，Nrf2 信號(hào)通路與過(guò)度運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的疲勞氧化損傷有關(guān)。在氧化還原穩(wěn)態(tài)下，Nrf2 與細(xì)胞質(zhì)中的kelch 樣ECH 相關(guān)蛋白1（Keap1）結(jié)合，以保持失活狀態(tài)。相反，在氧化應(yīng)激刺激下，Nrf2 從Keap1 解離，然后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，引起下游基因的激活，包括HO-1、NQO-1[24]。因此，開(kāi)發(fā)新的藥物或策略，通過(guò)調(diào)節(jié)Nrf2 信號(hào)通路來(lái)延緩疲勞的產(chǎn)生和/或促進(jìn)疲勞的消除，具有重要意義[25]。本研究結(jié)果表明，與安靜組比較，模型組Nrf2、HO-1 和NQO-1 蛋白質(zhì)水平極顯著（P＜0.01）降低。與模型組比較，TFP 組（50、100、200 mg/kg）Nrf2、HO-1 和NQO-1的水平顯著（P＜0.05，P＜0.01）增加（圖5A～圖5B），這些發(fā)現(xiàn)表明，TFP 促進(jìn)Nrf2 蛋白表達(dá)，從而激活其下游的HO-1、NQO-1。

圖5 銀耳多糖對(duì)力竭游泳的小鼠的Nrf2/ HO-1 信號(hào)通路的影響Fig.5 Effect of Tremella fuciformis polysaccharides on the Nrf2/HO-1 signaling pathway in exhausted swimming mice

3 討論與結(jié)論

過(guò)度訓(xùn)練或高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)易導(dǎo)致疲勞的發(fā)生，身體活動(dòng)不再是自發(fā)的，這也會(huì)增加ROS 的產(chǎn)生，加重疲勞。在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的生成和能量消耗過(guò)程中，ROS 的過(guò)量產(chǎn)生會(huì)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，導(dǎo)致疲勞誘導(dǎo)物質(zhì)的產(chǎn)生[26]。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)TFP 有效地保護(hù)了外源性H2O2刺激的L6 細(xì)胞，并且ROS 的產(chǎn)生在所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)組中顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。因此，本研究認(rèn)為T(mén)FP 調(diào)節(jié)ROS 的清除。由于游泳力竭時(shí)間指標(biāo)可以直接反映運(yùn)動(dòng)能力以及藥物的抗疲勞效果，本研究評(píng)估了TFP 對(duì)力竭游泳時(shí)間的影響。結(jié)果表明，TFP 延長(zhǎng)了力竭游泳時(shí)間，表明TFP具有有效的抗疲勞作用。此外，還研究了給藥后TFP 是否能有效地作為抗疲勞劑。由于BUN 和血乳酸水平是與線粒體功能相關(guān)的生化指標(biāo)，而氧化應(yīng)激與能量產(chǎn)生有關(guān)[27]。在本研究中，給藥組的小鼠的BUN 和乳酸水平明顯下調(diào)，說(shuō)明TFP 能調(diào)節(jié)線粒體代謝。

氧化應(yīng)激是疲勞損傷的主要機(jī)制之一，ROS 的大量產(chǎn)生將導(dǎo)致抗氧化防御能力的破壞或消耗，增加MDA 水平。SOD、GSH-Px 作為一種重要的抗氧化酶，在清除超氧化物自由基和抵抗氧化應(yīng)激方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用[28]。MDA 是細(xì)胞膜上的一種識(shí)別受體，自由基的產(chǎn)生與MDA 密切相關(guān)[29]。本研究結(jié)果表明，TFP 下調(diào)ROS、MDA 水平，上調(diào)SOD、GSHPx 的表達(dá)，證實(shí)TFP 對(duì)運(yùn)動(dòng)性損傷的改善作用與其通過(guò)增強(qiáng)抗氧化酶活性而清除自由基的作用有關(guān)。該研究的數(shù)據(jù)還表明，用TFP 處理可以顯著增加Nrf2 水平，上調(diào)下游HO-1 的表達(dá)，表明TFP 具有顯著的抗氧化應(yīng)激作用。Nrf2/HO-1 信號(hào)通路的激活可以抑制氧化應(yīng)激，Nrf2 作為一種轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子，在細(xì)胞自我保護(hù)中發(fā)揮重要作用，是氧化應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[30]。本研究表明，TFP 可能通過(guò)激活Nrf2/HO-1 信號(hào)通路抑制氧化應(yīng)激蛋白MDA 的表達(dá)，從而有效抵抗氧化應(yīng)激損傷。研究顯示，自由基的增加可能導(dǎo)致炎癥的發(fā)展[31]。在本研究中，模型組MDA 的脂質(zhì)過(guò)氧化水平高于對(duì)照組，TFP 處理組表現(xiàn)出較低的脂質(zhì)過(guò)氧化水平，增加Nrf2/HO-1 的活性，抑制NF-κB、TNF-α、IL-6 的表達(dá)，減緩炎癥損傷這，這些都說(shuō)明TFP 可抑制氧化應(yīng)激，進(jìn)而抑制炎癥反應(yīng)。

總之，TFP 改善了H2O2刺激的L6 細(xì)胞中的線粒體功能障礙和氧化應(yīng)激。而且TFP 能通過(guò)介導(dǎo)Nrf2/HO-1 信號(hào)通路有效緩解小鼠的力竭性運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的氧化損傷。這些發(fā)現(xiàn)表明，TFP 可以作為一種潛在的新型天然抗氧化劑，可以延緩疲勞。