外周血miR-30a對膿毒血癥并發ARDS患者預后的預測價值

歐陽銀, 唐偉偉

安慶市立醫院急診科, 安徽安慶246003

膿毒血癥是臨床較為常見的危重癥狀,流行病學調查顯示,膿毒血癥的發病率為0.3%,隨著人口老齡化的不斷升高,膿毒血癥的發病率也呈現逐年上升的趨勢[1-2]。如果臨床對膿毒血癥不及時進行有效科學的治療,最終會導致多器官受累[3]。肺是最早也是最常見的受累器官,隨著肺內炎癥細胞的聚集以及炎癥介質的釋放,免疫失調,肺泡上皮細胞和肺毛細血管內皮細胞損傷,彌漫性肺間質和肺泡水腫,最后引發急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS),ARDS是臨床較為常見的膿毒血癥的并發癥[4]。隨著患者ARDS的發生,病情逐步加重,病死率也呈現顯著的上升趨勢。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)作為一種氧化應激信號轉導的重要物質,細胞外調節蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)屬于MAPK家族,ERK信號通路是一種重要的信號轉導通路[5]。miR-30a能夠促進氣道上皮細胞的新生血管增生,進一步造成氣道的高反應性,引發機體產生ARDS[6]。而在ARDS的疾病進展過程中,ERK蛋白、磷酸化蛋白的異常表達最終會造成組織細胞的凋亡,而在此過程中會導致外周血miR-30a水平升高,因此miR-30a水平的監測對于患者的預后評價具有重要的意義。本研究主要分析外周血miR-30a對膿毒血癥并發ARDS患者預后的預測價值,以期指導臨床診治。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2021年1月—2022年7月在本院就治的100例膿毒血癥合并ARDS患者為研究對象,其中男66例,女34例,平均年齡(70.95±11.40)歲,體質指數(24.83±1.02)kg/m2,急性生理與慢性健康評分(acute physiology and chronic health evaluation,APACHEII)為(21.49±5.65)分,序貫器官衰竭估計評分(sequential organ failure assessment,SOFA)為(8.91±2.79)分。根據患者28天的生存情況分為死亡組35例,生存組65例,兩組患者的一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05;表1)。本研究經本醫院倫理委員會論證通過,所有患者均簽署知情同意書。納入標準:①符合歐洲危重醫學會頒布的膿毒血癥診斷標準[7];②符合呼吸窘迫綜合征診斷標準。排除標準:①合并慢性心、肝、腎等臟器功能嚴重障礙;②伴有急性冠狀動脈綜合征;③伴有惡性腫瘤疾病;④近3個月接受免疫抑制劑治療。

表1 兩組臨床資料比較

1.2 miR-30a檢測

所有患者入院后,均靜脈采血4 mL,按照TRIzol試劑(北京百奧萊博科技有限公司)說明書提取血清總RNA,采用qRT-PCR方法進行擴增,擴増方法:95 ℃條件下預變性5 min,94 ℃變性30 s,50～60 ℃退火30 s,72 ℃延伸10 min,35個循環。miR-30a的檢測采取2-ΔΔCT方法進行計算,ΔCT=CT目的基因-CT內參。

1.3 ERK蛋白及磷酸化蛋白水平測定

Western blotting實驗嚴格按照試劑盒操作,采用Image-lab軟件進行條帶分析,以β-actin為參考蛋白,計算兩組的MAPK通路中的ERK蛋白及磷酸化蛋白水平。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0統計軟件處理數據。計量資料采用t檢驗,計數資料采用χ2檢驗。采用ROC曲線分析miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白對預后的預測價值。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者的miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白水平比較

死亡組的miR-30a水平、磷酸化蛋白高于生存組,ERK蛋白低于生存組(P<0.05;表2)。

表2 兩組患者的miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白水平比較

2.2 miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白對死亡的聯合檢測效能比較

通過聯合檢測效能進行分析,miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白聯合檢測對膿毒血癥并發ARDS的診斷特異度較高(表3)。

表3 miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白聯合檢測效能比較 %

2.3 ROC曲線分析

ROC曲線分析顯示,miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白聯合檢測對膿毒血癥并發ARDS患者預后的預測效能高于單獨檢測(表4和圖1)。

圖1 ROC曲線分析

表4 ROC曲線分析

3 討 論

膿毒血癥的病理基礎為全身性的炎性反應,隨著疾病的進展,全身的炎癥細胞被過度激活后,機體的炎性反應呈現級聯反應,機體對于炎性反應的控制水平顯著下降,嚴重影響患者的生命安全[8-9]。在疾病的早期,及時對ARDS產生的風險進行評估,及時通過有效措施降低患者發生ARDS的風險,對于臨床具有積極的意義。但是在臨床指標中,由于膿毒血癥患者的炎性反應以及氧化應激反應對常規的生化指標的干擾,采取常規生化指標對患者的ARDS進行預測存在一定的局限性[10]。微小核苷酸是近年來的研究疾病進展的熱點,其相對穩定性對于臨床治療具有相對的指導意義[11]。在膿毒血癥患者的疾病進展中,其引發的炎癥瀑布反應均會造成呼吸道黏膜的損傷,其發生ARDS的風險顯著升高[12]。

ERK蛋白作為MAPK家族,參與調控氣道上皮細胞相關炎癥因子的表達[13]。而在此階段,隨著炎性反應的不斷變化,最終引發機體的正常呼吸道黏膜細胞的損傷以及凋亡,在此過程中,miR-30a在血清中的釋放水平顯著升高。而在本研究中,合并ARDS患者的miR-30a水平呈現上升趨勢。miR-30a主要存在呼吸道黏膜細胞中,隨著膿毒血癥疾病的不斷進展,其局部產生的炎癥因子對于黏膜細胞的刺激性作用,其發生凋亡的風險顯著升高,在呼吸道細胞中的miR-30a不斷在血液中釋放,造成miR-30a的顯著升高[14]。通過對miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白的聯合檢測的效能分析,對ARDS的預測效能升高,可作為臨床診斷的重要依據。提示miR-30a可通過對ERK蛋白、磷酸化蛋白的顯著調控作用,進而影響患者的疾病進展。miR-30a還可通過對細胞之間的脂質代謝的調節,影響細胞與細胞之間的黏附作用,也是患者ARDS進展的重要因素。miR-30a是MAPK/ERK信號途徑的重要節點,通過對患者的miR-30a水平的檢測,可以有效對患者的預后進行預測。

綜上所述,外周血miR-30a、ERK蛋白以及磷酸化蛋白表達異常可作為膿毒血癥并發ARDS患者預后判定的重要依據。