理肺散提取物乙酸乙酯層的化學成分及其對RGC-5細胞損傷的保護作用研究*

王鈺君，尹國平，胡昌華，曾令高，熊有明△

（1.西南大學藥學院·黃連開發與利用教育部工程研究中心，重慶 400716；2.重慶市食品藥品檢驗檢測研究院·國家藥品監督管理局麻醉精神藥品質量監測重點實驗室，重慶 401121）

理肺散為茜草科耳草屬植物攀援耳草Hedyotis scandensRoxb.的全株，又名涼喉茶、接骨丹等，為我國白族、傣族、納西族、傈僳族等民間常用藥食兩用植物。理肺散性涼，味苦，歸肺、腎經，具有清熱解毒、理肺止咳、潤肺化痰、接骨續筋等功效，主治肺結核、肺炎、支氣管炎、咽喉腫痛、骨折等［1］。研究表明，耳草屬植物的主要化學成分為黃酮類、環烯醚萜類、生物堿類等，其主要藥理學活性為抗腫瘤、抗菌、鎮痛、消炎、抗氧化、神經保護等［2］。理肺散用途廣泛且資源豐富，其發揮作用的物質基礎具有巨大的研究價值。但目前關于理肺散化學成分的研究僅有3篇文獻報道，從其乙醇提取物中分離鑒定了28 個化合物，包括黃酮類6 個、三萜類6 個、甾體類1 個、酚酸類15 個［3-5］。本課題組前期對該植物全株的水提取物進行了系統的化學成分和抗結核活性研究，在此基礎上，本研究中進一步對理肺散提取物乙酸乙酯層的化學成分進行研究，并以丙泊酚誘導的RGC-5細胞損傷為活性評價模型，探討各化合物對RGC-5細胞損傷的保護作用?，F報道如下。

1 儀器、試藥與細胞

1.1 儀器

400 MHz 核磁共振儀（德國Bruker 公司）；LC110 型制備型高效液相色譜儀（賽譜銳思<北京>科技有限公司）；LC-20A 分析型和制備型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；C18制備色譜柱（250 mm×10 mm，日本YMC 公司；250 mm × 20 mm，日本Shimadzu 公司）；Varioskan LUX型多功能酶標儀（美國Thermo Fisher公司）；MCO-15AC-SC型二氧化碳培養箱（日本Sanyo公司）。

1.2 試藥

柱色譜硅膠（200～300 目，青島海洋化工廠）；甲醇（色譜純，阿達瑪斯試劑有限公司）；乙酸乙酯、石油醚（分析純，重慶川東化工<集團>有限公司）；二甲基亞砜（DMSO，美國Sigma公司，批號為D2650）；Dulbecco改良的Eagle 培養基（DMEM）/F12 培養基（批號為C11330500BT），胎牛血清（批號為10099-141），均購自美國Gibco 公司；胰蛋白酶（批號為C0201），青霉素-鏈霉素溶液（100X）（批號為C0222），CCK-8 試劑盒（批號為C0039），均購自上海碧云天生物技術有限公司；丙泊酚（美國Aspen 公司，批號為SA084）；理肺散采自云南大理，經西南大學胡昌華教授鑒定為正品。

1.3 細胞

小鼠視網膜神經節RGC-5細胞（中國科學院細胞庫，批號為BNCC359850）。

2 方法與結果

2.1 提取與分離

取理肺散干燥全草20 kg，粉碎，用鹽酸水溶液（pH=5）加熱回流提取3 次，每次2 h，濃縮得水提浸膏3 kg。藥渣用95%乙醇加熱回流提取2次，每次2 h，濃縮得醇提浸膏1 kg。將浸膏以1∶2（m∶V）的比例加水混懸，用氫氧化鈉溶液調pH 至9～10，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別得水提浸膏乙酸乙酯層140.0 g 和醇提浸膏乙酸乙酯層171.3 g。

水提浸膏乙酸乙酯層通過中性氧化鋁色譜柱分離，利用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，得7 個組分（Fr.A1～Fr.A7）。Fr.A1（10.6 g）經MCI柱色譜分離，得31個亞組分（Fr.A1.1～Fr.A1.31）；Fr.A1.13經制備液相色譜（93%甲醇）分離，得化合物12（32.5 mg）。Fr.A3（12.1 g）經MCI柱色譜分離，得80個亞組分（Fr.A3.1～Fr.A3.80）；Fr.A3.24 經制備液相色譜（27%甲醇）分離，得化合物14（10.2 mg）；Fr.A3.27 經制備液相色譜（33%甲醇）分離，得化合物15（12.2 mg）；Fr.A3.64 經制備液相色譜（66%甲醇）分離，得化合物11（5.1 mg）；Fr.A3.76經制備液相色譜（67%甲醇）分離，得化合物1（6.7 mg）。Fr.A4（6.4 g）經MCI 柱色譜分離，得30 個亞組分（Fr.A4.1～Fr.A4.30）；Fr.A4.13經制備液相色譜（41%甲醇）分離，得化合物3（7.4 mg）；Fr.A4.16 經制備液相色譜（46%甲醇）分離，得化合物4（7.0 mg）和化合物5（16.0 mg）；Fr.A4.21 經制備液相色譜（56%甲醇）分離，得化合物6（4.8 mg）；Fr.A4.23經制備液相色譜（51%甲醇）分離，得化合物8（10.3 mg）。

醇提浸膏乙酸乙酯層通過硅膠色譜柱分離，利用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，得10個組分（Fr.B1～Fr.B7）。Fr.B3（7.2 g）經MCI 柱色譜分 離，得34 個亞組分（Fr.B3.1～Fr.B3.34）；Fr.B3.10經制備液相色譜（63%甲醇）分離，得化合物13（6.9 mg）。Fr.B4（13.4 mg）經MCI 柱色譜分離，得36 個亞組分（Fr.B4.1～Fr.B4.36）；Fr.B4.24 經制備液相色譜（85%甲醇）分離，得化合物9（8.4 mg）和化合物10（18.4 mg）。Fr.B5（14.39 mg）經MCI 柱色譜分離，得60 個亞組分（Fr.B5.1～Fr.B5.60）；Fr.B5.16 經制備液相色譜（48%甲醇）分離，得化合物7（6.7 mg）；Fr.B5.37 經制備液相色譜（74%甲醇）分離，得化合物2（9.7 mg）。

2.2 結構鑒定

2.2.1 化合物1

黃色油狀物。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：6.84（1H，d，J=7.9 Hz，H-5），6.78（1H，d，J=1.9 Hz，H-2），6.73（1H，dd，J=8.0，1.9 Hz，H-6），5.34（1H，m，H-14），5.29（1H，m，H-13），4.33（2H，d，J=5.6 Hz，H-7），3.85（3H，s，3-OCH3），2.18（3H，dd，J=9.2，6.0 Hz，H-9，15），1.96（2H，m，H-12），1.63（2H，m，H-10），1.36（2H，m，H-11），0.93（6H，d，J=6.8 Hz，H-16，17）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：130.7（C-1），110.9（C-2），146.9（C-3），145.4（C-4），114.6（C-5），121.0（C-6），43.8（C-7），173.0（C-8），36.9（C-9），25.6（C-10），29.5（C-11），32.4（C-12），126.7（C-13），138.3（C-14），31.2（C-15），22.9（C-16），22.9（C-17），56.2（3-OCH3）。以上數據與文獻［6］報道基本一致，故鑒定為capsaicin。

2.2.2 化合物2

黃色油狀物。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：8.16（1H，t，J=5.9 Hz，4-OH），6.79（1H，d，J=1.9 Hz，H-2），6.68（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.62（1H，dd，J=8.0，1.9 Hz，H-6），4.13（2H，d，J=5.8 Hz，H-7），3.72（3H，s，3-OCH3），2.09（2H，t，J=7.3 Hz，H-9），1.49（3H，m，H-10，16），1.23（8H，m，H-11，12，13，14），1.12（2H，q，J=6.7Hz，H-15），0.84（6H，d，J=6.6 Hz，H-17，18）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：130.5（C-1），111.6（C-2），147.8（C-3），145.3（C-4），115.1（C-5），119.6（C-6），41.8（C-7），171.9（C-8），35.4（C-9），25.3（C-10），28.7（C-11），28.7（C-12），29.0（C-13），26.7（C-14），38.4（C-15），27.3（C-16），22.5（C-17），22.5（C-18），55.5（3-OCH3）。以上數據與文獻［6］報道基本一致，故鑒定為 homodihydrocapsaicin Ⅰ。

2.2.3 化合物3

黃色油狀物。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：8.59（2H，s，4-OH，4'-OH），6.63（4H，d，J=7.9 Hz，H-2，5，2'，5'），6.50（2H，dd，J=7.9，1.9 Hz，H-6，6'），4.50（2H，t，J=5.0 Hz，9-OH，9'-OH），3.68（6H，s，3-OCH3，3'-OCH3），3.38（4H，dd，J=8.2，4.5 Hz，H-9，9'），1.82（2H，m，H-8，8'）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：132.2（C-1，1'），113.0（C-2，2'），147.2（C-3，3'），144.3（C-4，4'），115.0（C-5，5'），121.1（C-6，6'），34.0（C-7，7'），42.5（C-8，8'），60.2（C-9，9'），55.4（3-OCH3，3'-OCH3）。以上數據與文獻［7］報道基本一致，故鑒定為secoisolari-ciresinol。

2.2.4 化合物4

無色油狀物。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：8.76（2H，d，4-OH，4'-OH），6.82（1H，d，J=1.7 Hz，H-2'），6.74（1H，d，J=1.9 Hz，H-2），6.69（1H，s，H-6'），6.67（2H，m，H-5，5'），6.57（1H，dd，J=8.0，1.9 Hz，H-6），4.64（1H，d，J=6.3 Hz，H-7'），3.86（1H，dd，J=8.2，6.5 Hz，H-9），3.74（3H，s，3-OCH3），3.73（3H，s，3'-OCH3），3.65（1H，dd，J=10.8，7.3 Hz，H-9'），3.54（1H，dd，J=8.2，6.5 Hz，H-9），3.45（1H，dd，J=10.8，7.3 Hz，H-9'），2.82（1H，dd，J=13.5，4.8 Hz，H-7），2.57（1H，m，H-8），2.41（1H，dd，J=13.4，10.9 Hz，H-7），2.18（1H，p，J=6.9 Hz，H-8'）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：131.7（C-1），112.7（C-2），147.3（C-3），144.5（C-4），115.0（C-5），120.5（C-6），32.1（C-7），41.9（C-8），71.8（C-9），134.6（C-1'），110.0（C-2'），147.4（C-3'），145.5（C-4'），115.3（C-5'），118.1（C-6'），81.7（C-7'），52.3（C-8'），58.6（C-9'），55.6（3-OCH3），55.5（3'-OCH3）。以上數據與文獻［8］報道基本一致，故鑒定為lariciresinol。

2.2.5 化合物5

無色油狀物。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.95（1H，s，H-6），6.92（2H，d，J=6.0 Hz，H-2，2'），6.76（2H，s，H-5，6'），6.47（1H，d，J=15.9 Hz，H-7），6.21（1H，dt，J=15.9，5.3 Hz，H-8），5.46（1H，d，J=6.6 Hz，H-7'），4.09（1H，d，J=3.8 Hz，H-9），3.80（3H，s，3-OCH3），3.75（3H，s，3'-OCH3），3.66（2H，m，H-9'），3.45（1H，q，J=6.4 Hz，H-8'）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：132.3（C-1），110.4（C-2），147.5（C-3），146.4（C-4），115.3（C-5），118.5（C-6），87.2（C-7），53.0（C-8），62.9（C-9），129.5（C-1'），110.4（C-2'），143.6（C-3'），147.1（C-4'），130.5（C-5'），114.9（C-6'），128.9（C-7'），128.0（C-8'），61.6（C-9'），55.7（3-OCH3），55.6（3'-OCH3）。以上數據與文獻［9］報道基本一致，故鑒定為dehydrodiconiferyl alcohol。

2.2.6 化合物6

白色固體。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：9.23（1H，s，4'-OH），7.96（1H，d，J=9.5 Hz，H-4），7.03（1H，d，J=1.9 Hz，H-5），6.92（1H，s，H-6'），6.88（1H，dd，J=8.1，1.9 Hz，H-5'），6.82（1H，d，J=8.1 Hz，H-2'），6.34（1H，d，J=9.5 Hz，H-3），4.99（1H，d，J=7.9 Hz，H-7'），4.32（1H，m，H-8'），3.78（6H，d，J=2.4 Hz，6-OCH3，3'-OCH3），3.67（1H，m，H-9'）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：160.0（C-2），113.2（C-3），144.8（C-4），100.8（C-5），145.3（C-6），137.1（C-7），131.7（C-8），138.0（C-9），111.2（C-10），126.7（C-1'），112.1（C-2'），147.6（C-3'），147.3（C-4'），115.4（C-5'），120.8（C-6'），76.2（C-7'），77.8（C-8'），59.8（C-9'），55.9（6-OCH3），55.8（3'-OCH3）。以上數據與文獻［10］報道基本一致，故鑒定為cleomiscosin A。

2.2.7 化合物7

黃色油狀物。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：9.81（1H，s，H-7'），7.39（2H，d，H-2'，6'），6.88（3H，s，H-2，4，6），5.67（1H，d，J=7.1 Hz，H-7），3.97（2H，m，H-9），3.93（3H，s，3'-OCH3），3.85（3H，s，3-OCH3），3.69（1H，m，H-8）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：132.2（C-1），119.7（C-2），147.0（C-3），114.7（C-4），146.3（C-5），109.0（C-6），89.7（C-7），52.9（C-8），64.1（C-9），131.6（C-1'），112.5（C-2'），145.3（C-3'），154.3（C-4'），129.0（C-5'），121.1（C-6'），190.8（C-7'），56.2（3-OCH3），56.3（3'-OCH3）。以上數據與文獻［11］報道基本一致，故鑒定為curcasinlignan B。

2.2.8 化合物8

黃色油狀物。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：6.56（4H，br，s，H-2，2'，6，6'），5.51（2H，br，s，H-4，4'），4.71（2H，br，s，H-7，7'），4.26（2H，m，H-9，9'），3.88（14H，br，s，H-9，9'，11，11'，12，12'），3.07（2H，br，s，H-8，8'）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：132.3（C-1，1'），103.0（C-2，2'，6，6'），147.4（C-3，3'，5，5'），134.5（C-4，4'），86.3（C-7，7'），54.4（C-8，8'），72.0（C-9，9'），56.4（C-11，11'，12，12'）。以上數據與文獻［12］報道基本一致，故鑒定為syringaresinol。

2.2.9 化合物9

白色粉末。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：5.15（1H，t，J=3.6 Hz，H-12），4.28（1H，s，H-3），1.08（3H，s，H-27），0.88（3H，s，H-30），0.86（3H，s，H-29），0.84（3H，s，H-25），0.71（3H，s，H-24），0.66（3H，s，H-23）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：38.0（C-1），26.9（C-2），76.8（C-3），38.3（C-4），54.8（C-5），18.0（C-6），32.4（C-7），38.9（C-8），47.1（C-9），36.6（C-10），22.9（C-11），121.5（C-12），143.8（C-13），41.3（C-14），27.2（C-15），23.3（C-16），45.7（C-17），40.8（C-18），45.4（C-19），30.4（C-20），33.3（C-21），32.1（C-22），28.2（C-23），16.0（C-24），15.1（C-25），16.8（C-26），25.6（C-27），178.5（C-28），32.8（C-29），22.6（C-30）。以上數據與文獻［13］報道基本一致，故鑒定為oleanolic acid。

2.2.10 化合物10

白色粉末。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：5.13（1H，s，H-12），3.00（1H，dd，J=10.3，5.6 Hz，H-3），2.11（1H，d，J=11.3 Hz，H-18），1.04（3H，s，H-23），0.92（3H，s，H-29），0.90（3H，s，H-27），0.87（3H，s，H-26），0.81（3H，s，H-30），0.75（3H，s，H-24），0.68（3H，s，H-25）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：38.2（C-1），26.9（C-2），76.8（C-3），38.5（C-4），54.8（C-5），18.0（C-6），32.7（C-7），41.6（C-8），46.8（C-9），36.3（C-10），22.8（C-11），124.5（C-12），138.2（C-13），41.6（C-14），27.5（C-15），23.8（C-16），47.0（C-17），52.4（C-18），38.4（C-19），38.3（C-20），30.2（C-21），36.5（C-22），28.2（C-23），15.2（C-24），16.0（C-25），16.9（C-26），23.2（C-27），178.2（C-28），16.9（C-29），21.0（C-30）。以上數據與文獻［14］報道基本一致，故鑒定為ursolic acid。

2.2.11 化合物11

白色固體粉末。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：8.21（2H，d，J=7.7 Hz，H-2'，6'），7.63（1H，t，J=7.7 Hz，H-4'），7.50（2H，t，J=7.7 Hz，H-3'，5'），7.10（1H，d，J=8.1 Hz，H-5），6.96（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），6.90（1H，dd，J=8.1，2.0 Hz，H-6），3.82（3H，s，3-OCH3），3.72（3H，s，8-OCH3），3.64（2H，s，H-7）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：132.8（C-1），113.7（C-2），151.3（C-3），139.2（C-4），122.9（C-5），121.6（C-6），41.1（C-7），171.7（C-8），129.5（C-1'），130.3（C-2'，6'），128.5（C-3'，5'），133.4（C-4'），164.7（C-7'），56.0（3-OCH3），52.1（8-OCH3）。以上數據與文獻［15］報道基本一致，故鑒定為methyl 4-benzoyloxy-3-methoxybenzeneacetate。

2.2.12 化合物12

無色油狀物。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：9.38（1H，s，H-20），6.64（1H，d，J=5.7 Hz，H-2），5.90（1H，d，H-3），5.10～4.98（2H，m，H-9，15），2.33（1H，d，J=17.8，1.5 Hz，H-5），2.16（4H，d，J=3.3 Hz，H-7，8），1.99（1H，d，J=17.8，1.5 Hz，H-5），1.92～1.73（3H，m，H-13，14），1.66（3H，s，Me-11），1.62（3H，s，Me-17），1.59（3H，s，Me-12），1.52（3H，s，Me-18），1.39～1.30（1H，m，H-13），1.16（3H，s，Me-19）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：141.5（C-1），145.8（C-2），118.0（C-3），150.8（C-4），42.0（C-5），36.2（C-6），37.8（C-7），25.6（C-8），123.2（C-9），132.3（C-10），17.7（C-11），25.2（C-12），38.4（C-13），25.7（C-14），124.8（C-15），131.1（C-16），25.2（C-17），17.9（C-18），23.9（C-19），193.3（C-20）。以上數據與文獻［16］報道基本一致，故鑒定為（R）-6-methyl-4，6-bis（4-methylpent-3-enyl）cyclohexa-1，3-dienecarbaldehyde。

2.2.13 化合物13

黃色固體。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：8.24（2H，dd，J=5.9，3.3 Hz，H-5，8），8.12（1H，d，J=8.4 Hz，H-4），7.75（2H，m，H-6，7），7.33（1H，d，J=8.5 Hz，H-3），4.02（3H，s，1-OCH3）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：146.9（C-1），155.8（C-2），120.5（C-3），126.0（C-4），127.3（C-5），134.1（C-6，7），127.0（C-8），182.7（C-9），182.3（C-10），133.2（C-11），134.7（C-12），125.9（C-13），127.8（C-14），62.5（1-OCH3）。以上數據與文獻［17］報道基本一致，故鑒定為2-hydroxy-1-methoxy-anthraquinone。

2.2.14 化合物14

白色固體。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.89（1H，d，J=9.4 Hz，H-4），7.03（1H，s，H-5），7.01（1H，s，H-8），6.23（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），3.86（3H，s，Me-11）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：160.7（C-2），112.5（C-3），144.3（C-4），111.9（C-5），143.9（C-6），151.9（C-7），100.0（C-8），148.3（C-9），111.5（C-10），56.1（C-11）。以上數據與文獻［18］報道基本一致，故鑒定為isoscopoletin。

2.2.15 化合物15

白色固體。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.18（1H，s，NH-1），9.94（1H，s，CHO-10），8.28（1H，s，H-2），8.10（1H，d，J=7.8 Hz，H-4），7.51（1H，d，J=7.8 Hz，H-7），7.23（2H，m，H-5，6）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：138.4（C-2），118.1（C-3），123.4（C-4），122.1（C-5），120.8（C-6），112.6（C-7），137.1（C-8），124.1（C-9），184.9（C-10）。以上數據與文獻［19］報道基本一致，故鑒定為1H-indole-3-carboxaldehyde。

2.3 生物活性評價

細胞毒性篩選：將RGC-5細胞培養于含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養基中，以每孔1×103個的密度接種于96孔板（每孔100μL），培養24 h后，將細胞分為空白對照組、溶劑對照組和化合物組，棄上清液，化合物組每孔加入100 μL 不同濃度（3.75，7.5，15，30 μmol/L）的待測化合物，培養結束后，每孔加入10 μL CCK-8溶液，將培養板置培養箱內孵育1～4 h。用酶標儀測定450 nm 波長處的吸光度（OD）值，計算細胞存活率。細胞存活率（%）=（OD化合物組-OD空白對照組）/（OD溶劑對照組-OD空白對照組）×100%。重復試驗3 次。結果溶劑對照組的細胞存活率為100.00%；藥物濃度為15μmol/L 時，化合物1，5，7-11，15 均表現出較好的細胞活力，其細胞存活率均大于86%；其他化合物在濃度為30μmol/L時也表現出較好的細胞活力，其細胞存活率均大于87%。故選擇細胞存活率不低于85%的藥物濃度對丙泊酚誘導的RGC-5 細胞損傷模型進行活性評價，化合物15在30 μmol/L 濃度時細胞存活率存在一定差異，故選擇15μmol/L作為化合物15的給藥濃度。詳見表1。

表1 不同濃度化合物對RGC-5細胞的毒性（%）Tab.1 Toxic effects of compounds with different concentrations on RGC-5 cells（%）

RGC-5 細胞損傷模型的保護作用活性評價：將RGC-5 細胞培養于含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養基中，以每孔1×103個的密度接種于96孔板（每孔100μL），培養24 h后，將細胞分為空白對照組、溶劑對照組、模型組（400μmol/L丙泊酚）和化合物組（400μmol/L丙泊酚+15，30 μmol/L 待測化合物），棄上清液，按分組加入相應藥物培養48 h，培養結束后，向每孔加入10μL CCK-8 溶液，將培養板置培養箱內孵育1～4 h。用酶標儀測定450 nm 波長處的OD值，計算細胞存活率。細胞存活率（%）=（OD化合物組-OD空白對照組）/（OD溶劑對照組-OD空白對照組）×100%。重復試驗3次。結果與溶劑對照組比較，模型組細胞出現明顯病理改變，細胞存活率顯著下降（100.00%比76.27%）；化合物1，4，6-8 對丙泊酚誘導的RGC-5 細胞損傷均表現出一定的保護活性，其中化合物4，7 最強，分別使RGC-5 細胞的活力增加15.89%，13.09%。詳見表2。

表2 不同化合物對丙泊酚誘導的RGC-5細胞損傷的保護活性Tab.2 Protective effects of different compounds on propofol-induced RGC-5 cell injury

3 討論

理肺散作為民間常用藥食兩用植物，應用廣泛，資源豐富，是重要的民族藥。但目前對理肺散的研究較少，該資源未能被有效開發與利用。本研究中理肺散提取物的乙酸乙酯層經正相硅膠柱和MCI 柱等現代柱色譜技術進行分離，采用制備型高效液相色譜儀進行純化，應用核磁共振法對化合物進行結構鑒定。最終共分離鑒定出15個化合物，分別為capsaicin（化合物1）、homodihydrocapsaicin Ⅰ（化合物2）、secoisolariciresinol（化合物3）、lariciresinol（化合物4）、dehydrodiconiferyl alcohol（化合物5）、cleomiscosin A（化合物6）、curcasinlignan B（化合物7）、syringaresinol（化合物8）、oleanolic acid（化合物9）、ursolic acid（化合物10）、methyl 4-benzoyloxy-3-methoxybenzeneacetate（化合物11）、（R）-6-methyl-4，6-bis（4-methylpent-3-enyl）cyclohexa-1，3-dienecarbaldehyde（化合物12）、2-hydroxy-1-methoxy-anthraquinone（化合物13）、isoscopoletin（化合物14）、1H-indole-3-carboxaldehyde（化合物15）。其中，化合物1-7 為首次從耳草屬中分離發現，化合物9-10，13 為首次從理肺散中分離發現。以丙泊酚誘導的RGC-5細胞損傷為活性評價模型，采用CCK-8 法評估各化合物對RGC-5 細胞的保護作用，活性評價結果顯示，化合物1，4，6-8對丙泊酚誘導的RGC-5細胞損傷均表現出一定的保護活性，其中化合物4、化合物7活性最強，為理肺散的進一步開發和利用奠定了基礎。