正交實(shí)驗(yàn)結(jié)合AHP和GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)優(yōu)化益黃散醇提工藝 Δ

王 巍 ，楊武杰 ，韓 宇 ，安悅言 ，郝 季 ，張 強(qiáng) ，鞠成國(guó) （.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 6600；.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 0874）

益黃散出自宋代錢乙的《小兒藥證直訣》，又名補(bǔ)脾散，為補(bǔ)脾經(jīng)典方劑。該方由陳皮、青皮、炮訶子、炙甘草、丁香組成，用于治療小兒脾胃虛弱、脾疳、腹大、身瘦[1]。方中陳皮用量獨(dú)大，為君藥，性溫，味辛、苦，專入脾胃，行氣健脾；青皮性溫，味苦，為臣藥，有疏肝破氣、消積化滯之效；訶子性溫，味酸、澀，為臣藥，炮制后澀腸止瀉效果更佳；炙甘草性平，味甘，為佐藥，補(bǔ)脾和胃，調(diào)和諸藥；丁香性溫，味辛，為使藥，入胃，溫中散寒降逆；諸藥合用，共奏健運(yùn)脾氣、行氣化濕之功[2]。該方在現(xiàn)代臨床多用于治療小兒厭食癥及脾虛泄瀉，用法以湯劑為主，但以上5 味藥材水煎液苦澀味重，兒童服用依從性差，因此將其開(kāi)發(fā)成適合兒童使用的現(xiàn)代劑型尤為重要。文獻(xiàn)研究表明，方中各味藥材所含化學(xué)成分（如橙皮苷、訶子酸、甘草酸、丁香酚）等均具有良好的醇溶性[3—6]，加上本課題組前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，方中各化學(xué)成分的水提取率較低。因此，為了充分提取該方中有效成分，本研究擬對(duì)該方醇提工藝進(jìn)行優(yōu)化研究。

層次分析法（analytic hierarchy process，AHP）是一種將定性與定量相結(jié)合的系統(tǒng)的層次化的分析方法，其通過(guò)將復(fù)雜問(wèn)題分解成多個(gè)因素，再對(duì)多個(gè)因素進(jìn)行兩兩比較，最終確定各因素的權(quán)重大小[7]。反向傳播神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（back propagation neural network，簡(jiǎn)稱BP 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)）是按誤差逆?zhèn)鞑ニ惴ㄓ?xùn)練的多層前饋網(wǎng)絡(luò)，通過(guò)梯度下降法的思想，使網(wǎng)絡(luò)預(yù)期值與實(shí)際值均方誤差最小，已在中藥提取工藝研究中得到廣泛應(yīng)用[8]。但BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)存在收斂速度慢，易陷入局部最小值等缺點(diǎn)[9]。遺傳算法（genetic algorithm，GA）是結(jié)合了進(jìn)化論和遺傳學(xué)機(jī)理的全局尋優(yōu)算法[10]，能對(duì)BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的初始權(quán)重和閾值進(jìn)行優(yōu)化，提高其收斂速度，避免陷入局部最小值[11]。

基于以上理論分析，本研究擬采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，利用AHP確定各指標(biāo)權(quán)重并計(jì)算綜合評(píng)分，再對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果和GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，確定益黃散最佳醇提工藝參數(shù)，為新劑型開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有LC-16 型高效液相色譜儀[島津儀器（蘇州）有限公司]、FA1004B 型萬(wàn)分之一分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、METTLER AE240型十萬(wàn)分之一天平（瑞士Mettler-Toledo公司）、U3010型紫外-可見(jiàn)分光光度儀（日本Hitachi公司）。

1.2 主要藥品與試劑

陳皮（批號(hào)2209007，產(chǎn)地四川）、青皮（批號(hào)2210002，產(chǎn)地江西）、訶子（批號(hào)2208002，產(chǎn)地廣西）、炙甘草（批號(hào)2208005，產(chǎn)地內(nèi)蒙古）、丁香（批號(hào)2209001，產(chǎn)地廣西）均購(gòu)自安國(guó)市聚藥堂藥業(yè)有限公司，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院宋慧鵬副教授鑒定分別為蕓香科植物橘CitrusreticulataBlanco.的干燥成熟果皮和未成熟果實(shí)的果皮、使君子科植物訶子TerminaliachebulaRetz.的干燥成熟果實(shí)、豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根和根莖的炮制加工品、桃金娘科植物丁香EugeniacaryophyllataThunb.的干燥花蕾。

對(duì)照品橙皮苷（批號(hào)MUST-16041806）、沒(méi)食子酸（批號(hào)MUST-13040103）、甘草苷（批號(hào)MUST-16032801）、甘草酸單銨鹽（批號(hào)MUST-16032110）、丁香酚（批號(hào)MUST-16040204）均購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司，純度均大于98%；對(duì)照品川陳皮素（批號(hào)PCS-220412）、橘皮素（批號(hào)PCS-220402）均購(gòu)自成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司，純度均大于98%；對(duì)照品訶黎勒酸（批號(hào)PRF8112302）、訶子酸（批號(hào)PRF8071201）均購(gòu)自成都普瑞法科技開(kāi)發(fā)有限公司，純度均大于98%；乙腈、甲醇、甲酸均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 益黃散干浸膏的制備及干浸膏得率的測(cè)定

按處方配比稱取陳皮40 g、青皮20 g、炮訶子（取凈訶子置鍋內(nèi)，文火加熱，炒至深黃色，取出，放涼，砸去果核，留取果肉，即得）20 g、炙甘草20 g、丁香8 g，共同置于粉碎機(jī)中粉碎，得處方樣品。取處方樣品加入一定量乙醇溶液，加熱回流提取，4 層200 目絹布過(guò)濾，濾液經(jīng)減壓濃縮和60 ℃真空干燥，即得益黃散干浸膏。精密稱定干浸膏質(zhì)量，計(jì)算干浸膏得率。

2.2 益黃散干浸膏中9種活性成分的含量測(cè)定

2.2.1 混合對(duì)照品溶液的制備

精密稱取各對(duì)照品適量，加甲醇配制成含橙皮苷1 820.0 μg/mL、川陳皮素220.0 μg/mL、橘皮素180.0 μg/mL、沒(méi)食子酸860.0 μg/mL、訶黎勒酸1 220.0 μg/mL、訶子酸1 540.0 μg/mL、甘草苷820.0 μg/mL、甘草酸870.0 μg/mL、丁香酚340.0 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取“2.1”項(xiàng)下所得干浸膏0.3 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入40%甲醇10 mL，超聲（功率240 W，頻率40 kHz）5 min 使完全溶解，經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備

分別稱取缺陳皮和青皮、缺炮訶子、缺炙甘草、缺丁香的益黃散處方，按“2.1”項(xiàng)下方法制備干浸膏，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備各陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 色譜條件、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)及色譜峰的歸屬

色譜柱為菲羅門Titank C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.1%甲酸-5%甲醇溶液，梯度洗脫（0～8 min，5%A→6%A；8～12 min，6%A→12%A；12～30 min，12%A→17%A；30～58 min，17%A；58～68 min，17%A→30%A；68～80 min，30%A→50%A；80～90 min，50%A→60%A；90～95 min，60%A→80%A）；流速為1 mL/min；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)分別為283 nm（0～80 min）、250 nm（80～82 min）、283 nm（82～86 min）、330 nm（86～95 min）。取“2.2.1”“2.2.2”“2.2.3”項(xiàng)下各溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示，該色譜條件下各成分色譜峰的分離度均大于1.5，理論板數(shù)均大于5 000。其中色譜峰5（橙皮苷）、8（川陳皮素）、9（橘皮素）來(lái)源于陳皮與青皮，色譜峰1（沒(méi)食子酸）、2（訶黎勒酸）、4（訶子酸）來(lái)源于炮訶子，色譜峰3（甘草苷）、6（甘草酸）來(lái)源于炙甘草，色譜峰7（丁香酚）來(lái)源于丁香。

圖1 混合對(duì)照品和各缺味陰性樣品的HPLC圖

2.2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，用甲醇依次稀釋2、4、8、16、32、64、128倍，然后按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄各成分色譜峰峰面積，以各成分的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。所得線性回歸方程和線性范圍如下：橙皮苷Y＝12 559X－225.4（r＝0.999 9），線性范圍為56.9～1 820.0μg/mL；川陳皮素Y＝27 193X+200.65（r＝0.999 9），線性范圍為6.9～220.0 μg/mL；橘皮素Y＝32 786X+151.4（r＝0.999 6），線性范圍為5.6～180.0 μg/mL；沒(méi)食子酸Y＝24 286X+85.7（r＝0.999 7），線性范圍為26.9～860.0μg/mL；訶黎勒酸Y＝9 485.2X+14.8（r＝0.999 9），線性范圍為38.1～1 220.0 μg/mL；訶子酸Y＝11 410X+90.1（r＝0.999 8），線性范圍為48.1～1 540.0 μg/mL；甘草苷Y＝10 113X+78.8（r＝0.999 9），線性范圍為25.6～820.0μg/mL；甘草酸Y＝4 710.4X+46.6（r＝0.999 8），線性范圍為27.2～870.0 μg/mL；丁香酚Y＝3 367.1X－33.8（r＝0.999 7），線性范圍為10.6～340.0 μg/mL。結(jié)果表明，各成分在其進(jìn)樣質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)得橙皮苷、川陳皮素、橘皮素、沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、甘草苷、甘草酸、丁香酚峰面積的RSD分別為0.42%、0.63%、0.24%、1.12%、0.44%、0.39%、1.27%、0.82%、1.24%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并于制備后0、2、4、8、12、24 h 按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)得橙皮苷、川陳皮素、橘皮素、沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、甘草苷、甘草酸、丁香酚峰面積的RSD 分別為0.53%、0.76%、0.71%、0.48%、1.05%、0.78%、1.26%、0.92%、0.74%（n＝6），表明該供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下方法平行制備6 份益黃散干浸膏，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜峰峰面積，代入“2.2.5”項(xiàng)下線性回歸方程計(jì)算各成分含量。結(jié)果顯示，橙皮苷、川陳皮素、橘皮素、沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、甘草苷、甘草酸、丁香酚的平均含量分別為4.44、0.33、0.17、1.33、8.54、10.29、1.41、1.47、1.69 mg/g，RSD 分別為0.36%、0.75%、0.52%、0.95%、1.06%、1.25%、0.78%、0.52%、0.93%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取“2.1”項(xiàng)下已知待測(cè)成分含量的處方樣品6份，每份2 g，分別按1∶1的比例精密加入各對(duì)照品，按“2.1”項(xiàng)下方法制備益黃散干浸膏，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，橙皮苷、川陳皮素、橘皮素、沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、甘草苷、甘草酸、丁香酚的平均加樣回收率分別為98.16%、99.32%、101.47%、99.02%、97.25%、98.72%、101.24%、98.29%、99.22%，RSD分別為0.78%、1.32%、0.83%、0.68%、1.41%、0.87%、0.74%、1.06%、0.93%（n＝6），表明該方法準(zhǔn)確度較好。

2.3 益黃散中各指標(biāo)權(quán)重的確定及樣品綜合評(píng)分計(jì)算

2.3.1 AHP判斷矩陣的建立

采用SPSSPRO 在線數(shù)據(jù)分析平臺(tái)（https：//www.spsspro.com）進(jìn)行分析。根據(jù)“君臣佐使”原則、主要活性成分的藥效作用及含量，設(shè)置各指標(biāo)的重要程度依次為橙皮苷＞川陳皮素＝橘皮素＝?jīng)]食子酸＝訶黎勒酸＝訶子酸＞甘草苷＝甘草酸＞丁香酚≈干浸膏得率，再利用AHP 一致矩陣法，將各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行兩兩比較，構(gòu)建AHP指標(biāo)成對(duì)比較的判斷優(yōu)先矩陣，詳見(jiàn)表1。

表1 AHP指標(biāo)成對(duì)比較的判斷優(yōu)先矩陣

2.3.2 計(jì)算各指標(biāo)權(quán)重系數(shù)

根據(jù)“2.3.1”項(xiàng)下所得的AHP 指標(biāo)成對(duì)比較的判斷優(yōu)先矩陣，采用和積法計(jì)算各指標(biāo)權(quán)重系數(shù)，得到橙皮苷、川陳皮素、橘皮素、沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、甘草苷、甘草酸、丁香酚、干浸膏得率的權(quán)重系數(shù)（W1～W10）依次為20.631%、11.741%、11.741%、11.741%、11.741%、11.741%、6.449%、6.449%、3.884%、3.884%。

2.3.3 一致性檢驗(yàn)

對(duì)矩陣進(jìn)行一致性檢驗(yàn)，所得一致性指標(biāo)（consistency index，CI）為0.005，一致性比例（consistency ratio，CR）為0.004，均小于0.1，表明該矩陣具有一致性[7]。

2.3.4 綜合評(píng)分計(jì)算

根據(jù)“2.3.2”項(xiàng)下所得權(quán)重系數(shù)，按公式（1）計(jì)算單因素考察和正交實(shí)驗(yàn)所得供試品的綜合評(píng)分。式中Y1～Y9依次為供試品中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素、沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、甘草苷、甘草酸、丁香酚的含量，Y10為干浸膏得率，Y1MAX～Y9MAX依次為同一實(shí)驗(yàn)的供試品中上述成分含量的最大值，Y10為同一實(shí)驗(yàn)的供試品干浸膏得率的最大值。

2.4 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化益黃散醇提工藝

2.4.1 因素與水平的確定

本研究前期以乙醇體積分?jǐn)?shù)、液料比、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，以綜合評(píng)分為考察指標(biāo)進(jìn)行了單因素考察，并根據(jù)單因素考察結(jié)果確定了乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%～70%、液料比為10∶1～14∶1（mL/g）、提取時(shí)間為60～120 min、提取次數(shù)為2次。

2.4.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

按“2.1”項(xiàng)下方法放大制備處方樣品，取該處方樣品9 份，每份10 g，用于正交實(shí)驗(yàn)。根據(jù)單因素考察結(jié)果，以乙醇體積分?jǐn)?shù)（A）、料液比（B）、提取時(shí)間（C）為考察因素，以綜合評(píng)分為考察指標(biāo)，設(shè)計(jì)3 因素3 水平的L9（34）正交實(shí)驗(yàn)，因素與水平見(jiàn)表2。按“2.1”項(xiàng)下方法制得益黃散干浸膏，測(cè)定干浸膏得率，每個(gè)序號(hào)平行3次實(shí)驗(yàn)；按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)并代入線性回歸方程計(jì)算各成分含量，取平均值，計(jì)算綜合評(píng)分。

表2 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化益黃散醇提取工藝的因素與水平

2.4.3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

正交實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果見(jiàn)表3，由直觀分析結(jié)果可知，各因素對(duì)綜合評(píng)分的影響作用強(qiáng)弱依次為B＞A＞C，各因素不同水平對(duì)綜合評(píng)分的影響作用強(qiáng)弱依次為A2＞A3＞A1、B3＞B1＞B2、C2＞C3＞C1。方差分析結(jié)果見(jiàn)表4，由結(jié)果可知，B因素對(duì)綜合評(píng)分有顯著影響（P＜0.05），A、C因素對(duì)綜合評(píng)分無(wú)顯著影響（P＞0.05）。因此，確定正交實(shí)驗(yàn)所得益黃散最佳醇提工藝為A2B3C2，即乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%、液料比為14∶1（mL/g）、提取時(shí)間為90 min、提取2次。

表3 正交實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果（n＝3）

表4 方差分析結(jié)果

2.5 GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)建模預(yù)測(cè)益黃散最佳醇提工藝

2.5.1 GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)建模

利用MATLAB R2021b 軟件構(gòu)建3 層結(jié)構(gòu)的BP 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，輸入層神經(jīng)元個(gè)數(shù)設(shè)置為3，分別為乙醇體積分?jǐn)?shù)（A）、液料比（B）、提取時(shí)間（C）；輸出層神經(jīng)元個(gè)數(shù)設(shè)置為1，即綜合評(píng)分；通過(guò)查閱文獻(xiàn)和試錯(cuò)法確定隱藏神經(jīng)元個(gè)數(shù)為5。以9 組正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為訓(xùn)練樣本進(jìn)行GA-BP 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)建模，選擇tansig 函數(shù)作為隱含層傳遞函數(shù)，purelin函數(shù)作為輸出層傳遞函數(shù)，采用GA全局搜索BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的最佳初始權(quán)值和閾值，提高BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)收斂速度和預(yù)測(cè)精度。設(shè)置總體進(jìn)化迭代次數(shù)為80、種群規(guī)模為10、交叉概率為0.4、變異概率為0.05，進(jìn)行全局尋優(yōu)，確定BP 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)最佳初始權(quán)值和閾值。設(shè)定網(wǎng)絡(luò)訓(xùn)練參數(shù)值，最大訓(xùn)練次數(shù)為 5 000 000次，訓(xùn)練精度為0.001，學(xué)習(xí)率為0.5；采用sim仿真函數(shù)進(jìn)行仿真輸出網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)，最終對(duì)構(gòu)建好的GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證結(jié)果顯示，所構(gòu)建的GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的均方誤差為0.000 12，預(yù)測(cè)值與真實(shí)值之間的相對(duì)誤差為0.82%，表明訓(xùn)練后的GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)性能良好。

2.5.2 益黃散最佳提取工藝預(yù)測(cè)

設(shè)置醇提工藝參數(shù)為乙醇體積分?jǐn)?shù)50%～70%（步長(zhǎng)為5）、液料比10:1～14∶1（步長(zhǎng)為1）、提取時(shí)間為60～120 min（步長(zhǎng)為10），將各因素進(jìn)行排列組合，共排列出150種組合。在訓(xùn)練好的GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)基礎(chǔ)上，輸入排列出的150 種醇提工藝參數(shù)進(jìn)行預(yù)測(cè)。預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%、液料比為14∶1（mL/g）、提取時(shí)間為60 min時(shí)綜合評(píng)分最高，為84.45分，因此確定以上參數(shù)為最佳預(yù)測(cè)醇提工藝參數(shù)。

2.6 兩種方法所得最佳提取工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

分別對(duì)正交實(shí)驗(yàn)以及正交實(shí)驗(yàn)結(jié)合AHP 和GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)得到的最佳提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證。按“2.1”項(xiàng)下方法平行制備3份益黃散干浸膏，測(cè)定干浸膏得率；按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定各成分含量，計(jì)算綜合評(píng)分，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果顯示，GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)的益黃散最佳醇提工藝綜合評(píng)分較高，因此確定益黃散最佳醇提工藝參數(shù)：乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%，液料比為14∶1（mL/g），提取時(shí)間為60 min，提取2次。

表5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n＝3）

3 討論

文獻(xiàn)研究表明，陳皮中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素是其發(fā)揮燥濕健脾的主要活性成分，常作為陳皮的質(zhì)量標(biāo)志物[12—13]。青皮、陳皮植物來(lái)源相同，采收時(shí)間不同，兩者化學(xué)成分相近但含量有所差異[14]。研究表明，陳皮與青皮中橙皮苷、川陳皮素、橘皮素含量的明顯差異可用于解釋兩者功效的差異[15]，故筆者推測(cè)橙皮苷、川陳皮素、橘皮素同樣可作為青皮的質(zhì)量標(biāo)志物。趙鹿等[16]通過(guò)對(duì)訶子的化學(xué)成分、藥理作用等進(jìn)行分析，推測(cè)沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸可作為訶子及其炮制品的質(zhì)量標(biāo)志物。孫媛等[17]結(jié)合指紋圖譜及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究，推測(cè)甘草苷、甘草酸可作為甘草及其炮制品的質(zhì)量標(biāo)志物。丁香中的丁香酚是丁香揮發(fā)油的主要活性成分，占70%以上[18]，可作為丁香的質(zhì)量標(biāo)志物。本研究以各藥味的質(zhì)量標(biāo)志物為指標(biāo)優(yōu)化益黃散醇提工藝，有利于保證復(fù)方藥效的發(fā)揮。另外，由于質(zhì)量標(biāo)志物與藥味的功效具有極高的相關(guān)性，以質(zhì)量標(biāo)志物為指標(biāo)進(jìn)行提取工藝優(yōu)化，所得提取物可代表該藥味的主要藥效成分群，亦可代表該藥味所發(fā)揮的功效。因此，可根據(jù)藥味在復(fù)方中“君臣佐使”的地位進(jìn)行對(duì)應(yīng)指標(biāo)成分的權(quán)重設(shè)置。

正交實(shí)驗(yàn)因其高效率、快速、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，已在中藥提取工藝研究中得到廣泛應(yīng)用，但這種優(yōu)化方式所得結(jié)果具有一定局限性，而基于正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果所搭建的GABP 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)能對(duì)任意提取工藝參數(shù)進(jìn)行預(yù)測(cè)，可得到最佳預(yù)測(cè)提取工藝參數(shù)。本研究對(duì)正交實(shí)驗(yàn)所得最佳工藝參數(shù)與GA-BP 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)所得最佳工藝參數(shù)進(jìn)行比較驗(yàn)證，結(jié)果表明預(yù)測(cè)所得工藝的綜合評(píng)分高于正交實(shí)驗(yàn)工藝，證明了GA-BP 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)結(jié)果的可靠性。

綜上，采用正交實(shí)驗(yàn)結(jié)合GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的尋優(yōu)方法較傳統(tǒng)的正交實(shí)驗(yàn)尋優(yōu)方法效果更佳，其優(yōu)選出的益黃散最佳醇提工藝[乙醇體積分?jǐn)?shù)65%、液料比14∶1（mL/g）、提取時(shí)間60 min、提取2次]穩(wěn)定可靠。