宮頸癌組織中DEK 與MMP-7、N-cadherin 的表達及臨床意義

曹 江，楊麥青，葛 莉，喬海燕，高利利，張慶軍

（1.濰坊市中醫院婦產科，山東 濰坊 261041；2.濰坊市人民醫院病理科，山東 濰坊 261041；3.濰坊市中醫院腦病科，山東 濰坊 261041）

宮頸癌是常見的婦科癌癥之一，每年導致全球311 000 人死亡[1，2]。根據癌癥統計數據，我國宮頸癌占全球子宮頸癌的20.2%，占我國女性腫瘤總發病數的5.2%，女性腫瘤總死亡數的5%[3-5]。盡管已有用于預防宮頸癌的疫苗及各種用于宮頸癌的診斷和篩查檢測，包括HPV 檢測、細胞學檢測和陰道鏡檢查，有效降低了宮頸癌的死亡率[6-8]。然而，對宮頸癌前篩查和早期診斷仍需進一步的研究。DEK 原癌基因（DEK）是一種跨物種存在且廣泛分布與多細胞生物的原癌基因。鈣黏附蛋白（cadherins）是一類表達于細胞表面的糖蛋白類分子，與胞內不同的連環蛋白相連，介導細胞間的黏附功能。其中以上皮性鈣黏附分子（E-cadherin）和神經性鈣黏附分子（N-cadherin）分布最廣泛[9，10]。在腫瘤形成的過程中，N-cadherin 的表達有助于血管形成及上皮細胞-間質細胞的遷移，從而使腫瘤細胞更加富于侵襲性，易于轉移。神經上皮（N-E）鈣黏素蛋白轉換是細胞發生上皮間充質轉換（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）重要的分子標志[11]。基質金屬蛋白酶（MMP）是溶解基質的一組重要酶類，是一個鈣依賴性、含鋅蛋白水解酶家族，參與多種腫瘤相關過程，包括細胞凋亡、血管生成和上皮-間充質轉化[12，13]。而MMP-7 基因是MMP 家族中最小的成員（18 kDa），被認為是由腫瘤細胞直接分泌的，主要在上皮來源的細胞中表達，與許多上皮性腫瘤的轉移能力有關[14]。本研究采用免疫組化方法從蛋白質水平檢測宮頸癌組織中DEK、MMP-7 和N-cadherin 的表達水平，進一步分析其與宮頸癌臨床病理特征的關系，探討其與子宮頸癌的發生發展及浸潤轉移的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016 年1 月-2021 年12 月在濰坊市中醫院行子宮廣泛切除加盆腔淋巴結清掃術的宮頸癌患者80 例，并選取癌旁正常宮頸組織標本80 例作為對照，所有患者均經組織病理學檢查確診為鱗狀細胞癌，術前未經放化療及免疫治療。患者年齡26～73 歲，中位年齡49 歲。年齡≥50 歲者39例，＜50 歲者41 例。根據WHO 分類，高分化者24 例，中、低分化者56 例。根據國際抗癌聯盟第八版TNM 分期，Ⅰ期48 例，Ⅱ～Ⅲ期32 例。伴有淋巴結轉移28 例，無淋巴結轉移52 例。按腫瘤大小分組，＞4 cm 19 例，≤4 cm 61 例。本研究經過濰坊市中醫院醫學倫理委員會審查通過，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 主要試劑 DEK、MMP-7、N-cadherin 兔抗人單克隆抗體，購買自武漢三鷹生物科技有限公司。EnVision 免疫組化染色試劑盒、DAB 顯色試劑盒購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3 免疫組化染色及判讀 分別取無壞死癌灶及遠端（距癌灶2 cm 以上）正常宮頸組織，經4%中性甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋，連續切片，切片厚度3～4 μm。一抗工作濃度1∶100。染色方法嚴格參照EnVision 免疫組化試劑盒說明書進行操作，DAB 顯色增強劑顯色，顯微鏡下觀察。以磷酸鹽緩沖液（PBS）液代替一抗作為陰性對照。根據美國臨床腫瘤學會ASCO 分級觀察分析癌組織及正常宮頸鱗狀上皮DEK、MMP-7、N-cadherin 的染色。染色陽性的細胞數占百分比＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%，依次計分0、1、2、3、4 分。-、+、++、+++標記著色強度，依次計分0、1、2、3 分。染色陽性的細胞百分比計分和著色強度計分相乘，＜6 分劃入低表達組，≥6 分劃入高表達組。觀察宮頸鱗狀細胞癌組織中DEK、MMP-7、N-cadherin 表達與宮頸癌臨床病理參數的關系，并進一步分析在宮頸鱗狀細胞癌中DEK 與MMP-7、N-cadherin 的關系。

1.4 統計學方法 所有數據采用SPSS 19.0 軟件進行統計學分析。以（）表示計量資料，不同組間的差異采用χ2檢驗，采用Pearson 相關性分析，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 DEK、MMP-7、N-caherin 的表達水平及與臨床病理參數的關系 DEK（45.00%）、MMP-7（45.00%）、N-caherin（47.50%）在宮頸鱗狀細胞癌組織中表達高于正常宮頸鱗狀上皮組織（12.00%、14.00%、16.00%）（P＜0.05）；DEK、MMP-7、N-cadherin 的高表達與腫瘤的低分化、淋巴結轉移、高TNM 分期有關（P＜0.05），而與患者年齡、腫瘤的大小無關（P＞0.05），見表1。

表1 宮頸鱗狀細胞癌組織中DEK、MMP-7、N-cadherin 表達比較（n）

2.2 DEK 與MMP-7 及N-cadherin 的相關性分析DEK 的表達與MMP-7 的表達呈正相關（r=0.269，P=0.008），DEK 的表達與N-cadhrein 的表達呈正相關（r=0.295，P=0.004），見圖1。

圖1 DEK 與MMP-7、N-cadhrein 的相關性

3 討論

宮頸癌是女性第4 常見癌癥，占每年女性癌癥死亡人數的近8%。宮頸癌最重要的危險因素是感染人乳頭瘤病毒（HPV），尤其是HPV16 和HPV18。這兩種HPV 亞型導致所有宮頸癌的70%～75%[1-3]。盡管HPV 疫苗的應用及宮頸癌早期篩查的普及大大提高了宮頸癌的早期診斷率和治療，改善了許多患者的預后，但晚期宮頸癌的復發和轉移仍然是治療的難點。因此，對于宮頸癌的早期診斷、評估及發病機制的探討仍需繼續研究。

DEK 是一個原癌基因，是一個高度保守的轉錄調控因子，DEK 基因位于染色體6p22，編碼375 個氨基酸（43 kDa）蛋白。該蛋白在細胞核中豐富，在染色質組裝的結構控制中起關鍵作用，在急性髓系白血病患者亞群中，DEK 蛋白被鑒定為與核孔蛋白214 的融合基因[15，16]；在多種細胞活動和各種細胞代謝過程中也起著關鍵作用。既往研究顯示，DEK 參與多種疾病的發生發展，譬如乳腺癌、卵巢癌、阿爾茨海默病等[16-18]，在非小細胞肺癌、乳腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌等中出現高表達[19-21]。DEK 過表達抑制宮頸癌HeLa 細胞的凋亡，也可以抑制p53 轉錄活性。表明DEK 在宮頸癌的進展中起著非常重要的作用。選擇性剪接是導致人類基因組生物學功能復雜性的關鍵分子機制之一。據報道[17，18]，約95%的多外顯子基因轉錄物具有選擇性剪接變體，異常剪接產生的非規范和癌癥特異性mRNA 轉錄物，可導致腫瘤抑制因子功能喪失或癌基因功能增強，而DEK 參與基因表達中的剪接后步驟。DEK 可抑制細胞衰老、凋亡和分化，從而促進細胞生長和存活。鈣黏附蛋白是一類結構與功能相似的鈣依賴性單鏈跨膜糖蛋白，根據其結構分為E-cadherin、P-cadherin、N-cadherin 3 種。其中EMT 的重要特征之一是作為上皮細胞標志的E-cadherin 表達缺失和間質標志的N-cadherin 表達上調。N-cadherin 的上調表達與多種人類惡性腫瘤侵襲轉移及預后密切相關[11]。MMP 是一族Zn2+依賴性的蛋白水解酶，能夠講解多種基底膜和細胞外基質成分，在腫瘤的浸潤和轉移中起重要作用。MMP-7是MMP 中唯一的由上皮性腫瘤細胞特異性表達的酶。由于其降解細胞外基質的能力，因此MMP-7 在腫瘤的浸潤和轉移中起著重要作用[14]。

本研究通過免疫組化方法檢測DEK 在宮頸鱗狀細胞癌組織中顯著高表達，MMP-7 和N-cadherin在宮頸癌表達也顯著高于癌旁正常宮頸組織。DEK、MMP-7 和N-cadherin 在不同臨床分期和不同組織學分級的宮頸癌中表達存在顯著差異，提示它們的高表達在子宮頸癌向周圍組織的浸潤轉移過程中具有重要作用，可以作為反映宮頸癌侵襲轉移能力的生物學標志物。早期阻斷它們的表達可能會抑制腫瘤的浸潤和轉移，從而成為宮頸癌治療的一個新途徑。且在有淋巴結轉移的宮頸癌中DEK、MMP-7 和N-cadherin 表達水平顯著高于無淋巴結轉移者，說明其與淋巴結轉移密切相關，可成為監測宮頸癌浸潤和轉移的重要指標。

通過進一步分析DEK 與MMP-7 和N-cadherin的關系，結果提示DEK 的表達與MMP-7 和N-cadherin 的表達分別呈正相關，說明DEK 對宮頸鱗狀細胞癌的影響與MMP-7 和N-cadherin 有關。DEK與MMP-7 和N-cadherin 的作用是協同的，這提示DEK 在宮頸癌中的發生發展及高侵襲行為與細胞外基質的降解和EMT 過程有關。但是它們三者的具體關系及作用機制還需進一步去探討。

綜上所述，DEK 與MMP-7 和N-cadherin 在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達顯著增多，并且DEK 的表達與DEK 與MMP-7 和N-cadherin 的表達呈正相關。DEK 對宮頸鱗狀細胞癌的影響與細胞外基質的降解和EMT 過程有一定的關聯。這為以后研究宮頸鱗狀細胞癌的研究提供新的方向。