肺癌惡性胸腔積液患者外周血中腫瘤標志物Hsp90α 的表達水平及其預后評估

高瑩瑩 李 鋒 孫翠玲

安徽省阜陽市人民醫(yī)院腫瘤科，安徽阜陽 236012

肺癌屬于我國較為常見的一種惡性腫瘤，發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上漲的趨勢，且該病轉(zhuǎn)移快、易復發(fā)[1-2]。中晚期肺癌患者多伴隨惡性胸腔積液，加之常見的肺癌診斷方法CT 掃描、支氣管鏡檢查均具有檢查步驟繁瑣、耗費時間較長等缺點，且臨床現(xiàn)有的肺癌腫瘤標志物針對性欠佳[3-4]。腫瘤標志物主要指存在于腫瘤組織中含量明顯高于正常組織的生化物質(zhì)，對于腫瘤分類、診斷、預后具有重要參考意義[5-6]。因此，臨床亟需發(fā)現(xiàn)一種新型有效的腫瘤標志物以提高檢測針對性，提高確診率。熱休克蛋白90α（heat shock protein 90α，Hsp 90α）是構(gòu)成人體細胞的一種關鍵性伴侶蛋白，主要由732 個氨基酸所構(gòu)成，能有效地將細胞多種信號傳導蛋白維持在一個較為穩(wěn)定狀態(tài)，同時輔助蛋白進行折疊，最終促進細胞生長和存活[7-8]。相關研究結(jié)果顯示，Hsp90α 參與多種惡性腫瘤的發(fā)生、進展、轉(zhuǎn)移，其表達水平與腫瘤惡性程度呈正相關，可將其作為新型腫瘤標志物[9-10]。為進一步研究其作為腫瘤標志物與預后生存狀況的相關性，本研究選取肺癌合并惡性胸腔積液患者納入研究，對其外周血中腫瘤標志物Hsp90 α 水平進行檢測并隨訪2 年。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取安徽省阜陽市人民醫(yī)院2018 年1 月至2021 年1 月收治的80 例肺癌合并惡性胸腔積液患者作為A組，另選取同期安徽省阜陽市人民醫(yī)院收治的80例良性胸腔積液患者作為B 組及于安徽省阜陽市人民醫(yī)院體檢的80 名健康者作為C 組納入研究。A 組納入標準：①經(jīng)超聲支氣管鏡下淋巴結(jié)穿刺活檢、肺穿刺活檢、支氣管鏡活檢及胸腔積液細胞學檢查等確診；②病歷資料完整，且能隨訪調(diào)查。排除標準：①合并腎、肝、心等臟器嚴重病變；②合并代謝、內(nèi)分泌紊亂史；③未行腫瘤標志物檢測；④接受過靶向、手術等治療；⑤合并腫瘤病史；⑥病歷資料不完整，或中途退出研究。其中男45 例，女35 例；年齡48～78 歲，平均（56.28±2.19）歲；小細胞肺癌45 例，腺癌23 例，鱗癌12 例。B 組納入標準：①伴隨胸痛、咯痰、咳嗽等癥狀，并急性發(fā)熱（體溫＞39 ℃）；②胸腔超聲提示雙側(cè)、單側(cè)胸腔積液，肺CT 或胸X 線片提示雙側(cè)、單側(cè)肺部發(fā)生滲出性病變；③病歷資料完整，且能隨訪調(diào)查。排除標準：①因手術、腫瘤、心力衰竭等原因引發(fā)的胸腔積液；②合并腎、肝、心等臟器嚴重病變；③病歷資料不完整，或中途退出研究。其中男43 例，女37 例；年齡46～75 歲，平均（55.72±2.16）歲；慢性阻塞性肺疾病21 例，肺炎25 例，支氣管炎34 例。C 組男45 名，女35 名；年齡45～76 歲，平均（56.09±2.17）歲。二組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。經(jīng)患者及其家屬知情同意并簽署同意書，本研究經(jīng)過安徽省阜陽市人民醫(yī)院倫理委員會批準（FYAH-XXYK-38）。

1.2 研究方法

所有納入研究者于清晨空腹采集外周靜脈血3 ml，加入乙二胺四乙酸二鉀2 ml 抗凝血對血漿進行分離，之后進行20 倍稀釋；取樣本、標準品50 μl 加入Hsp90α固相板，同時加入Hsp90α標志物液50 μl 進行振蕩混合均勻，常溫培育1 h；固相板每孔加入洗液300 μl，共洗板6 次，然后加入50 μl 顯色劑振蕩混合均勻，常溫培育20 min；完成后加入終止液50 μl后測量；10 min 內(nèi)于450 nm/620 nm 波長段下對數(shù)據(jù)進行讀取，采用標準曲線計算血漿內(nèi)Hsp90α含量。

1.3 觀察指標

患者檢測后，將Hsp90α 表達的中位數(shù)作為臨界點，分為Hsp90α 高表組和Hsp90α 低表達組。通過QQ、微信、電子郵件、電話等方式隨訪2 年，了解患者病情以及預后生存情形。總生存期（overall survival，OS）：無腫瘤相關死亡期間；無復發(fā)生存期（recurrence free survival，RFS）：腫瘤無轉(zhuǎn)移、復發(fā)期間。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（）表示，比較采用t 檢驗。計數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，比較采用χ2檢驗。RFS、OS 生存曲線采用Kaplan-Meier 法分析，組間比較用log-rank 檢驗法。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組外周血中腫瘤標志物Hsp90α 表達比較

三組外周血中腫瘤標志物Hsp90α 表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其中A 組、B 組外周血中腫瘤標志物Hsp90α 表達高于C 組，A 組高于B 組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 三組外周血中腫瘤標志物Hsp90α 表達比較（ng/ml）

表1 三組外周血中腫瘤標志物Hsp90α 表達比較（ng/ml）

注 與C 組比較，aP＜0.05；與B 組比較，bP＜0.05。

2.2 肺癌惡性胸腔積液患者外周血中腫瘤標志物Hsp90α表達與病理特征的關系

不同年齡、性別、腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級及吸煙的肺癌惡性胸腔積液患者外周血中Hsp90α 表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 肺癌惡性胸腔積液患者外周血中腫瘤標志物Hsp90α 表達與病理特征的關系（ng/ml，）

表2 肺癌惡性胸腔積液患者外周血中腫瘤標志物Hsp90α 表達與病理特征的關系（ng/ml，）

2.3 Hsp90α表達水平與肺癌合并惡性胸腔積液患者預后的關系

以Hsp90α 表達水平中位數(shù)為臨界點將患者分為高表達組和低表達組，各40 例。Hsp90α 低表達組的中位RFS 為6.6 個月（95%CI：6.2～7.0），Hsp90α高表達組的中位RFS 為4.7 個月（95%CI：4.4～5.0），兩組RFS 曲線比較，差異有統(tǒng)計學意義（log-rank χ2=8.963，P=0.003）。見圖1A。Hsp90α低表達組的中位OS為15.5 個月（95%CI：13.0～18.0），Hsp90α高表達組的中位OS 為10.4 個月（95%CI：6.6～12.2），兩組OS 曲線比較，差異有統(tǒng)計學意義（log-rank χ2=10.300，P=0.001）。見圖1B。

圖1 Hsp90α 表達水平與肺癌合并惡性胸腔積液患者預后的關系

3 討論

近年來，我國肺癌的發(fā)生率和死亡率已經(jīng)穩(wěn)居惡性腫瘤榜首，有統(tǒng)計學研究顯示，中國肺癌人數(shù)預計至2025 年將破百萬[12-13]。由于肺癌早期臨床癥狀不具有特異性而易與肺良性疾病相混淆出現(xiàn)誤診、漏診，晚期肺癌患者5 年生存率一直在20%左右，嚴重影響患者生活質(zhì)量，威脅患者生命安全[14]。然而，對于早期確診并進行有效治療的患者，其5 年生存率可達80%。因此，臨床發(fā)現(xiàn)一種具有特異性且有效的診斷肺癌的方式對于改善預后、延長生存期具有重要意義。

血清癌胚抗原、糖類抗原153、糖類抗原125 等作為常用于輔助診斷肺癌的腫瘤檢測標志物，其在早期檢測肺癌時特異度和靈敏度均不甚理想[15]。Hsp90α是一種可存在于多種生物細胞中的具有分子伴侶功能的蛋白質(zhì)，可參與相關蛋白的細胞內(nèi)運輸、裝配、蛋白質(zhì)降解、折疊等過程，其表達水平在機體受到缺氧、感染、分子損傷、輻射、癌變等應激時明顯升高[16]。有研究結(jié)果指出，Hsp90α在乳腺癌、肝癌、胃癌等惡性腫瘤中均存在高表達，并且與腫瘤分期、分級及預后具有一定相關性[17-19]。也有研究結(jié)果表明，Hsp90α表達水平明顯升高時提示患者腫瘤大小、病理分期、良惡性及是否發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移[20-21]。

本研究中，通過對肺癌惡性胸腔積液患者外周血中腫瘤標志物Hsp90α表達水平檢測發(fā)現(xiàn)，其水平與良性胸腔積液患者及健康體檢者水平相比明顯升高，提示其在肺癌惡性胸腔積液患者中表達水平顯著升高，這可能是因為Hsp90α參與腫瘤多種蛋白的合成，與各信號蛋白結(jié)合，對腫瘤細胞生長進行保護和調(diào)控，最終促進腫瘤迅速發(fā)育、進展[22-23]。然而，本研究結(jié)果顯示，Hsp90α表達水平與年齡、性別、腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級均無相關性，與上述研究結(jié)果存在一定差異性，分析原因可能是因為本研究納入研究樣本量較小。

同時，本研究通過分析Hsp90α表達水平與預后之間關系發(fā)現(xiàn)，Hsp90α高表達組的OS 和RFS 低于低表達組，這與相關研究結(jié)果一致[24-25]。提示Hsp90α 表達水平可影響患者生存時間，當高表達時有縮短生存時間的風險，因此，對Hsp90α表達水平的檢測不僅可以作為診斷肺癌的有效腫瘤檢測標志物，還能作為后續(xù)預測預后生存情況的重要指標。

綜上所述，肺癌惡性胸腔積液患者外周血中腫瘤標志物Hsp90α 表達水平明顯升高，且其水平與預后生存狀況具有緊密相關性，可將其作為肺癌惡性胸腔積液患者診斷、預后的重要指標。

利益沖突聲明：本文所有作者均聲明不存在利益沖突。