先天性鎖肛豬類型及常規生理生化指標分析

蔣凱

1.井岡山大學生命科學學院，江西吉安 343009；

2.江西農業大學省部共建豬遺傳改良與養殖技術國家重點實驗室，南昌 330045

先天性鎖肛癥是一種復雜的直腸末端發育缺陷疾病，通常是后腸發育異常致使肛門口泄殖腔膜未能破裂引發的[1-2]。該病最明顯的表型是無肛門，肛門區為皮膚所覆蓋，無法排出胎糞，出現腹脹、嘔吐等胃腸阻?，F象。環境因素和遺傳因素均能導致肛門閉鎖癥的發生，但主要因素是遺傳[3]。肛門閉鎖癥在人、牛、豬、羊和狗等哺乳動物中均有發生。人先天性鎖肛癥的發病率約為0.03%～0.05%[1]，其病理組織學較為復雜，包括簡單的單一性肛門閉鎖和形成不同類型的瘺管（直腸陰道瘺，直腸膀胱瘺及直腸尿道瘺等）的復雜性肛門閉鎖，而且經常會伴有其他發育異常[4-6]。豬先天性鎖肛癥自然發生率遠高于人類，為0.1%～1.0%[7]，表現形式與人類非常相似，但很少會伴有其他異常綜合征表型，但鎖肛類型很少被詳細報道[6,8]。鎖肛癥發生在公豬上是致死的，一般在1周內死亡，嚴重影響經濟效益；新生鎖肛母豬中部分母豬因為會形成直腸陰道瘺，糞便能從陰道口排出，因此，鎖肛母豬有50%的存活率[9]。豬先天性鎖肛癥是豬先天性畸形中較為多見的一種消化道末端發育不良遺傳性疾病，其遺傳率為0.11～0.35[10-11]。但先天性鎖肛豬的血常規、血清生化以及內臟器官HE 切片等常規生理生化指標并未見相關報道。該病發病率高、手術治療效益差，給養豬業帶來較大的經濟損失。

本試驗對先天性鎖肛豬進行臨床診斷或解剖觀察來判定鎖肛類型，比較分析先天性鎖肛豬（直腸陰道瘺鎖肛豬）及其全同胞正常對照個體的生長曲線、血常規、血清生化、臟器組織切片觀察等指標，旨在加強對先天性鎖肛豬的類型及常規生理生化指標的認識，為后續研究提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

實驗用豬為筆者所在實驗室科研豬場構建的1個大白豬近交群體。該群體由1頭祖代大白公豬和3 頭大白母豬配種獲得F1代個體，1 頭F1代公豬與4頭F1代母豬、8 頭F2代正常母豬及1 頭F2代鎖肛母豬配種后共獲得了43 頭先天性鎖肛豬，其中5 頭鎖肛豬（直腸陰道瘺鎖肛豬）一直存活。鎖肛豬與對照豬在相同的條件下飼養管理，每日飼喂2次，自由飲水，飼養期間未發現其他疾患。

1.2 表型判定

首先通過肉眼觀察新生仔豬的肛門發育情況，為進一步確定鎖肛豬的類型，觀察存活鎖肛仔豬和正常仔豬的排便情況，如：正常仔豬是否能從肛門排出糞便（可能存在有正常肛門但直腸閉鎖的類型）；鎖肛母豬是否能從陰道口排出糞便（直腸陰道瘺）。針對死亡的鎖肛豬進行解剖學分析，觀察是否存在直腸閉鎖、是否形成直腸尿道瘺或者直腸膀胱瘺等。

1.3 體質量測定

分別稱量5 頭鎖肛豬（直腸陰道瘺鎖肛豬）和5頭對照豬（1 日齡、10 日齡、60 日齡、120 日齡和180日齡）的體質量，以日齡為橫坐標、體質量為縱坐標繪制生長曲線。

1.4 血液生理生化指標的檢測

通過耳緣靜脈采集90 日齡和180 日齡直腸陰道瘺鎖肛豬和對照豬的血液，1 份保存于EDTA-Na2抗凝管中，送往江西中醫藥大學附屬醫院，利用BC-6800（邁瑞）血液自動分析儀檢測血常規指標。另取1 份樣本經離心分離血清，送往南昌大學第一附屬醫院，使用7600（日立）全自動生化分析儀檢測血清生化指標。

1.5 組織切片

屠宰2 歲直腸陰道瘺鎖肛豬和同胞對照豬各2頭，采集肝、脾、肺、腎、大腦和小腦等6種組織標本，在4%多聚甲醛溶液中保存并帶回實驗室，采用HE染色法（蘇木精-伊紅染色法）制作石蠟切片，切片于BA410顯微鏡（Motic，中國）下觀察。

1.6 數據統計分析

試驗數據以“平均值±標準差”表示，通過Stu‐dentt-test 進行統計分析,在α=0.05 水平進行顯著性分析。P<0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 先天性鎖肛豬表型特征及類型

與正常個體相比，鎖肛豬個體無肛門存在，肛門區被皮膚所覆蓋，不能正常排便、排氣。鎖肛豬剛出生時大多能正常吃奶；半天后變得煩躁不安，不時有排便動作；2～3 d 后，腹腔壓力增大，出現腹脹、嘔吐，吸乳少或不吸乳，常有排便努責姿勢，四處游走，不安。鎖肛公豬主要表現出嚴重腹部膨脹，一般在1周內死亡；部分鎖肛母豬因形成直腸陰道瘺，能從陰道口排出糞便，多數能正常存活。

對所有死亡的鎖肛豬進行解剖學觀察，結果顯示鎖肛個體除肛門直腸外，其余各個組織和器官并無明顯發育異常，為此重點分析了患病個體的肛門直腸的異常情況。43 頭鎖肛豬存在4 種鎖肛類型：肛門直腸均閉鎖（n=18）、直腸陰道瘺（n=15）、直腸尿道瘺（n=7）和肛門閉鎖直腸未閉鎖（n=3）。鎖肛公豬和鎖肛母豬的鎖肛類型略有差別（圖1、2）。肛門直腸均閉鎖的個體中包括10 頭公豬和8 頭母豬（公母比約為1∶1），而發生直腸尿道瘺和肛門閉鎖直腸未閉鎖的均為公豬，發生直腸陰道瘺的均為母豬。

4 種類型的表型癥狀分別是:①肛門閉鎖直腸未閉鎖（圖1A）：表現為無肛門存在，但直腸末端有開口，開口于腹腔內，且開口前端與腹壁黏連，并發生組織增生，造成僅能排出少部分稀糞于腹腔內，不能存活。②直腸尿道瘺（圖1B）：表現為無肛門存在，但直腸末端開一極小的口與尿道連接，不能正常排糞，排尿處皮毛偶見稀糞污染。③肛門直腸均閉鎖（圖1C和圖2A）：表現為肛門和直腸均閉鎖，無法排出糞便，不能存活。④直腸陰道瘺（圖2B）：表現為無肛門存在，但直腸末端開口于陰道，糞便能夠從陰戶排出，大多數能正常存活。

圖2 鎖肛母豬的肛門直腸解剖學觀察

2.2 生長曲線分析

分別在第1 天、第10 天、第60 天、第120 天和第180 天稱量體質量。由圖3 可見，直腸陰道瘺鎖肛豬的體質量均與對照個體無顯著差異（P>0.05）。

圖3 直腸陰道瘺鎖肛豬與對照豬生長速度比較

2.3 血常規與血生化指標檢測分析

血常規和血生化指標的檢測結果(表1、2)均表明，直腸陰道瘺鎖肛豬和對照個體在2 個時間點所有參數之間均無顯著差異（P>0.05）。

表1 直腸陰道瘺鎖肛豬和對照豬血常規結果（n=5）

表2 直腸陰道瘺鎖肛豬和對照豬血生化指標結果（n=5）

2.4 主要組織切片結果

直腸陰道瘺鎖肛豬和對照豬的肝、脾、肺、腎、大腦和小腦這6個主要器官組織HE切片結果顯示，直腸陰道瘺鎖肛豬與對照個體相比，未發生明顯的病理性變化，并沒有出現顯著的病理性特征（圖4）。

圖4 直腸陰道瘺鎖肛豬與對照豬組織切片對照圖（×200)

3 討論

本試驗對鎖肛豬進行臨床診斷或解剖觀察來判定鎖肛類型，發現存在肛門直腸閉鎖、直腸陰道瘺、直腸尿道瘺和肛門閉鎖直腸未閉鎖4 種鎖肛類型，與前期研究發現一致[6]，這4 種鎖肛類型在人類鎖肛癥中也有類似報道[1,12-14]。其中，肛門直腸均閉鎖和直腸陰道瘺2種鎖肛類型在豬中報道較多[8-9,2]，而直腸尿道瘺和肛門閉鎖直腸未閉鎖2種類型未見相關報道。不同類型的鎖肛形成有不同的類型，因此，豬先天性鎖肛癥類型的判定可為該病發病機制的遺傳解析提供一定的基礎資料。

此外，本試驗分析了存活的鎖肛豬（直腸陰道瘺）的生長速度、血液生理生化指標和組織切片。結果顯示，生長速度、血液生理生化指標和組織切片與正常對照個體相比均不存在顯著差異（P>0.05）（表1～3，圖3～4），表明直腸陰道瘺鎖肛豬常規生理生化指標正常。而且5頭直腸陰道瘺鎖肛豬均能與正常個體配種繁育后代。因此，本研究試驗結果提示直腸陰道瘺鎖肛豬除無正常肛門外，并不存在其他健康不良情況。本研究豐富了先天性鎖肛豬類型及常規生理生化指標方面的研究，可為先天性鎖肛豬后續研究提供重要借鑒。