肝纖四項聯合血小板檢測在肝纖維化診斷中的應用價值

李彩彩

（汝陽縣人民醫院輸血科，河南 汝陽 471200）

肝纖維化通常是慢性肝病進展至肝硬化的關鍵階段，是肝內結締組織因肝臟損傷而修復愈合這一過程中出現病理性異常增生的過程，早期并無明顯異常表現，但伴隨病情加重，肝臟負擔增加，會逐漸間歇性出現癥狀，甚至發展成為肝硬化，嚴重危及患者健康與安全。肝纖維化在未進一步發展前予以積極治療，在組織學上其病變大多可逆，而進一步發展后不僅逆轉非常困難，患者即便接受治療其預后也相對較差[1]。因此，及時有效診斷肝纖維化并在進一步發展至肝硬化前積極逆轉患者病情，是改善慢性肝病患者預后的重要前提條件。肝穿刺活檢是目前臨床明確診斷肝纖維化的金標準，但這一檢查操作不僅有創，患者所需承擔的經濟壓力也相對較大，并不受多數患者所青睞，這也造成這一檢查方法在臨床實踐中并未普及應用[2]。近年來，隨肝纖維化血清標志物的檢測技術及儀器的不斷革新，肝纖四項檢查在肝病診斷及病情評估中得到了廣泛應用[3]。不過肝纖四項檢查在肝纖維化的診斷靈敏度及特異度方面尚有欠缺，為提高其診斷效果，臨床提出聯合與這一檢查方法存在一定相關性的血小板計數（Platelet count，PLT）對肝纖維化患者病情進行診斷。由于肝臟病變后機體造血系統也會受到負性影響，因此肝纖維化時患者血小板往往會出現明顯異常表達。有研究更是明確提出，血小板計數在預測肝纖維化程度方面具有較高應用價值。

基于此，本研究分析了肝纖維化診斷中肝纖四項聯合血小板檢測的應用價值，從而為提高臨床肝纖維化的診斷效率提高參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2021 年11 月至2023 年6 月期間收治的疑似肝纖維化患者80 例作為研究對象，納入研究組，研究組男57 例，女23 例，平均年齡48.43±9.26歲，平均體質量指數22.71±1.21 kg·m-2，受教育程度：初中及以下52 例，高中及以上28 例；另選取80 例同期體檢健康人員，并納入對照組，對照組男56 例，女24 例，年齡27-71 歲，平均49.03±9.19 歲，體質量指數22-24 kg·m-2，平均22.69±1.18kg·m-2，受教育程度：初中及以下50 例，高中及以上30 例；兩組一般資料比較，P＞0.05，組間具備可比性。

納入標準：研究組肝纖維化符合2000 年修訂版病毒性肝炎防治方案[4]中相關診斷標準；臨床資料完整；均接受肝穿刺病理性檢查且對該項檢查操作耐受；具備基本理解溝通能力；知情且自愿參與研究；對照組肝功能正常；肝活組織檢查無肝纖維化病變；語言交流能力良好；知情且自愿參與研究，簽訂醫患同意書；排除標準：研究組合并嚴重血液系統疾病或長期酗酒史；有肝臟損害藥物應用史；膽汁淤積性肝炎；精神狀態極差；治療依從性差。對照組排除標準：長期酗酒史或有肝臟損害副作用的藥物應用史；有肝活組織檢查禁忌癥；拒絕參與研究或無法正常與他人進行溝通交流；肝功能異常疾病史。本研究經醫院倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集

兩組均取5 mL 患者空腹外周肘靜脈血，采用離心機以轉速3000 r·min-1，半徑20 cm，離心10 min后，靜置，待血樣分層基本穩定后，采用抗凝管取上層清液，放置在低溫（-20℃）環境下保存待檢。

1.2.2 血小板檢測

采用SYSTEM XN 20 全自動模塊式血液體液分析儀及配套試劑盒（SYSMEX EUROPE GMBH，國械注進20162220778）對血樣進行檢測，以PLT 為主要觀察指標，其參考范圍為100-300×109·L-1。

1.2.3 肝組織學檢查

采用邁瑞DC-35Pro 型彩色多普勒超聲診斷儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司，粵械注準20212060374）引導美國巴德MG15-22 型全自動活檢穿刺槍（巴德外周血管股份有限公司，國械注進20172140925）Magnum 活檢針取肝活組織，并將1.5-2.5cm 肝活組織固定置于10%中性福爾馬林液中，并依次完成脫水、石蠟包埋、切片（大小約4μm）及染色（染色依次選擇蘇木素-伊紅、Masson、嗜銀網狀纖維）處理，其后采用泰立瑞數字病理圖像管理系統（洛陽和華科技有限公司，豫械注準20172700905）進行讀片。

1.3 觀察指標

（1）比較研究組與對照組的檢測結果，采用廠家安圖全自動化學發光測定儀AutoLumo A2000 Plus及配套試劑盒（鄭州安圖生物工程股份有限公司，豫械注準20192220577）對血樣進行檢測，以Ⅳ型膠原（collage typeⅣ,col Ⅳ）、Ⅲ型前膠原N 端肽N 端肽（Ⅲ procollagen amino-terminal peptide，PⅢNP）、層粘連蛋白（Laminin，LN）、透明質酸酶（Hyaluronidase，HA）為主要觀察指標。col Ⅳ參考范圍＜95 ng·mL-1，PⅢNP 參考范圍＜15 ng·mL-1，LN 參考范圍為＜130 ng·mL-1，HA 參考范圍＜120 ng·mL-1。。（2）對比不同肝纖維化程度患者的檢測結果，肝纖維化程度評估采用Ishak 法。（3）以肝穿刺活檢結果作為金標準，分析肝纖四項及血小板檢測對肝纖維化診斷的效能，其中準確性為真陽性與真陰性例數之和與總例數的百分比值，敏感性為真陽性例數和真陽性與假陰性例數之和的百分比值，特異性為真陰性例數和真陰性與假陽性例數之和的百分比值。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 比較兩組檢測結果

研究組血清col Ⅳ、PⅢNP、LN、HA 水平均明顯高于對照組，PLT 水平則明顯低于對照組，P＜0.05。見表1。

表1 兩組檢測結果對比(±SD)

表1 兩組檢測結果對比(±SD)

注：與對照組相比，*P＜0.05。

2.2 比較不同肝纖維化程度患者的檢測結果

本研究80 例疑似肝纖維化患者中，肝穿刺活檢確診為肝纖維化患者61 例，其中輕度35 例，中度26例。中度肝纖維化患者血清col Ⅳ、PⅢNP、LN、HA水平均明顯高于輕度肝纖維化患者，PLT 水平低于輕度肝纖維化患者，P＜0.05。見表2。

表2 不同肝纖維化程度患者的檢測結果對比(±SD)

表2 不同肝纖維化程度患者的檢測結果對比(±SD)

注：與輕度肝纖維化相比，*P＜0.05。

2.3 不同診斷方式與肝穿刺活檢結果的一致性分析

肝纖四項檢查診斷肝纖維化陽性53 例，陰性27例，與肝穿刺活檢診斷相符的陽性50 例，陰性16 例，分析這一診斷結果與肝穿刺活檢結果的一致性，Kappa=0.578，提示肝纖四項檢查與肝穿刺活檢之間僅有中等強度的一致性。

PLT 檢測診斷肝纖維化陽性42 例，陰性38 例，其中真陽性33 例，真陰性10 例，診斷準確性為52.50%，一致性分析Kappa=0.050，提示PLT 檢測與肝穿刺活檢之間僅有極低強度一致性；肝纖四項聯合PLT 檢測診斷為真陽性58 例，真陰性19 例，肝纖四項聯合PLT 檢測與肝穿刺活檢之間具有高度一致性（Kappa=0.902）。具體見表3。

表3 不同診斷方式的效能對比(±SD)

表3 不同診斷方式的效能對比(±SD)

表4 不同診斷方式對肝纖維化的診斷效能

2.4 不同診斷方式對肝纖維化的診斷效能比較

肝纖四項聯合PLT 檢測診斷肝纖維化的準確性、敏感性、特異性及與肝穿刺活檢結果的一致性強度均明顯高于肝纖四項檢查及PLT 檢測，且肝纖四項檢查診斷肝纖維化的準確性、敏感性、特異性及與肝穿刺活檢結果的一致性強度均明顯高于PLT 檢測，P＜0.05。

圖1 不同方式診斷肝纖維化的ROC 曲線

3 討論

肝纖維化是一種與慢性肝臟疾病有密切關系的病理現象，其預后取決于是否能逆轉或阻滯患者病情進展至肝硬化階段。肝纖維化作為肝硬化的前期病理過程，是可逆的[5]。患者應及時就診并定期復查，以助早期及時發現肝纖維化，并采取對應措施逆轉病情，改善患者預后。

臨床診斷肝纖維化的手段較多，肝穿刺活檢是肝病明確診斷的金標準，但由于有創，多數患者在有選擇的情況下并不青睞這一檢查方式。且由于取樣存在誤差風險，也可能存在誤診或漏診[6]。

肝纖四項是臨床醫師了解肝纖維化進程的重要血清學指標[7]。在病情發展過程中，膠原、糖蛋白、蛋白多糖等細胞外基質大量合成并沉積于肝臟是肝纖維化形成的關鍵，而細胞外基質的合成與肝星狀細胞激活后大量增生、轉化、分解密切相關[8]。有研究報道，肝纖四項（col Ⅳ、PⅢNP、LN、HA）檢查在肝纖維化早期診斷中具有較高應用價值，但這一檢查方式的診斷效果仍有較大提升空間[9]。

本研究分析疑似肝纖維化患者接受肝纖四項聯合血小板檢測的診斷結果，可知肝纖維化患者的血清col Ⅳ、PⅢNP、LN、HA 水平均顯著高于非肝纖維化患者，PLT 水平則顯著低于非肝纖維化患者。這主要在于肝纖維化形成過程中肝星狀細胞會被激活，并被誘導為肌纖維母細胞樣表型參與肝纖維形成，而肝星狀細胞增生、轉化及分解會合成大量以HA 等物質為主要成分的細胞外基質，因此伴隨肝纖維化出現，HA等物質在血清中的含量會出現相應變化；再有，肝纖維化會影響肝臟正常分泌血小板生成因子，纖維化越嚴重，血小板生成因子分泌量越少，血小板降低程度也會越明顯；這提示檢測肝纖四項及合血小板血清含量均可為臨床判斷肝纖維化程度提供參考依據。

進一步分析不同肝纖維化程度患者的檢測結果也發現，中度肝纖維化患者血清col Ⅳ、PⅢNP、LN、HA 水平均顯著高于輕度肝纖維化患者，PLT 水平則顯著低于輕度肝纖維化，證實肝纖四項聯合血小板檢測可有效預測肝纖維化嚴重程度。張楊武等[10]在類似研究中也表示，肝纖四項聯合血小板檢測可準確診斷早期肝纖維化，并有效預測患者病情嚴重程度。

另外，本研究發現，肝纖四項聯合PLT 檢測診斷肝纖維化的準確性、敏感性、特異性及與肝穿刺活檢結果的一致性強度均顯著高于肝纖四項或血小板檢測單獨診斷，也表明本研究診斷方案在肝纖維化診斷中具有較高應用價值。

綜上所述，在肝纖維化診斷中采用肝纖四項聯合血小板檢測這一診斷方案其臨床應用價值較高，尤其在提高該疾病早期檢出率及病情嚴重程度預測方面效果突出。