基于“性-效-物”的小兒消積止咳口服液質量標志物研究△

宋紫騰，吳美琪，韓彥琪，許浚*，張鐵軍*

1.天津藥物研究院 天津市中藥質量標志物重點實驗室/中藥現代制劑與質量控制技術國家地方聯合工程實驗室/藥物成藥性評價與系統轉化全國重點實驗室，天津 300462；2.和光中藥科技（天津）有限公司，天津 300462；3.沈陽藥科大學 中藥資源教研室，遼寧 沈陽 110016

小兒消積止咳口服液（以下簡稱XEXJ）收載于《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020 年版（一部），由炒山楂、檳榔、枳實、蜜枇杷葉等10 味中藥組成，具有清熱肅肺、消積止咳的功效，臨床用于小兒飲食積滯、痰熱蘊肺所致的咳嗽、喉間痰鳴、腹脹、口臭等癥狀[1]。XEXJ 是依據“食積咳嗽”論治理論研制的兒科用中藥制劑[2]，臨床研究證實其療效確切[3]。由于XEXJ 藥效成分復雜，物質基礎研究相對較少，限制了其有效性和安全性評價。

劉昌孝等[4]在2016 年提出了中藥質量標志物（Q-marker）這一概念，其核心內容基于特有性、可測性、有效性、傳遞性和中醫藥理論關聯性的五要素，其中有效性是Q-marker 的核心內容，包括藥性與藥效兩方面，可反映中藥有效性的本質特征。將藥性和藥效均納入中藥質量評價，能夠反映中藥質量的完整性。以“性-效-物”的思路發現Q-marker，為建立更科學的質量控制方法提供了新的思路[5]。本研究在本課題組前期對XEXJ化學物質組辨識與表征研究的基礎上，基于“性-效-物”三元論，利用計算機模擬、網絡藥理學、G蛋白偶聯受體和酶抑制活性檢測等方法，探究并確定其Q-marker，以期為其質量標準提升和藥效作用機制的系統闡釋提供參考。

1 材料

1.1 儀器

CKX41SF 型倒置顯微鏡（Olympus 公司）；Penta 型高通量實時熒光檢測分析系統（FLIPR）、SpectraMax M5 型多功能酶標儀均購于Molecular Devices 公司；ECHO550 型納升級聲波移液系統（Labcyte 公司）；ENVISION 型多功能酶標儀（Perkin Elmer 公司）；DK-600 型電熱恒溫水槽（上海精宏實驗設備有限公司）。

1.2 試藥

DMEM/F12 培養基（批號：10565-018）、DMEM 培養基（批號：11965-084）、Hank's 平衡鹽溶液（HBSS，批號：14025-092）、4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸溶液（HEPES，批號：15630-080）均購自Gibco 公司；胎牛血清（FBS，批號：FB-1058/500）、透析的胎牛血清（DFBS，批號：04-011-1A）均購自Biosera 公司；遺傳霉素（批號：ant-gn-5，InvivoGen公司）；二甲亞砜（DMSO，批號：34869-L）、卡巴膽堿（批號：1092009）、腎上腺素（批號：E4642）、WB4101（批號：B018）均購自Sigma公司；FLIPR?鈣4 實驗試劑盒（批號：R8141，Molecular Devices 公司）；異丙腎上腺素（批號：HY-B0468，MCE公司）；3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（IBMX，批號：410957，CabioChem公司）；環磷酸腺苷（cAMP）檢測試劑盒（批號：264，PerkinElmer 公司）；環氧合酶-2（COX-2）抑制劑篩選試劑盒（批號：S0168，上海碧云天生物技術有限公司）。

XEXJ（批號：304200133，山東魯南厚普制藥有限公司）；對照品蘆丁（批號：100080-200707）、連翹酯苷A（批號：111810-201707）、金絲桃苷（批號：111521-201205）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷（批號：111854-201905）、異槲皮苷（批號：111809-201403）、柚皮苷（批號：110722-201815）、枸櫞酸（批號：100396-201603）、綠原酸（批號：110753-200413）、氫溴酸檳榔堿（批號：111684-202003）、桔梗皂苷D（批號：111851-201708）、芥子堿硫氰酸鹽（批號：111702-202006）、3,29-二苯甲酰基栝樓仁三醇（批號：111931-201804）、松脂醇二葡萄糖苷（批號：111537-201706）均購自中國食品藥品檢定研究院；橙皮苷（批號：P06D9F77001）、槲皮苷（批號：P19D10F106420）、去甲基川陳皮素（批號：W15A10Z95342）、連翹脂素（批號：Z04J9X62808）均購自上海源葉生物科技有限公司；連翹酯苷B（批號：ps10061801，成都普思生物科技有限公司）；新橙皮苷（批號：MUST-17040707）、蕓香柚皮苷（批號：MUST-17030408）、辛弗林（批號：MUST-14082611）、松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷（批號：MUST-16011707）、山柰酚（批號：MUST-20082818）均購自成都曼斯特生物科技有限公司；連翹苷（批號：140118，成都普菲得生物技術有限公司）。

1.3 細胞

CHO-K1/M3 穩定細胞株、HEK293/β2 穩定細胞株、CHO-K1/α1A 穩定細胞株均購自ChemPartner公司。

2 方法

2.1 分子對接

2.1.1 配體小分子庫的建立 基于以下原則建立小分子庫，分別與酸、甘、苦、辛受體進行對接實驗：1）根據《中國藥典》2020 年版[1]的性味歸經將各單味藥按照性味分類，見表1。2）基于本課題組前期對XEXJ 化學物質組辨識結果[6]，選擇藥味中具有代表性的單體成分進行實驗，所有化合物具體信息見增強出版附加材料。從不同藥味的藥材中分別選取了42、33、74、61個小分子，建立酸、甘、苦、辛配體小分子庫，小分子庫具體信息見增強出版附加材料。

表1 基于藥味的XEXJ中單味藥歸類

2.1.2 化合物與味覺受體的分子對接驗證 從Protein Data Bank 數據庫（https://www.wwpdb.org/）中下載酸（6D1W）、甘（5X2M）受體的結晶復合物，同時利用同源模建的方法構建苦味受體（TAS2R10）和嗅覺受體（OR7D4）的三維結構。將受體依次導入Schr?dinger 2020 Maestro 12.4，通過Protein Preparation Wizard 進行受體預處理，在電場力OPLS3e 的條件下，對受體蛋白進行能量最小化處理，應用Binding Site Detection 計算可能的活性空腔，通過Receptor Grid Generation 生成受體格點文件。準備化合物的.sdf 格式文件，導入Schr?dinger 2020 Maestro 12.4 軟件中，通過Ligprep 進行配體預處理，在Ligand Docking 中選擇第一步生成的受體格點文件，與處理后的化合物進行分子對接。

2.2 網絡藥理學分析

2.2.1 目標化合物的選取及靶點篩選 根據化學物質組和分子對接結果選取了黃酮、三萜、生物堿、苯乙醇苷、木脂、有機酸等類的32 個化學成分為研究對象（表2）。應用Chem Office 2019 繪制化合物結構式并保存為.sdf格式，登錄SwissTargetPrediction（http://new.swisstargetprediction.ch/）和Pharm Mapper（http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/）服務器，導入化合物的.sdf 文件，采用反向藥效團匹配方法得到虛擬匹配篩選結果。在中藥系統藥理學數據庫與分析平臺（TCMSP，https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）檢索，獲取化合物相關靶點信息。整合3 個數據庫靶點結果，得到化合物潛在作用靶點庫。

2.2.2 疾病靶點的預測分析 登錄GeneCards 數據庫，依次檢索關鍵詞“dyspepsia”“cough”“respiratory tract inflammation”“fever”，下載對應文件并整理得到疾病靶點數據庫。再將2.2.1 項下化合物的作用靶點與疾病靶點取交集，得到藥物疾病共有靶點，通過Bioinformatics &Evolutionary Genomics 在線制圖軟件實現數據可視化。

2.2.3 構建蛋白質-蛋白質相互作用（PPI）網絡及篩選關鍵蛋白靶點 將交集靶點導入STRING 11 數據庫（http://string-db.org/）中，獲得PPI 網絡，結果導入Cytoscape 3.8.0 軟件中，以度（degree）值調整節點大小和顏色深淺，獲得化合物與疾病靶點的PPI網絡。

2.2.4 通路分析及生物信息學分析 運用OmicsBean數據庫（http://www.omicsbean.cn/login/）對交集靶點進行基因本體（GO）功能分析和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析，依據P值和度值進行排序。

2.2.5 化合物-靶點-藥理作用-藥味網絡構建 建立化合物-靶點、靶點-藥理作用、藥理作用-藥味的相互對應關系，導入Cytoscape 3.8.0 構建化合物-靶點-藥理作用-藥味網絡。

2.3 G蛋白偶聯受體和酶抑制活性檢測

2.3.1 待測化合物的選取 根據藥材功效及網絡藥理學分析結果選擇化合物分別進行膽堿能受體毒蕈堿3（CHRM3）、腎上腺素受體β2（ADRB2）、ADRA1A、COX-2 受體檢測（表3）。待測化合物檢測濃度均為100、10 μmol·L–1，XEXJ的檢測濃度為儲備液稀釋100、1000倍。

表3 受體實驗化合物或藥物信息

2.3.2 細胞培養 CHO-K1/M3 穩定細胞株用DMEM/F12 完全培養基（含G418 500 μg·mL–1、1%雙抗和10%FBS）、HEK293/β2 和CHO-K1/α1A穩定細胞株均用DMEM 完全培養基（含G418 500 μg·mL–1、1% 雙抗和10%FBS），于37 ℃、5%CO2培養箱中培養。

2.3.3 CHRM3 激動實驗 以卡巴膽堿（檢測濃度為2 μmol·L–1）作為陽性激動劑。取CHO-K1/M3穩轉細胞株種板，密度為10 000 個/孔，每孔50 μL，培養16～24 h。根據試劑盒說明書準備assay buffer，配制1×FLIPR?鈣4 試劑染料。取出細胞板，移除上清液，加1×FLIPR?鈣4 試劑染料，于37 °C 培養箱中孵育1 h。向細胞板中每孔加化合物15 μL，檢測熒光信號，計算樣品激動率。

2.3.4 ADRB2 激動實驗 以異丙腎上腺素（檢測濃度為1 μmol·L–1）為陽性激動劑。取HEK293/β2 穩轉細胞株，用stimulation Buffer（含5 mmol·L–1HEPES 70 μL、0.5 mmol·L–1IBMX 14 μL、0.1% BSA（來自試劑盒）186.67 μL、1×HBSS 13 729.3 μL）將細胞密度調整為20 000 個/mL。依次取化合物100 nL 及細胞懸液10 μL 至檢測板。600 r·min–1（離心半徑為42.5 mm）離心3 min，室溫孵育60 min。加入4×Eu-cAMP示蹤液5 μL 和4×ULight?-anti-cAMP 液5 μL。600 r·min–1（離心半徑為42.5 mm）離心3 min，室溫孵育60 min。在多功能酶標儀上讀取cAMP信號，計算樣品激動率。

2.3.5 ADRA1A 拮抗實驗 以腎上腺素（6.6 nmol·L–1）為陽性激動劑、WB4101（1 μmol·L–1）為陽性拮抗劑，取CHO-K1/α1A 穩轉細胞株種板，密度為15 000 個/孔，每孔50 μL 細胞，培養16～24 h。按照FLIPR?鈣4試劑盒說明書準備assay buffer，配制1×染料；取出細胞384 孔板，移除上清液，加入1×染料，于培養箱中孵育1 h 后每孔加化合物15 μL，15 min 后，每孔加激動劑Epinephrine 22.5 μL，檢測熒光信號，計算樣品抑制率。

2.3.6 COX-2活性抑制實驗 以塞來昔布為陽性對照（2.5 μmol·L–1）。按照試劑盒說明書進行具體實驗操作，計算樣品抑制率。

3 結果

3.1 化合物與味覺受體分子對接結果

分子與受體結合時的能量越低構象形狀匹配度越高，通常認為docking score 絕對值≥5 時，分子配體與受體結合作用較強。各化合物與4 個味覺受體的對接結果及示意圖如圖1、圖2所示，有機酸類和香豆素類與酸味受體的打分結果較好，可能是XEXJ的酸味物質基礎；糖類、簡單苯丙素類及其他類與甘味受體的對接打分較好，可能是其甘味物質基礎；生物堿、木脂素、苯乙醇苷和黃酮等類成分與苦味受體結合打分結果較好，可能是其苦味物質基礎；生物堿、黃酮、香豆素和三萜等類成分與辛味受體作用打分結果較好，可能是其辛味物質基礎。4 種藥味物質基礎的結構類型和代表性化合物見表4。

圖2 XEXJ中化合物與味覺受體分子對接

表4 XEXJ藥味對應結構類型及代表性化合物

3.2 網絡藥理學實驗結果

3.2.1 化合物和疾病共有靶點及PPI 網絡構建 整合化合物靶點庫和疾病靶點庫，得到化合物與消化不良相關靶點131個、與咳嗽相關靶點188個、與呼吸道炎癥相關靶點230 個、與發熱相關靶點241 個，去重后得到最終藥物疾病共有靶點261 個，通過Bioinformatics &Evolutionary Genomics 在線制圖軟件的Draw Venn Diagram 功能實現數據可視化，見圖3。

將261 個共有靶點導入STRING 11 并利用Cytoscape 3.8.0 軟件構建PPI 網絡圖（圖4），根據度值>二倍中位數篩選出前15 個作為核心靶點，分別為蛋白胰島素（INS，度值為140）、白蛋白（ALB，度值為136）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH，度值為120）、白細胞介素-6（IL-6，度值為114）、腫瘤壞死因子（TNF，度值為99）、表皮生長因子受體（EGFR，度值為95）、SRC 原癌基因（SRC，度值為93）、絲裂原活化蛋白激酶1（MAPK1，度值為89）、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3（CASP3，度值為87）、CXCL8（度值為83）、Jun 原癌基因（JUN，度值為81）、雌激素受體1（ESR1，度值為80）、MAPK8（度值為77）、熱休克蛋白90-αA1（HSP90AA1，度值為74）、淀粉樣β前體蛋白（APP，度值為73），這些靶點有較多相互作用關系，涉及血管及胃腸道平滑肌的收縮和舒張、加速糖酵解、磷酸戊糖循環和肝臟中糖原的合成、發熱、炎癥反應及免疫調節等方面。

3.2.2 生物信息學分析及通路分析 通過OmicsBean數據庫，將核心靶點進行GO 功能富集和KEGG 通路分析。GO 分析包含細胞組分（cellular component）、分子功能（molecular function）和生物過程（biological process）3 個方面，選取P值最小的前10個進行呈現（圖5）。結果發現，這些蛋白在細胞組分方面主要參與構成細胞器、細胞囊泡、細胞質基質等過程；在分子功能方面主要參與蛋白結合、酶結合、受體結合、分子轉導活性等過程；在生物過程方面主要涉及有機物或含氧化合物的應激反應、對內源性刺激的反應、生物過程和細胞過程的正調控等。KEGG 共富集篩選得到90 條相關信號通路，將P值最小的前20 條通路進行可視化處理（圖6）。

圖5 XEXJ相關蛋白靶點的GO富集分析

圖6 XEXJ相關蛋白靶點KEGG通路富集分析前20條通路

3.2.3 化合物-靶點-藥理過程-藥味網絡構建 根據對應關系在Cytoscape 3.7.0 軟件中構建化合物-靶點-藥理過程-藥味的網絡（圖7）。該網絡有301個節點、90 300條邊。

3.3 功能受體實驗結果

3.3.1 CHRM3 激動實驗結果 如表5 所示，與對照組比較，XEXJ 稀釋100 倍（XEXJ-H）和稀釋1000 倍（XEXJ-L）時對CHRM3 受體均有顯著的激動作用（P<0.001），激動率分別為336.19% 和101.20%。如表6所示，鹽酸檳榔堿在高、低濃度下均有顯著激動作用（P<0.001），激動率分別為91.85%和106.27%；槲皮苷、異槲皮苷、橙皮苷和新橙皮苷在高濃度下對CHRM3 均有顯著激動作用（P<0.01，P<0.001）。

表5 XEXJ對CHRM3的激動作用（±s,n=2）

表5 XEXJ對CHRM3的激動作用（±s,n=2）

注：與對照組比較，***P<0.001；表6～表12同。

表6 化合物對CHRM3的激動作用（±s,n=2）

表6 化合物對CHRM3的激動作用（±s,n=2）

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；表8、表10、表12同。

3.3.2 ADRB2激動實驗結果 如表7所示，XEXJ-H和XEXJ-L 組對ADRB2 受體有顯著的激動作用（P<0.001），激動率分別為100.27%和100.31%。如表8所示，蘆丁、辛弗林、山柰酚、綠原酸、金絲桃苷、3,29-二苯甲酰栝樓仁三醇、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-β-D-龍膽雙糖苷、桔梗皂苷D、橙皮苷、槲皮苷、異槲皮苷高，低濃度均能顯著激動ADRB2受體（P<0.01，P<0.001）；芥子堿硫氰酸鹽、枸櫞酸高濃度對ADRB2有顯著激動作用（P<0.05，P<0.001）。

表7 XEXJ對ADRB2的激動作用（±s,n=2）

表7 XEXJ對ADRB2的激動作用（±s,n=2）

表8 化合物對ADRB2的激動作用（±s,n=2）

表8 化合物對ADRB2的激動作用（±s,n=2）

3.3.3 ADRA1A 拮抗實驗結果 如表9 所示，XEXJ-H和XEXJ-L組對ADRA1A受體均有顯著的抑制作用（P<0.001），抑制率分別為84.29%和63.89%。如表10 所示，連翹脂素在高濃度下能顯著抑制ADRA1A 受體的激動作用（P<0.05）；其余化合物的抑制作用不顯著。

表9 XEXJ對ADRA1A的抑制作用（±s,n=2）

表9 XEXJ對ADRA1A的抑制作用（±s,n=2）

表10 化合物對ADRA1A的抑制作用（±s,n=2）

3.3.4 COX-2拮抗實驗結果 如表11所示，XEXJ-H和XEXJ-L 對COX-2 均有顯著的抑制作用（P<0.001），抑制率分別為78.57%和89.13%。如表12所示，連翹酯苷A、松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷連翹脂素、蘆丁、金絲桃苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-β-D-龍膽雙糖苷、槲皮苷、去甲基川陳皮素、山柰酚在高、低濃度給藥下均能顯著抑制COX-2 的活性（P<0.001）；3,29-二苯甲酰栝樓仁三醇只有在高濃度時對COX-2有顯著的抑制活性（P<0.001）。

表11 XEXJ對COX-2的抑制作用（±s,n=2）

表11 XEXJ對COX-2的抑制作用（±s,n=2）

表12 化合物對COX-2的抑制作用（±s,n=2）

表12 化合物對COX-2的抑制作用（±s,n=2）

4 討論

中藥五味藥性理論是中藥藥性理論的核心內容之一，五味主要包括酸、苦、甘、辛、咸5 種基本味道，在功效方面表現為辛散、酸收、甘緩、苦堅、咸軟，是臨證立法、配伍組方的重要依據[7]。《黃帝內經》中酸收的作用表現在酸收心氣、酸收肺氣、酸收津液、酸收陰氣及酸斂咽瘡[8-9]。酸味藥能收、能澀的作用被臨床廣泛應用于止咳平喘，以斂肺氣。此外，酸能開胃氣，少用能健胃開食[10-11]。研究發現，酸味藥大多含有鞣質、有機酸等成分[12]。本研究發現，山楂中的有機酸類和枳實中的香豆素類可能是XEXJ 的酸味物質基礎。有機酸類中的綠原酸可能作用于PTGS2，干預5-羥色胺能突觸通路，調控胃腸道動力和內臟神經[13]；檸檬酸可能作用于PDE4B，干預cAMP 信號通路舒張支氣管、松弛氣道平滑肌[14]。

甘味藥補益作用主要體現在補氣、補陽、補血、補陰4 個方面；緩急作用主要體現在緩解筋肉之急和緩解藥力之急2 個方面；調和作用主要體現在健脾消食和調和諸藥2 個方面。甘味藥的有效成分以多糖、蛋白質、氨基酸等成分為主[15]。消食藥的化學成分以糖類、蛋白質為主，其次為生物堿和苷類，大多數藥物具有促進消化的功能，如山楂、谷芽[16]。分子對接發現，山楂中的糖類、萊菔子中的簡單苯丙素類和瓜蔞中的核苷類可能是XEXJ 的甘味物質基礎。網絡藥理學結果顯示，簡單苯丙素類化合物3,6'-二芥子酰基蔗糖及核苷類腺苷通過PDE5A 參與環鳥苷酸-蛋白激酶G（cGMP-PKG）信號通路調控腸道動力[17]，還可通過SRC 蛋白調節瞬時受體電位（TRP）通道，阻止Aδ纖維和氣道C 纖維活化進而達到止咳作用[18]。

苦味“能泄、能燥、能堅”，即具有清泄火熱、泄降氣逆、通泄大便、燥濕、堅陰等作用。辛味“能散，能潤，能橫行”，即具有散表邪、散里寒、散結滯等作用[19]。辛味與苦味配伍中“苦降辛開”法常用于治療脾胃疾病[20]，如大承氣湯中大黃、芒硝、枳實、厚樸四藥合用，共成“苦降辛開”之劑，在治療胃動力不足、腸梗阻等疾病中療效確切[21]。苦味藥主要活性成分為生物堿、苷類[22]。辛味藥的主要成分為揮發油、生物堿及萜類[23]。分子對接表明，連翹中的木脂素類和苯乙醇苷類，枳實、瓜蔞、蜜枇杷葉和葶藶子中的黃酮類及桔梗中的部分三萜類可能是XEXJ 的苦味物質基礎；檳榔中的生物堿類、葶藶子和枳實中的部分黃酮類可能是其辛味物質基礎。網絡藥理學結果表明，連翹脂素、山柰酚、檳榔堿可能通過作用于CHRM1、CHRM2、CHRM3，干預神經活性配體-受體相互作用通路、唾液分泌通路等，影響胃腸道平滑肌的收縮起到促消化作用[24]。山柰酚、蘆丁、柚皮苷、金絲桃苷、槲皮苷等可能通過作用于PTGS2、IL-1β、TNF等，干預腫瘤壞死因子信號通路、核轉錄因子-κB（NF-κB）信號通路等抑制炎性致熱因子的分泌發揮解熱抗炎作用[25]。辛弗林、連翹脂素可能分別作用于ADRB2、ADRA1A 干預cGMP-PKG 信號通路、鈣信號通路發揮止咳及解熱作用[26]。

毒蕈堿型膽堿受體（M 受體）廣泛分布于神經、心血管、消化和呼吸等系統中，調節許多重要的生理活動，如神經信號的傳遞、心血管活動、平滑肌收縮及內外分泌功能等[27]。M3受體是調節胃運動的主要受體，激動時可以引起胃腸道平滑肌收縮[28]。槲皮苷、異槲皮苷、柚皮苷、新橙皮苷和檳榔堿可通過激動CHRM3 受體發揮促消化作用；氣管平滑肌上主要分布的β腎上腺素能受體為G 蛋白偶聯受體（GPCR），呼吸道中以β2 受體為主，激動后引起腺苷酸環化酶活化，細胞內的cAMP 含量增加，游離Ca2+減少，使氣管平滑肌產生擴張效應，而支氣管收縮會導致呼吸能力下降，可能會引發咳嗽或喘息等其他癥狀[29]。蘆丁、辛弗林、山柰酚等13 個化合物可通過激動ADRB2受體發揮止咳作用；大部分脂肪細胞產熱是由交感神經系統通過GPCR 信號傳導調節，腎上腺素受體（AR）分為α亞型（包括α1和α2）、β亞型（包括β1、β2、β3）兩大類。α1-ARs在許多生理過程中發揮重要作用，包括平滑肌收縮、心肌變時變力、肝糖原代謝等[30]。研究證實，ADRA1A 激活后可通過與Gα偶聯產生信號轉導促進脂肪細胞產熱[31]。受體實驗分析連翹脂素可通過抑制ADRA1A 的激活發揮解熱作用。除神經條件外，炎癥因子的大量釋放同樣可引起發熱，參與調節體溫的中樞介質主要有前列腺素合成酶PGE2[32]，研究表明腦血管中的內皮細胞通過COX-2 提高了PGE2 的水平而引起發熱[33]。受體結果表明，除連翹苷和桔梗皂苷D 外，其余10 個化合物均能顯著抑制COX-2酶活性。

綜上，本研究采用“性-效-物”三元論的研究思路初步確定了XEXJ 的Q-marker，分別為黃酮類成分橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、去甲基川陳皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-β-D-龍膽雙糖苷、槲皮苷、異槲皮苷、金絲桃苷、山柰酚；苯乙醇苷類成分連翹酯苷A、連翹酯苷E；木脂素類成分連翹脂素、(+)-松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷；三萜類成分桔梗皂苷D、3,29-二苯甲酰基栝樓仁三醇；生物堿類成分辛弗林、檳榔堿；有機酸類成分枸櫞酸、綠原酸。

[利益沖突]本文不存在任何利益沖突。