皺木耳的生物學(xué)特性研究

王 浩，鐘劍鋒，黃士綺，林芳能，吳 彪，段左俊

（1.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南?？?571199；2.海南省林業(yè)科學(xué)研究所（海南省紅樹林研究院），海南?？?571100）

0 引言

皺木耳 Auricularia delicata（Mont.ex Fr.）Henn.又稱脆木耳、多皺木耳、粗木耳、羊肚耳、砂耳、素肚耳。是一種食藥兩用菌，夏季疊生或群生于闊葉樹倒木或腐朽木上，盤狀或耳狀，無柄或似具柄，邊緣全緣或淺裂，籽實(shí)層表面非光滑或有明顯褶皺，具不規(guī)則網(wǎng)狀棱紋，不育面具絨毛，新鮮時膠質(zhì)，黃棕色至紅棕色，干后紅棕色至棕黑色。主要生長于赤道周邊的國家和地區(qū)，在我國分布于華中、華南等地區(qū)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，皺木耳的食用價值和可栽培性具有很大潛力，市場反應(yīng)較好。但是，關(guān)于海南皺木耳培養(yǎng)特性的針對研究尚未見到有關(guān)報道。海南島氣候濕潤，植被廣袤，尤其適合皺木耳的生長栽培，通過對皺木耳生物學(xué)特性的研究，有利于加快皺木耳的生長速度，獲得更高的產(chǎn)量，為海南島豐富的林下資源的開發(fā)利用提供思路。

1 材料與方法

1.1 溫度對皺木耳菌絲生長的影響

采用 PDA 培養(yǎng)基，分別在 16℃、18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃、32℃、34℃條件下暗培養(yǎng)，pH自然，每個處理6次重復(fù)接種后連續(xù)5天以十字交叉法測量菌落直徑，同時觀察菌絲長勢、顏色等特征。

1.2 pH對皺木耳菌絲生長的影響

采用PDA培養(yǎng)基，用0.1 mol/L的HCI或NaOH溶液調(diào)節(jié)pH 為 5、6、7、8制成平板，置于28℃恒溫暗培養(yǎng)，每個處理6次重復(fù)。連續(xù)五天以十字交叉法測量菌落直徑，同時觀察菌絲長勢、顏色等特征。

1.3 無機(jī)鹽對皺木耳菌絲生長的影響

分別將1 g CaSO4、FeSO4、KH2PO4、K2HPO4、KCL、MgSO4、MnSO4、NaCl、ZnSO4加入 PDA 培養(yǎng)基中置于28℃恒溫暗培養(yǎng)，pH自然，以不加無機(jī)鹽為對照組，每個處理6次重復(fù)。連續(xù)五天以十字交叉法測量菌落直徑，同時觀察菌絲長勢、顏色等特征。

1.4 生長因子對皺木耳菌絲生長的影響

分別將VB1、VB2、VB3、VB6、VB12、復(fù)合維生素B、煙酰胺、葉酸加入 PDA 培養(yǎng)基中置于28℃恒溫暗培養(yǎng)，pH自然，以不加生長因子為對照組，每個處理6次重復(fù)。連續(xù)5天以十字交叉法測量菌落直徑，同時觀察菌絲長勢、顏色等特征。

1.5 光照對皺木耳菌絲生長的影響

采用PDA培養(yǎng)基，設(shè)連續(xù)光照、12 h 光暗交替、黑暗3種條件，28℃恒溫培養(yǎng)，pH自然，每個處理6次重復(fù)。連續(xù)5天以十字交叉法測量菌落直徑，同時觀察菌絲長勢、顏色等特征。

1.6 光質(zhì)對皺木耳菌絲生長的影響

采用PDA培養(yǎng)基，設(shè)紅、藍(lán)、綠、白、黃、紫6 種不同光質(zhì)條件，28℃恒溫培養(yǎng)，pH 自然，每個處理 6次重復(fù)。連續(xù)五天以十字交叉法測量菌落直徑，同時觀察菌絲長勢、顏色等特征。

1.7 碳源對皺木耳菌絲生長的影響

分別將相同 C/N 分子含量淀粉、蜂蜜、果糖、紅糖、糊精、麥芽糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖加入碳源實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基（酵母膏 0.2%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%、瓊脂粉2%）。中置于28℃恒溫暗培養(yǎng)，pH自然，以不加碳源為對照組，每個處理6次重復(fù)。連續(xù)5天以十字交叉法測量菌落直徑，同時觀察菌絲長勢、顏色等特征。

1.8 氮源對皺木耳菌絲生長的影響

分別將相同C/N分子含量蛋白胨、牛肉膏、硫酸銨、硝酸鉀、酒石酸銨、尿素、干酪素、檸檬酸鈉、麥芽浸粉加入氮源實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基（葡萄糖2%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%、瓊脂粉2%）置于 28℃恒溫暗培養(yǎng)，pH自然，以不加氮源為對照組，每個處理6次重復(fù)。連續(xù)5天以十字交叉法測量菌落直徑，同時觀察菌絲長勢、顏色等特征。

1.9 數(shù)據(jù)收集

通過拍照記錄了菌絲形態(tài)的重要特征。在接種后連續(xù)五天測定其直徑生長（cm）。菌絲生長速率的計(jì)算方法如下：V=D/T，其中V為菌絲生長速率（cm/day），D為直徑生長（cm），T為菌絲生長時間（天）。

1.10 數(shù)據(jù)分析

使用Graphpad Pism9.5進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，每個處理重復(fù)6次，每組的數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，并使用非參數(shù)檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與討論

2.1 溫度對皺木耳菌絲生長的影響

影響菌絲體生長的因素有很多，其中溫度是最關(guān)鍵的因素之一。首先，在本實(shí)驗(yàn)中，研究結(jié)果顯示皺木耳在14～24℃的條件下，生長速度快速提高；此后在24～30℃的過程中，生長速度逐漸下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與王敬等人的一致。綜上所述，可以得出結(jié)論，皺木耳在24～30℃下均能較快生長，其中在24℃的條件下，生長速度最快，在28℃的條件下，菌絲最為粗壯密集，顏色最鮮亮。

2.2 初始pH對皺木耳菌絲生長的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在ph=5的時候中，菌絲體生長速度最快，從ph=5到ph=8的過程中，菌絲體生長速度逐漸減緩。因此，皺木耳在弱酸性條件下生長速度更快，在初始ph=5時，生長速度最快。此外，在錢可晴的研究中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)保持一致。

2.3 無機(jī)鹽對皺木耳菌絲生長的影響

研究結(jié)果顯示（圖1），菌絲體在FeSO4、ZnSO4的環(huán)境下無法生長，或者是生長過于緩慢，以至于無法被觀察到；同時，當(dāng)菌絲體在MgSO4、MnSO4、CaSO4、KH2PO4、K2HPO4、KCL、NaCl，不含無機(jī)鹽的對照組條件下均可進(jìn)行生長，其生長速度排序?yàn)椋篊aSO4>對照組=MgSO4>KCL>NaCl>KH2PO4>K2HPO4>MnSO4。由此，可以得出，最適宜皺木耳生長的條件為CaSO4。

圖1 不同無機(jī)鹽對皺木耳菌絲生長的影響

2.4 生長因子對皺木耳菌絲生長的影響

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖2），生長因子對照組的生長速度最快，添加了其他生長因子的培養(yǎng)基生長速度均小于或等于空白對照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，皺木耳在生長過程中不需要額外添加生長因子，過多的生長因子反而會抑制其生長。

圖2 生長因子對皺木耳菌絲生長的影響

2.5 光照條件對皺木耳菌絲生長的影響

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖3）可以得出，菌絲體在黑暗環(huán)境下生長速度最快，在光照條件下及光暗交替的環(huán)境下生長速度均受到不同程度的抑制。此外，我們還發(fā)現(xiàn)，在連續(xù)光照條件下的菌絲最細(xì)，長勢不佳。因此在培育過程中，我們應(yīng)該盡量采用黑暗環(huán)境，避免光線長時間照射。

圖3 不同光照條件對皺木耳光照條件的影響（±SD，n=6）

2.6 光質(zhì)對皺木耳菌絲生長的影響

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖4）可以看出，不同光質(zhì)對菌絲體的生長均起到抑制作用。不同光質(zhì)下菌絲體生長速度的排序如下：紅>白>黃>綠>藍(lán)>紫。其中，紫光環(huán)境下的生長速度最慢，因此在培育過程中我們應(yīng)該避免讓菌絲體受到光線照射尤其是紫色光。

圖4 不同光質(zhì)對皺木耳菌絲生長的影響

2.7 碳源對皺木耳菌絲生長的影響

碳源是食用菌最重要的營養(yǎng)元素之一，它不僅是碳水化合物和蛋白質(zhì)的基本原料，同時又是重要的能量來源。菌絲的生長對碳源的需要量最大，且不同菌種其最適的碳源也不同。在實(shí)驗(yàn)中（圖5），菌絲體在大部分碳源環(huán)境下均能較好的生長，說明菌絲體對不同的碳源均能較好的適應(yīng)。此外，菌絲體在乳糖、糊精、甘露醇環(huán)境下生長較為緩慢，在實(shí)際培育過程中可以有目的地避開這些條件。

圖5 不同碳源對皺木耳菌絲生長的影響（±SD，n=6）

2.8 氮源對皺木耳菌絲生長的影響

氮源是合成微生物蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)和代謝產(chǎn)物中的氮素必需原料，其種類對于食用菌的生長代謝有很大的影響。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以得出，菌絲體在尿素中無法生長；在硫酸銨、硝酸鉀、酒石酸銨、干酪素、檸檬酸鈉、麥芽浸粉、硝酸鈉中生長遲緩；胰蛋白胨、牛肉膏、硫酸銨、酵母浸膏中生長迅速，其中在硫酸銨中生長最快（圖6）。

圖6 不同氮源對皺木耳菌絲生長的影響

3 結(jié)論

菌絲體在培養(yǎng)基中，最適宜的條件為ph=5，溫度為24℃，最適宜的無機(jī)鹽條件為CaSO4。不額外添加生長因子，最適宜的光照條件為黑暗環(huán)境，最適宜的光質(zhì)為紅光（或者是白光和黃光），最適宜的碳源為木糖（或者是葡萄糖，麥芽糖和不加碳源），最適宜的氮源為硫酸銨。海南島氣候濕潤，植被廣袤，尤其適合皺木耳的生長栽培，通過對皺木耳生物學(xué)特性的研究，有利于加快皺木耳的生長時間，獲得更高的產(chǎn)量。