基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討當(dāng)歸芍藥散治療女性青春期后痤瘡的作用機(jī)制

關(guān)鍵詞：網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；當(dāng)歸芍藥散；女性青春期后痤瘡

中圖分類(lèi)號(hào)：R758.73+3文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2024）03-0064-06

痤瘡是一種慢性炎癥性毛囊皮脂腺疾病，影響全球約9%的人［1］，具有發(fā)病率高、好反復(fù)、易留瘢痕等特點(diǎn)。近年來(lái)，現(xiàn)代女性受生活節(jié)奏、工作壓力、飲食習(xí)慣、情緒、睡眠等多因素的影響，其患病率逐年上升，且往往兼見(jiàn)月經(jīng)失調(diào)之癥。

女子以肝為先天，一方面，肝主血，肝血不足，血行不暢，則氣瘀滯，故發(fā)為月經(jīng)不調(diào)［2］；另一方面，肝主情志，情志不暢，肝失疏泄，氣機(jī)逆亂，氣血失合，臟腑失用，內(nèi)生瘀血、痰濕，郁滯皮膚發(fā)為痤瘡［3］，故治療女性青春期后痤瘡應(yīng)以肝為本，兼顧祛濕、活血。

當(dāng)歸芍藥散既能養(yǎng)血疏肝，又能健脾滲濕，高金娟等［3-4］等均通過(guò)臨床觀察發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸芍藥散治療痤瘡療效確切。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是涉及多個(gè)學(xué)科的一種綜合計(jì)算機(jī)方法，通過(guò)建立“靶點(diǎn)蛋白-疾病-藥物”網(wǎng)絡(luò)，能系統(tǒng)、整體地揭示藥物對(duì)疾病的影響［5］，故本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，探討當(dāng)歸芍藥散治療女性青春期后痤瘡的相關(guān)機(jī)制。

1資料與方法

1.1篩選活性成分與靶點(diǎn)登錄TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//old.tcmsp-e.com/tcmsp.php），以口服利用度（OB）≥30%和類(lèi)藥性（DL）≥0.18為標(biāo)準(zhǔn)，查找白芍、川芎、當(dāng)歸、白術(shù)、澤瀉、茯苓6味中藥的化學(xué)成分及相關(guān)靶點(diǎn)，再利用UniProt（https：//www.uniprot.org）數(shù)據(jù)庫(kù)，將篩選后的靶點(diǎn)統(tǒng)一進(jìn)行規(guī)范。

1.2篩選痤瘡相關(guān)靶點(diǎn)登錄GeneCard數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genecards.org），因青春期后痤瘡屬于痤瘡范疇，故不更改關(guān)鍵詞，仍為“acne”，挖掘數(shù)據(jù)庫(kù)里治療痤瘡的潛在靶點(diǎn)。在Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)中，靶點(diǎn)與疾病的聯(lián)系越緊密，Score值越高。據(jù)經(jīng)驗(yàn)，選擇大于中位數(shù)的Score值對(duì)應(yīng)的目標(biāo)靶點(diǎn)為痤瘡的潛在靶點(diǎn)。

1.3獲取當(dāng)歸芍藥散-痤瘡交集靶點(diǎn)對(duì)復(fù)方的相關(guān)靶點(diǎn)與痤瘡靶點(diǎn)取交集，結(jié)果用韋恩圖（http：//jvenn.toulouse.inra.fr）呈現(xiàn)，并將圖中結(jié)果提取記錄，獲得當(dāng)歸芍藥散治療痤瘡的主要作用靶點(diǎn)。

1.4構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)將上述潛在靶點(diǎn)提交至STRING11.0數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org）構(gòu)建蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)模型，物種為“人類(lèi)物種”，選擇 “最高可信度（0.900）”，其余設(shè)置均不變，得到PPI網(wǎng)絡(luò)，并運(yùn)用Cytoscape3.7.2軟件對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化。

1.5構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖準(zhǔn)備“中藥-成分”、“成分-靶點(diǎn)”屬性文檔，將其導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，構(gòu)建“當(dāng)歸芍藥散治療痤瘡的活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。

1.6富集分析登入Metascape平臺(tái)（http：//metascape.org/gp/index.html），將當(dāng)歸芍藥散治療沖任失調(diào)型痤瘡的潛在靶點(diǎn)上傳，進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析，物種選擇“sapiens”，設(shè)置Plt;0.01，借助微生信在線工具（http：//www.bioinformatics.com.cn/）將數(shù)據(jù)視圖化。

2結(jié)果

2.1當(dāng)歸芍藥散有效成分與靶點(diǎn)在TCMSP檢索到當(dāng)歸芍藥散包含山奈酚、肉豆蔻酮、β-谷甾醇等共54個(gè)有效活性成分，見(jiàn)表1。將符合篩選條件的靶點(diǎn)去重后，共得到相關(guān)靶點(diǎn)112個(gè)。

2.2“當(dāng)歸芍藥散-痤瘡”共同靶點(diǎn)利用GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)得到痤瘡靶點(diǎn)Score最大值為56.37，最小值為0.14，中位數(shù)為0.64，最終得到781個(gè)Scoregt;0.64的潛在靶點(diǎn)。將篩選的當(dāng)歸芍藥散活性成分靶點(diǎn)與痤瘡靶點(diǎn)取交集后繪制韋恩圖，得到當(dāng)歸芍藥散成分-痤瘡共同靶點(diǎn)33個(gè)，見(jiàn)圖1。

2.5GO功能和KEGG通路富集分析登錄Metascape平臺(tái)，對(duì)共有靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能與KEGG通路富集分析，根據(jù)P值，將各部分的前10個(gè)條目借助微生信在線工具可視化（見(jiàn)圖4）。結(jié)果顯示，生物過(guò)程富集化比例較大表現(xiàn)在對(duì)激素的反應(yīng)（response to hormone）、對(duì)脂多糖的反應(yīng)（response to lipopolysaccharide）等，分子功能主要是核受體活性（nuclear receptor activity），細(xì)胞組分為膜筏（membrane raft）。KEGG通路涉及脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、癌癥通路等，見(jiàn)圖5。

3討論

痤瘡是皮膚科常見(jiàn)病之一，其炎癥消退后的色素沉著及紅斑會(huì)對(duì)患者造成較大影響。近年來(lái)，女性需扮演的社會(huì)角色漸增，其患病率呈升高趨勢(shì)。大部分患者發(fā)病與月經(jīng)周期相關(guān)，經(jīng)前或來(lái)潮時(shí)皮疹增多，經(jīng)后減輕。中醫(yī)認(rèn)為受特殊生理周期、不規(guī)律作息、工作壓力大等的影響，現(xiàn)代女性易造成肝郁血虛；肝氣乘脾，脾失健運(yùn)，內(nèi)生水濕，郁滯皮膚而發(fā)病。當(dāng)歸芍藥散源于《金匱要略》，方由白芍、川芎、當(dāng)歸、白術(shù)、澤瀉、茯苓組成。方以白芍為君，其有健脾柔肝、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的作用［4］，肝主藏血，故肝體為陰，白芍柔肝養(yǎng)陰，使肝體得養(yǎng)，肝氣得疏。川芎、當(dāng)歸共為臣藥，川芎辛溫，為“血中氣藥”，善走血海而活血祛瘀，且還有下調(diào)經(jīng)水，中開(kāi)郁結(jié)之功；當(dāng)歸養(yǎng)血活血，既助川芎行氣化瘀，又合白芍養(yǎng)血柔肝以治肝血不足［7］，白芍性靜而守，當(dāng)歸性動(dòng)而走，二藥相伍，養(yǎng)血斂陰不易血滯，活血不致動(dòng)血傷陰［3］；白術(shù)、茯苓、澤瀉同為佐藥，此三者調(diào)津以益脾，促進(jìn)氣血生化，使滋養(yǎng)肝體的陰血來(lái)源充足。縱觀全方，方中當(dāng)歸、白芍、川芎三者疏土之壅塞；茯苓、白術(shù)、澤瀉三者滲木中濕滯［2］，共奏養(yǎng)血調(diào)肝、健脾利濕之功。

本研究初步篩選出當(dāng)歸芍藥散治療女性青春期后痤瘡的主要活性成分為山柰酚、β-谷甾醇、肉豆蔻酮等。前列腺素可使皮脂腺細(xì)胞異常增生、皮脂過(guò)度分泌，故與表皮炎癥性疾病密切相關(guān)。山奈酚通過(guò)抑制前列腺素合成達(dá)到治療目的。亦有研究顯示，山柰酚可以使傳導(dǎo)信號(hào)和激活轉(zhuǎn)錄的信號(hào)因子（STAT3）、核轉(zhuǎn)錄因子kappaB（NF-kB）失活，通過(guò)降低NF-kB、IL-6和TNF-α水平發(fā)揮抗炎作用［8］。雌激素及孕激素的下降減弱了對(duì)雄激素的抑制，過(guò)高的雄激素會(huì)導(dǎo)致皮脂腺分泌過(guò)多皮脂或異常成分，促使炎癥產(chǎn)生、毛囊皮脂腺角化過(guò)度而發(fā)病［9］。有研究表明［10］，β-谷甾醇能與膽汁酸核受體FXRα結(jié)合，而FXRα與雌激素信號(hào)通路具有相關(guān)性，亦有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)［11］β-谷甾醇能平衡激素水平，從而在調(diào)節(jié)激素水平的角度治療痤瘡。此外，β-谷甾醇還能通過(guò)抑制TNF-α釋放而減弱脂多糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。肉豆蔻酮屬于環(huán)狀二芳基庚烷類(lèi)化合物，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等作用［12］。此三者功效契合痤瘡的發(fā)病機(jī)制，成為痤瘡治療中的重要部分。

痤瘡發(fā)病始終伴隨炎癥反應(yīng)。腫瘤壞死因子是強(qiáng)大的前炎性因子，通過(guò)誘導(dǎo)炎性細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)、激活中性粒細(xì)胞使局部炎癥增強(qiáng)［13］。白細(xì)胞介素-6同樣能趨化、激活多類(lèi)炎癥細(xì)胞，研究表明［14］痤瘡患者血清中TNF、IL-6水平明顯高于健康對(duì)照組，提示二者均參與了痤瘡的炎癥反應(yīng)。視黃酸又稱(chēng)維甲酸（retinoic acid，RA），RXRA是皮膚中RXR亞型含量最高的為一種RA受體，維甲酸類(lèi)利用其調(diào)節(jié)皮脂腺活性、免疫和抗炎的特性達(dá)到治療痤瘡的效果［15］。激活的NR3C1（GR）復(fù)合物能上調(diào)細(xì)胞核中抗炎蛋白的表達(dá)，其被抑制后則驅(qū)動(dòng)炎癥反應(yīng)。血管細(xì)胞黏附分子1主要介導(dǎo)炎癥細(xì)胞向炎癥部分募集，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的出現(xiàn)。

痤瘡發(fā)病機(jī)制包括激素水平紊亂，如雄激素、胰島素樣生長(zhǎng)因子 1（IGF-1）、雌激素、糖皮質(zhì)激素等。炎癥因子水平與雄激素水平呈正相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)女性青春期后痤瘡患者血清睪酮水平顯著高于對(duì)照組正常女性。IGF-1誘導(dǎo)腎上腺和性腺分泌雄激素，進(jìn)而影響皮脂腺生理功能，雷興等［16］研究顯示痤瘡組 IGF-1α表達(dá)程度高于正常對(duì)照組。脂多糖能激活巨噬細(xì)胞，促使其大量分泌炎癥因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）引起炎癥反應(yīng)，這在張琳珮、劉栩渤等［17-18］實(shí)驗(yàn)中均得到驗(yàn)證。KEGG通路富集分析顯示，當(dāng)歸芍藥散可能通過(guò)脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、癌癥通路等途徑來(lái)干預(yù)女性青春期后痤瘡。痤瘡發(fā)病的固有免疫之一為T(mén)oll 樣受體（TLR）的參與，巨噬細(xì)胞是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中炎癥和代謝信號(hào)的關(guān)鍵整合因子，其脂質(zhì)含量同樣通過(guò)增加Toll樣受體對(duì)其配體的敏感性和激活NLRP3炎癥小體來(lái)影響?zhàn)畀彽陌l(fā)病和嚴(yán)重程度。

本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法初步探討了當(dāng)歸芍藥散治療女性青春期后痤瘡的主要機(jī)制。但鑒于此方法學(xué)本身的局限性，以及中藥成分在不同地域、不同時(shí)期、不同煎煮方法下存在差異，本研究未將方藥煎煮后的化學(xué)成分及其活性成分一并納入。本研究主要以綜合多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)和算法的結(jié)果為基礎(chǔ)，后續(xù)應(yīng)在此基礎(chǔ)上利用細(xì)胞或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證，從而明晰當(dāng)歸芍藥散治療女性青春期后痤瘡的主要調(diào)控靶點(diǎn)。參考文獻(xiàn)：

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