老年急性冠脈綜合征患者PCI術前血清miR-34a、miR-182水平與術后對比劑腎病發生的相關性

摘要：目的 探究老年急性冠脈綜合征（ACS）患者經皮冠狀動脈介入治療（PCI）術前血清微小RNA（miR）-34a、miR-182水平與術后對比劑腎病（CIN）發生的關系。方法 納入行PCI治療的146例老年ACS患者。收集ACS患者臨床資料；全自動生化分析儀檢測術前血脂、腎功能指標；實時熒光定量PCR法測定血清miR-34a、miR-182水平。根據患者PCI術后是否發生CIN分為CIN組（20例）和非CIN組（126例）。比較CIN組和非CIN組臨床資料、術前血脂、腎功能指標、血清miR-34a、miR-182、術后血清肌酐（Scr）、腎小球濾過率（eGFR）水平；分析老年ACS患者術前血清miR-34a、miR-182、術后Scr、eGFR的相關性及影響老年ACS患者PCI術后發生CIN的因素，受試者工作特征（ROC）曲線評估術前血清miR-34a、miR-182水平對老年ACS患者PCI術后發生CIN的預測價值。結果 CIN組術前血清miR-34a和miR-182水平、術后Scr水平均高于非CIN組，術后eGFR水平低于非CIN組（P＜0.05）；ACS患者術前血清miR-34a、miR-182與術后Scr呈正相關，與術后eGFR呈負相關（P＜0.05）；術前血清miR-34a與miR-182呈正相關（P＜0.05）；術前血清miR-34a、miR-182水平升高是影響老年ACS患者PCI術后發生CIN的獨立危險因素（P＜0.05）；術前血清miR-34a、miR-182及兩者聯合預測老年ACS患者PCI術后發生CIN的曲線下面積（AUC）分別為0.881、0.888、0.964，兩者聯合預測的AUC高于各自單獨預測（P＜0.05）。結論 術前血清miR-34a、miR-182水平升高是老年ACS患者PCI術后發生CIN的危險因素，兩者聯合可有效預測CIN的發生。

關鍵詞：急性冠狀動脈綜合征；經皮冠狀動脈介入治療；微小RNA-34a；微小RNA-182；對比劑腎病

中圖分類號：R541.4，R692.9 文獻標志碼：A DOI：10.11958/20231183

Correlation between serum miR-34a and miR-182 levels before PCI and postoperative contrast-induced nephropathy occurrence in elderly patients with acute coronary syndrome

XUE Wenping1， QIN Wei1， LIU Tingting2， ZHANG Aiwen1， SHI Fei1

1 Department of Cardiology， 2 Department of Outpatient， Affiliated Hospital of Chengde Medical College，"Chengde 067020， China

Corresponding Author E-mail： shifeisf@aliyun.com

Abstract： Objective To investigate the relationship between serum microRNA （miR）-34a and miR-182 levels before percutaneous coronary intervention （PCI） and postoperative contrast-induced nephropathy （CIN） occurrence in elderly patients with acute coronary syndrome （ACS）. Methods A total of 146 elderly patients with ACS who underwent PCI were included. Clinical data of ACS patients were collected. The indexes of preoperative blood lipid and renal function were detected by automatic biochemical analyzer. Serum levels of miR-34a and miR-182 were determined by real time fluorescence quantitative PCR. Patients were divided into the CIN group （20 cases） and non-CIN group （126 cases） according to whether CIN occurred after PCI. Clinical data， preoperative blood lipids， renal function indexes， serum miR-34a， miR-182， postoperative serum creatinine （Scr） and glomerular filtration rate （eGFR） were compared between the CIN group and the non-CIN group. The correlation of preoperative serum miR-34a， miR-182， postoperative Scr， and eGFR in elderly patients with ACS were analyzed， and factors affecting the occurrence of CIN in elderly patients with ACS after PCI were also analyzed. Receiver operating characteristic （ROC） curve was used to evaluate the predictive value of preoperative serum miR-34a and miR-182 levels for occurrence of CIN in elderly patients with ACS after PCI. Results Preoperative serum miR-34a and miR-182 levels and postoperative Scr levels were higher in the CIN group than those in the non-CIN group， while postoperative eGFR level was lower than those in the non-CIN group （P＜0.05）. Preoperative serum miR-34a and miR-182 were positively correlated with postoperative Scr， and negatively correlated with postoperative eGFR in elderly patients with ACS （P＜0.05）. Preoperative serum miR-34a was positively correlated with miR-182 （P＜0.05）. The increase of serum miR-34a and miR-182 levels before surgery were an independent risk factor for occurrence of CIN in elderly patients with ACS after PCI （P＜0.05）. The area under curve （AUC） of preoperative serum miR-34a， miR-182 and their combination in predicting postoperative occurrence of CIN in elderly ACS patients after PCI were 0.881， 0.888， and 0.964， respectively. The AUC predicted by the two combined was higher than that predicted by each separately （P＜0.05）. Conclusion The increased serum levels of miR-34a and miR-182 before surgery are risk factors for occurrence of CIN in elderly patients with ACS after PCI， and the combination of the two can effectively predict the occurrence of CIN.

Key words： acute coronary syndrome; percutaneous coronary intervention; microRNA-34a; microRNA-182; contrast-induced nephropathy

急性冠狀動脈綜合征（ACS）好發于老年人群，是臨床常見的心血管疾病之一，具有發病快、進展快、病死率高等特點，嚴重危及患者生命安全［1］。經皮冠狀動脈介入治療（PCI）可有效疏通閉塞血管、改善患者心功能，是治療ACS的主要方法之一［2］。隨著PCI技術的快速發展，其所用對比劑引起的相關并發癥也日益凸顯，對比劑腎病（CIN）是PCI術后常見并發癥之一，也是醫院獲得性腎損傷的常見原因之一［3-4］。因此，早期準確發現CIN并預防其發展尤為重要。目前已有較多針對微小RNA（miRNA）在腎臟疾病中表達譜的相關研究。腎臟的特異性miRNA表達異常，將對腎小管上皮細胞、足細胞等的正常功能產生嚴重影響，并參與調控腎臟纖維化、腎損傷等［5］。研究顯示，miR-34a參與糖尿病腎病的發生、發展，對腎小管間質纖維化有重要的調節作用［6］。孫瑤等［7］研究發現，miR-182在慢性腎功能衰竭患者中表達上調，且對慢性腎功能衰竭具有較高的診斷價值。但miR-34a和miR-182與CIN發生的關系尚鮮見報道。本研究旨在探討血清miR-34a、miR-182與老年ACS患者經PCI治療后CIN發生的相關性。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2021年7月—2023年5月在承德醫學院附屬醫院行PCI治療的老年ACS患者146例，其中男80例，女66例；年齡60～81歲，平均（70.11±7.54）歲。納入標準：（1）符合ACS相關診斷標準［8］。（2）符合PCI術及麻醉指征。（3）入院后均行PCI治療。（4）年齡≥60歲。（5）臨床資料完整。排除標準：（1）合并惡性腫瘤。（2）存在急慢性腎損傷。（3）對比劑過敏。（4）存在免疫性疾病。（5）存在感染性疾病。本研究經承德醫學院附屬醫院倫理委員會審核批準（批準號：CYFYLL2021037），患者及家屬簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集及血脂、腎功能指標檢測 入院后，收集患者性別、年齡、體質量指數（BMI）、基礎病（高血壓、糖尿病、高脂血癥）以及對比劑用量。采集所有ACS患者PCI術前晨起空腹肘靜脈血8 mL，4 250 r/min離心17 min分離血清，于-70 ℃保存。取部分血清樣本，采用全自動生化分析儀（型號AU2500，美國貝克曼公司）檢測血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）水平。

1.2.2 血清miR-34a、miR-182水平測定 取剩余的血清樣本，實時熒光定量PCR法測定miR-34a、miR-182水平。Trizol試劑（重慶新賽亞生物技術公司）提取總RNA，并反轉錄得到cDNA，然后使用PCR儀（型號Gentier 48E，濟南利恒生物技術公司）進行擴增，內參基因選擇U6。總反應體系22 μL，包括：PCR試劑10 μL，上、下游引物各0.5 μL，cDNA 1 μL，雙蒸水補充至22 μL。反應條件：95 ℃預變性140 s；95 ℃變性11 s，60 ℃退火28 s，72 ℃延伸33 s，共40個循環。測定完成后采用2-??Ct法計算miR-34a、miR-182相對表達水平，上述操作重復3次。引物序列見表1。

1.3 CIN診斷及分組 采集ACS患者注射對比劑前和72 h后空腹外周血3 mL，4 250 r/min離心17 min分離血清，使用全自動生化分析儀測定血清Scr水平，并計算術后（注射對比劑72 h后）腎小球濾過率（eGFR）。注射對比劑48～72 h內，患者Scr升高值＞26.5 μmol/L或達到基線水平（注射對比劑前）的1.5倍以上定義為CIN［9］。根據是否出現CIN將患者分為CIN組（20例）和非CIN組（126例）。

1.4 統計學方法 采用SPSS 25.0軟件進行數據處理。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（[x] ±s）表示，2組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數資料以例表示，組間比較采用χ2檢驗；患者術前血清miR-34a、miR-182與術后Scr、eGFR的相關性采用Pearson法分析；多元Logistic回歸分析影響PCI術后發生CIN的因素；受試者工作特征（ROC）曲線評價術前血清miR-34a、miR-182水平對PCI術后發生CIN的預測價值，曲線下面積（AUC）的比較行Delong檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組患者臨床資料、術前血脂和腎功能指標比較 見表2。2組患者性別、年齡、BMI、高血壓、糖尿病、高脂血癥比例、對比劑用量、術前TC、TG、HDL-C、LDL-C、Scr、BUN、UA水平差異均無統計學意義（P＞0.05）。

2.2 2組患者術前血清miR-34a、miR-182水平比較 CIN組患者術前血清miR-34a、miR-182水平均高于非CIN組（P＜0.01），見表3。

2.3 2組患者術后Scr、eGFR水平比較 CIN組患者術后Scr水平高于非CIN組，eGFR水平低于非CIN組（P＜0.01），見表4。

2.4 ACS患者術前血清miR-34a、miR-182與術后Scr、eGFR的相關性分析 Pearson相關分析顯示，ACS患者術前血清miR-34a、miR-182與術后Scr呈正相關（r分別為0.562、0.557，P＜0.05），與術后eGFR呈負相關（r分別為-0.431、-0.492，P＜0.05）；術前血清miR-34a與miR-182呈正相關（r=0.418，P＜0.05）。

2.5 影響老年ACS患者PCI術后發生CIN的多因素分析 以是否發生CIN（是=1，否=0）為因變量，以術前血清miR-34a、miR-182為自變量，行多因素Logistic回歸分析。結果顯示，術前血清miR-34a、miR-182水平升高是影響老年ACS患者PCI術后發生CIN的獨立危險因素（P＜0.05），見表5。

2.6 術前血清miR-34a、miR-182水平對老年ACS患者PCI術后發生CIN的預測價值 ROC結果顯示，術前miR-34a、miR-182兩者聯合預測老年ACS患者PCI術后發生CIN的AUC高于術前血清miR-34a、miR-182單獨預測（Z分別為2.013、2.023，均P＜0.05），見圖1、表6。

3 討論

ACS患者的典型臨床表現為胸痛、胸悶，以及不穩定型心絞痛、心力衰竭、急性心肌梗死等相應的臨床癥狀，嚴重時可發生猝死。由于ACS病情變化快，病死率高，對患者生命健康造成了嚴重威脅［10］。PCI是治療ACS的常用方法，其可重建血運，減少心肌缺血梗死面積，降低患者死亡率［11］。隨著PCI治療范圍的不斷擴展，對比劑的使用日益廣泛，CIN已成為院內急性腎功能損傷的第三大原因，CIN的發生可使院內和遠期死亡率顯著增加，嚴重影響患者生命安全［12］。CIN的發生機制較為復雜，既往研究顯示其可能與腎小管繼發性損傷、腎小球血流動力學變化、腎小球梗阻或活性氧形成造成的氧化應激損傷等有關［13］，但具體作用機制尚不明確，且缺乏有效診斷方案。因此，亟需探尋CIN有效預測指標，從而早期預測CIN的發生。

miRNA是一種在自然界廣泛存在的內源性小型非編碼單鏈RNA，在多種生理病理過程中（如生長發育、炎癥反應、信號轉導等）發揮重要的生物調節作用［14］。miRNA具有較高的穩定性，現有檢測方法可快速準確地檢出，其逐漸成為疾病早期診斷的一種新型生物標志物［15］。miR-34a、miR-182是miRNA家族成員，miR-34a在免疫球蛋白A（IgA）腎病患者血清中表達水平升高，且與IgA腎病的發生密切相關［16］。Du等［17］研究發現，miR-182水平升高會加重腎缺血/再灌注引發的急性腎損傷。郭艷梅等［18］研究顯示，miR-182-5p在膿毒癥并發急性腎損傷患兒血清中表達水平顯著升高，并參與了疾病的發生發展。

本研究結果顯示，CIN組患者術前血清miR-34a、miR-182水平均高于非CIN組，與上述研究結果［16-18］一致，提示兩者與CIN發病具有一定相關性。Scr作為肌肉代謝生成的內源性肌酐，其異常升高可提示腎功能損傷；eGFR可指示功能性腎單位的損傷程度［19-20］。本研究結果顯示，CIN組患者術后Scr水平較非CIN組升高，eGFR水平較非CIN組降低，提示CIN患者已經出現了腎功能損傷。進一步相關性分析顯示，老年ACS患者術前血清miR-34a、miR-182與術后Scr呈正相關，與術后eGFR呈負相關，且術前血清miR-34a與miR-182呈正相關，提示血清miR-34a、miR-182與術后腎功能密切相關，且兩者水平亦可能相互影響。分析其原因可能是，miR-34a水平升高可促進腎上皮細胞間質化、纖維化，使腎功能損傷加重［21］。此外，miR-182水平升高可刺激氧化應激反應，促進腎小管細胞凋亡，使患者腎損傷加重［22］。本研究還發現，術前血清miR-34a、miR-182水平升高是影響老年ACS患者PCI術后發生CIN的獨立危險因素，術前血清miR-34a、miR-182對ACS患者經PCI治療后CIN的發生具有一定的預測價值，且兩者聯合的預測效果優于單一指標，提示miR-34a、miR-182可能成為預測ACS患者PCI術后發生CIN的生物標志物，臨床上在進行PCI之前，要重點關注血清miR-34a、miR-182水平較高的患者，及時干預，以減少術后CIN發生的風險。

綜上所述，老年ACS患者PCI術后發生CIN的患者術前血清miR-34a、miR-182水平均顯著升高，且兩者與CIN患者腎功能密切相關，兩者聯合可有效預測CIN的發生。然而，本研究存在樣本量較少、資料收集受限等不足，可能會對結果造成一定偏差，未來可擴大樣本量，進一步分析miR-34a、miR-182的具體作用機制。

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基金項目：河北省醫學科學研究課題計劃項目（20220547）；承德市科學技術研究與發展計劃項目（201904A043）

作者單位：1承德醫學院附屬醫院本部心臟內科（郵編067020），2門診部

作者簡介：薛文平（1987），女，主治醫師，主要從事心臟疾病診治方面研究。E-mail：xuewenping537@163.com

通信作者 E-mail：shifeisf@aliyun.com

（本文編輯 陳麗潔）