先天性心臟病患兒母體孕期血清miR-22、Notch1表達及臨床意義

黃麗群 顧嵐 俞雪梅 于志雷 張琴 周艷

摘要 目的：分析先天性心臟病患兒母體孕期血清miR-22、Notch1表達及臨床意義。方法：選取蘇州吳江地區2019年1月—2020年12月出生的先天性心臟病患兒的孕婦58例為觀察組，選取同期住院分娩正常兒童的孕婦308名為對照組。對兩組孕婦一般資料及環境暴露因素進行問卷調查，采用單因素及二分類Logistic回歸分析潛在暴露因素與先天性心臟病之間的潛在關系；使用逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）及Pearson分析miR-22及Notch1表達及潛在關系。結果：觀察組外周血清miR-22低于對照組，Notch1高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。Pearson分析顯示，miR-22與Notch1呈負相關（P＜0.05）。兩組孕婦孕期體重增加＞15 kg、亞臨床甲狀腺功能減退、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。Logistic分析結果顯示，孕期體重增加＞15 kg、亞臨床甲狀腺功能減退、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤、miR-22水平降低及Notch1升高為新生兒先天性心臟病發生的獨立危險因素。結論：miR-22及Notch1異常表達與先天性心臟病發生密切相關，具有較好的研究價值；孕期多種暴露因素與先天性心臟病的發生發展相關，臨床工作應積極指導孕期健康，以降低先天性心臟病發生率。

關鍵詞 先天性心臟病；新生兒；孕期；暴露因素；miR-22；Notch1

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.05.026

基金項目 蘇州市吳江區“科教興衛”項目（No.wwk201819）

作者單位 南京醫科大學附屬江蘇盛澤醫院，南京醫科大學康達學院盛澤臨床醫學院（江蘇蘇州? 215228），E-mail：hlq364@163.com

引用信息 黃麗群，顧嵐，俞雪梅，等.先天性心臟病患兒母體孕期血清miR-22、Notch1表達及臨床意義［J］.中西醫結合心腦血管病雜志，2024，22（5）：907-910.

先天性心臟病是由于孕期各種暴露因素引起胎兒心臟、血管發育障礙，導致局部解剖結構及功能異常，或胎兒出生后應自動關閉的通道未閉合導致異常血流分布［1-3］。多項研究顯示，先天性心臟病是嬰幼兒病死率的首要原因，遺傳、環境因素均可導致先天性心臟病發生［4-5］。微小RNA是一類小的非編碼單鏈RNAs，作為基因表達的轉錄后調節因子，其是調節機體正常生理活動的重要因子，參與遺傳性疾病的發生發展過程［6］。有研究證實，主動脈夾層病人血清miR-22異常表達，且與Notch1有關［7］。有研究顯示，多數先天性心臟病的遺傳度為35%，一定程度提示暴露因素對胎兒心血管發育有重要影響［8］。不同區域人群生活習慣不同引起先天性心臟病的因素存在爭議。基于此，本研究旨在調查蘇州市吳江地區先天性心臟病患兒的發生相關孕期暴露因素，檢測miR-22及Notch1的表達，分析期臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2019年1月—2020年12月吳江地區出生的先天性心臟病患兒孕婦58例作為觀察組，匹配性別、出生時體重、孕周、孕次、產次等因素選取同期住院分娩正常兒童的孕婦308名作為對照組。納入標準：患兒先天性心臟病，經多普勒超聲證實；單胎妊娠；孕婦年齡＞18歲；于各個地區醫院接受完整孕前檢查。排除標準：既往高血壓、糖尿病及甲狀腺功能障礙；既往家族先天性心臟病病史；既往身體發育不良；精神疾病史；風濕性疾病病史。所有研究對象均對本研究知情同意并簽署知情同意書，且本研究經過醫院倫理委員會批準通過。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集

通過查閱相關病例資料，記錄兩組孕婦產前保健等資料；同時追蹤患兒先天性心臟病的診斷，由兒科醫生聯合多普勒超聲證實。

1.2.2 miR-22及Notch1含量檢測

抽取兩組孕婦外周血，離心后獲取血清，采用Trizol試劑獲取總RNA，使用逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測兩組研究對象外周血miR-22及Notch1含量。對總RNA進行電泳，反轉錄為單鏈cDNA。在RT-PCR儀上分別對miR-22（正向引物5′-TGGGTACCTTAAGTCAAGAGTG-3′，反向引物5′-AGGTGCTGTGGTCAACTCAGTT-3′）、Notch1（正向引物5′-GATGGCCTCAATGGGTACAAG-3′，反向引物5′-TCGTTGTTGTTGATGTCACAGT-3′）和內參GAPDH進行擴增。采用2－△△Ct計算miR-22與Notch1相對表達量。

1.2.3 暴露因素調查

根據相關指南設計先天性心臟病患兒母親孕期高危因素項目的調查問卷，對兩組新生兒母親行為問卷調查，調查兩組新生兒孕期的各種因素（母親年齡、職業、暴露環境、孕期感染史、生活習慣等）。

1.3 統計學處理

采用SPSS 23.0統計軟件進行數據分析，符合正態分布的定量資料以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；定性資料以例數、百分比（%）表示，采用χ2檢驗。基于組間的差異危險因素，建立兒童先天性心臟病影響因素模型，對相關因素差異按等級變量賦值，進行多因素Logistic回歸分析先天性心臟病患兒發生的危險因素，采用逐步向前（Ward）法進行變量篩，其中納入標準0.05，排除標準為0.10，相對社交回避發生風險以校準后優勢比（OR）表示。采用Pearson分析miR-22與Notch1的關系。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 先天性心臟病疾病情況

本研究共納入58例先天性心臟病患兒，其中室間隔缺損9例，房間隔缺損28例，動脈導管未閉6例，卵圓孔未閉13例，室間隔缺損聯合房間隔缺損2例；出生時間：2019年33例，2020年25例。均由兒科醫生在患兒出生時體檢發現異常雜音或經皮血氧飽和度異常后，經胸多普勒超聲證實確診。

2.2 兩組新生兒及孕婦臨床資料比較（見表1）

2.3 兩組孕婦外周血清miR-22與Notch1表達量比較

觀察組孕婦外周血清miR-22含量低于對照組（3.43±0.87和6.78±1.23，t＝－7.441，P＜0.01），Notch1表達量高于對照組（1.32±0.36和0.44±0.19，t＝3.440，P＜0.001）。Pearson分析顯示，孕婦外周血清miR-22表達與Notch1呈負相關（r＝－0.664，P＜0.01）。

2.4 先天性心臟病患兒孕期暴露因素分析

兩組職業、受教育程度、居住地、高脂血癥、高尿酸血癥比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；觀察組亞臨床甲狀腺功能減退、孕期體重增加＞15 kg、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤占比高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。詳見表2。

2.5 兒童先天性心臟病孕婦相關因素分析

多因素Logistic回歸分析顯示，孕期亞臨床甲狀腺功能減退、孕期體重增加＞15 kg、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤、miR-22與Notch1為先天性心臟病發生的獨立危險因素。詳見表3。

3 討 論

多項研究顯示，全球每年新發超過100多萬例先天性心臟病病人，雖然世界范圍內均開展了產前保健、孕期指導等各種措施以降低先天性心臟病發生率，但目前先天性心臟病仍是兒童發病率較高的先天性疾病，嚴重影響兒童群體健康［9-10］。有研究顯示，先天性心臟病的發生與遺傳物質及環境因素密切相關，且與各個地區群體生活習慣、生活環境等相關［11］。研究先天性心臟病發病的相關因素對降低先天性心臟病發生率，提高產前診斷水平，全面減少我國的先天性心臟病患兒數量具有重要的臨床意義［12］。為此，2018年，吳江區衛健委正式與上海復旦兒科醫院簽約開展新生兒先天性心臟病的篩查，早期發現先天性心臟病，以提高該地區先天性心臟病篩查及診療水平。

本研究結果顯示，納入的先天性心臟病患兒均為相對簡單的心臟畸形，經過正規治療后達到康復水準，對患兒后期生活影響較小。分析原因可能與先進的心臟彩超可早期診斷復雜的心臟病并采取優生措施相關，家屬優生選擇基于后期治療效果及患兒的生活質量，故降低了復雜先天性心臟病出生率，與相關研究結果［13］一致。產前診斷先天性心臟病存在一定的漏診率，加之缺乏客觀血清學檢測導致先天性心臟病發生率維持在較高水平。

miRNA作為目前的研究重點，其外周血的表達已逐步應用于臨床疾病的診療中，且獲得了較好的應用效果，部分先天性心臟病病人中顯示miR-22異常。本研究結果顯示，觀察組孕期外周血miR-22水平表達低于對照組，初步說明了miR-22可能參與了先天性心臟病的發生發展，佐證了既往的研究結論［14］。本研究檢測了先天性心臟病患兒母親孕期外周血Notch1，結果顯示其高于對照組，且Pearson結果顯示，miR-22與Notch1呈負相關，一定程度提示miR-22/Notch1途徑可能參與先天性心臟病的發生發展。有研究顯示，miR-22/Notch1可作為先天性心臟病早期診斷的指標［15］。

本研究進一步分析暴露因素與先天性心臟病發生的關系，經過單因素篩查及多因素Logistic分析顯示，孕期亞臨床甲狀腺功能減退、孕期體重增加＞15 kg、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤為新生兒先天性心臟病發生的獨立危險因素。分析原因：1）亞臨床甲狀腺功能減退主要指孕婦無特異性臨床表現，僅外周血促甲狀腺激素水平高于正常值高限，游離甲狀腺素處于正常水平；臨床亞臨床甲狀腺功能減退發病率逐年升高，好發于育齡孕婦，易漏診，目前對該病的干預治療也存在爭議，甲狀腺素對胎兒的心臟功能發育具有重要影響。結合既往研究結果，建議加強孕期甲狀腺功能檢測，脫離既往“甲功五項”的慣性思維，從而降低甲狀腺功能異常的漏診率［16］。2）孕期體重增加＞15 kg可增加妊娠期合并癥，如高血壓、糖尿病發生率。本研究結果顯示，孕期體重增加＞15 kg為新生兒先天性心臟病的危險因素，可能與其增加了妊娠期合并癥發生率相關。蘇州吳江地區居民飲食多以米面為主食，同時菜品口味偏甜，最終導致孕期體重增加過快，故積極控制孕期體重增長為孕期保健的重要內容［17］。3）孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥為常見的危險因素，本研究結果與既往研究結果［18］一致。4）喜吃燒烤為本研究發現的危險因素，隨著燒烤逐漸在業余生活中流行，其為先天性心臟病潛在的危險因素，可能與燒烤中各種添加劑、防腐劑為致畸因素，同時燒烤食物可能制作不熟，生肉、海鮮中的弓形蟲引起感染風險，海鮮中的嘌呤成分導致尿酸增高。海鮮中的嘌呤成分已證實為先天性心臟病的危險因素［19-20］。本研究缺乏弓形蟲感染資料不全未進一步分析，同時結果顯示，觀察組高尿酸血癥發生率高于對照組，但差異無統計學意義（P＞0.05），可能與樣本量有限相關，有待進一步研究證實。

綜上所述，孕期外周血miR-22/Notch1差異表達可作為先天性心臟病的重要指標，同時亞臨床甲狀腺功能減退、孕期體重增加＞15 kg、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤為蘇州市吳江地區先天性心臟病患兒的獨立危險因素，應加強孕期保健。本研究為單中心研究且病例收集為巢氏病例對照，存在一定的偏倚。

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（收稿日期：2023-01-05）

（本文編輯薛妮）