蘿卜籽酶解制備蘿卜硫素工藝優化及其體外消化研究

李惠琳，劉 昊，李 玨，木耶賽爾·凱代斯，圖爾蓀阿依·圖爾貢，趙 雷，何慶峰,*

（1.和田職業技術學院農業科技系，新疆維吾爾自治區和田 848000；2.天津農學院食品科學與生物工程學院，天津 300000）

蘿卜硫素（sulforaphane，1-異硫氰酸酯（4R）-（甲基亞磺酰基）丁烷），又稱萊菔硫烷，由十字花科蔬菜及種子中硫代葡萄糖苷（Glucosinolates，GLS）經植物黑芥子酶水解而成，屬于異硫氰酸酯中的一類。蘿卜硫素是目前發現的蔬菜中抗癌效果較強的天然活性物質，同時，其在抗氧化、抗炎等方面也具有獨特的作用[1]。蘿卜硫素的制備方法主要包括合成法及酶法，前者需要使用大量的有毒有機試劑，且反應過程難以控制，副產物較多，在食品工業中未能得到廣泛應用。而酶法從天然植物中提取的蘿卜硫素安全性更高，更能滿足市場對功能性食品配料安全性的需求。該法一般包括酶解和提取兩個過程。酶解步驟中，GLS 經植物本身內源性黑芥子酶水解轉化為蘿卜硫素。而酶解產物的組成，以及蘿卜硫素得率往往與酶解條件密切聯系[2]。因此，目前大部分研究重點主要集中在如何調控酶解條件方面，包括pH、溫度、上皮硫特異蛋白（ESP）活性，酶輔助因子（Fe2+、Na+、Ca2+）、外源激素、抗氧化劑、外源性黑芥子酶等[3-4]。而在提取過程中，較多研究使用丙酮及二氯甲烷等有機溶劑，而乙酸乙酯的毒性相對較弱，在蘿卜硫素的提取應用中具有一定的研究價值[5]。此外，國內外對于蘿卜硫素植物來源的研究主要集中在十字花科蕓薹屬植物西蘭花，而有關蘿卜硫素其他植物來源的研究相對較少。

蘿卜（Raphanus sativusL.）屬于十字花科蘿卜屬植物，在我國資源豐富，其根部及葉部具有一定的營養及藥用價值，而其種子也被稱為“萊菔子”，更是我國一種傳統的藥食兩用中藥材[6]。已有研究表明，蘿卜根莖及種子中含有一定量的蘿卜硫素，是制備蘿卜硫素的潛在天然來源[7-8]。由于酶法制備蘿卜硫素極易受酶解條件的影響，往往需對酶解工藝進行優化。已有少數學者研究了酶解蘿卜制備蘿卜硫素的工藝優化，例如，陽暉等[9]發現胭脂蘿卜廢渣中提取蘿卜硫素的最優酶解工藝為：酶解溫度31 ℃，內源酶酶解時間7.7 h，pH5.6，VC添加量為0.24 mg/kg，此時蘿卜硫素得率為561.30 μg/g。而王兆玲等[10]發現蘿卜芽苗中提取還原型蘿卜硫素的最佳酶解條件為：緩沖溶液的pH 為5.79，酶解時間為49 min，料液比為33.12%，VC含量為6.9 mmol/L，在此條件下還原型蘿卜硫素的得率為7.39 mg/g。但目前尚無關于酶解蘿卜籽制備蘿卜硫素的工藝優化方面的報道。此外，在作為功能食品配料使用時，胃腸消化是影響植物提取物活性成分對機體發揮生物效應的關鍵因素[11]。而有關蘿卜籽蘿卜硫素在胃腸消化過程中含量及抗氧化活性變化規律的研究鮮有報道。綜上，本研究以來自大紅蘿卜（RedRaphanus sativus）的種子為原料，在添加自制外源芥子酶，超聲及微波多種輔助條件下，利用內源性芥子酶進行GLS 酶解轉化，以乙酸乙酯為溶劑提取蘿卜硫素。利用單因素實驗及響應面分析（Response surface methodology，RSM）法優化酶解條件，建立一種安全、可靠的蘿卜籽蘿卜硫素酶法提取工藝。并使用體外胃腸消化模型對提取物中蘿卜硫素含量及其抗氧化活性的體外消化規律進行了研究。旨在為天然蘿卜硫素的制備方法，以及蘿卜籽的高附加值利用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

‘紅豐一號’蘿卜種子 購于天津農科院，于2022 年采集；芥菜籽 購于當地市場；蘿卜硫素對照品（純度＞90%，HPLC） 購于天津尖峰天然產物有限公司；胃蛋白酶（30000 U/g）、胰蛋白酶（250 U/g）購于上海源葉生物科技有限公司；鐵氰化鉀、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼、硫酸亞鐵、鄰苯三酚、乙酸乙酯 均為分析純，購于天津明川生物科技公司。

1100 系列高效液相色譜儀 安捷倫科技有限公司（中國）；RE-201D 旋轉蒸發儀 鄭州科文儀器設備有限公司；BK-FD10S 型真空冷凍干燥機BioBASE 博科集團；FA-1004 電子分析天平 紹興景邁儀器設備有限公司；VGT-1730QG 超聲波清洗機 廣東固特科技有限公司；CYWB-10 微波消解儀 杭州川一實驗儀器有限公司；HH-4 電熱恒溫水浴鍋 安瑞醫療器械有限公司；FW-100 高速萬能粉碎機 天津泰斯特儀器有限公司；7200 系列可見光分光光度計 尤尼柯（上海）儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 蘿卜硫素的提取方法

1.2.1.1 外源黑芥子酶液制備 參考胡翠珍等[12]的方法制備黑芥子酶液并測定其活性。芥菜籽粉碎，過60 目篩，取0.5 g 放入三角瓶中，再加入25 mL 蒸餾水，40 ℃條件下，360 W 超聲波振蕩20 min，過濾除雜，得黑芥子酶粗酶液，測得酶活為0.891 μmol/（min·g）。

1.2.1.2 蘿卜硫素的制備 參考Tanongkankit 等[13]的方法，略作修改，如下：

前處理：0.2 g 蘿卜種子樣品在研磨機中粉碎，過40 目篩，并在55 ℃下加熱5 min，然后立即在冰上冷卻，以失活ESP。

脫脂：在培養箱搖動器中，用正己烷將種子粉脫脂一段時間，然后將剩余的種子粉在通風櫥中干燥過夜。

酶解轉化提取：脫脂后的種子樣品添加10 mL芥子酶粗酶液，然后加入磷酸鉀緩沖液（pH7.0）調節料液比（1:20 mg/mL），在酶解體系中加入不同量的抗壞血酸，并使用設計的溫度和時間進行酶解轉化，超聲提取2 次，每隔5 min 超聲一次，每次超聲30 min。

微波提取：酶解后，置于微波爐中，37 ℃，500 W提取5 min，隨后，按體積比1:1 加入乙酸乙酯萃取3 次，合并乙酸乙酯，4000 r/min 離心20 min，過濾乙酸乙酯層。在40 ℃下，用旋轉蒸發儀旋轉濃縮至乙酸乙酯完全揮發，得膏狀蘿卜硫素粗提物，甲醇溶解，冷藏待用。

純化：將蘿卜硫素粗提物用少量丙酮溶解后，過0.45 μm 有機膜去除雜質后，上硅膠SPE 柱（2.5 cm×100 cm，柱體積 400 mL），以丙酮為洗脫溶劑，洗脫體積一般為2 個保留體積（約400 mL），洗脫流量為2 mL/min，大約每2 h 收集一次餾分（5～10 mL/管），采用薄層色譜法（Thin-Layer Chromatography，TLC）檢測含有蘿卜硫素的餾分，合并這些餾分，冷凍干燥后得到純化后蘿卜硫素樣品。

1.2.2 蘿卜硫素的HPLC 測定

1.2.2.1 HPLC 檢測 參照盧旭等[14]的方法，略作改進。具體HPLC 條件為：色譜柱為SB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈－乙酸（15:85）；流速設置為0.6 mL/min。進樣體積為10 μL；柱溫為35 ℃，使用紫外檢測器，檢測波長為254 nm。

1.2.2.2 蘿卜硫素標準曲線繪制 取5 mg 蘿卜硫素標準品溶解于5 mL 甲醇，配成終濃度為500、250、125、62.5、31.25、0 μg/mL 的標準溶液。濃度由低到高依次進樣，進樣量為10 μL，每個濃度重復3 次。按照以上HPLC 條件進行分析。以蘿卜硫素質量濃度為縱坐標Y，以蘿卜硫素出峰面積為橫坐標X，進行線性回歸，得回歸方程：Y=0.00003X-0.3102，R2=0.992。

1.2.2.3 蘿卜硫素得率計算：分別測定各樣品提取液中的蘿卜硫素含量，根據回歸方程計算提取液中蘿卜硫素質量濃度，各樣品蘿卜硫素得率按公式（1）計算：

式中：C 為蘿卜硫素提取液質量濃度（mg/mL）；V 為復溶溶液體積（mL）；m 為樣品的質量（g）。

1.2.3 單因素實驗

1.2.3.1 酶解時間對蘿卜硫素得率的影響 準確稱取蘿卜種子樣品0.2 g，在固定外源酶添加量10 mL，400 W 超聲30 min/次（2 次），500 W 微波5 min 的基礎上，將酶解溫度、VC添加量分別設定為35 ℃、1.5 mg/g，酶解時間分別調為10、20、30、40、50、60 min，在該條件下進行實驗，考察酶解時間對蘿卜硫素得率的影響。

1.2.3.2 酶解溫度對蘿卜硫素得率的影響 準確稱取蘿卜種子樣品0.2 g，在固定外源酶添加量10 mL，400 W 超聲30 min/次（2 次），500 W 微波5 min 的基礎上，將酶解時間、VC添加量分別設定為20 min、1.5 mg/g，酶解溫度分別調為25、30、35、40、45、50、55 ℃，在該條件下進行實驗，考察酶解溫度對蘿卜硫素得率的影響。

1.2.3.3 VC添加量對蘿卜硫素得率的影響 準確稱取蘿卜種子樣品0.2 g，在固定外源酶添加量10 mL，400 W 超聲30 min/次（2 次），500 W 微波5 min 的基礎上，將酶解時間、酶解溫度分別設定為20 min、35 ℃，VC添加量分別調為0.1、0.4、0.7、1.0、1.5、2.0、3.0 mg/g，在該條件下進行實驗，考察VC添加量對蘿卜硫素得率的影響。

1.2.4 響應面Box-Behnken 試驗設計 采用三因素三水平Box-Behnken 設計（BBD）。自變量的范圍及水平見表1。

表1 響應面分析因素和水平Table 1 Response surface analysis factors and levels

1.2.5 驗證實驗 在實驗的取值范圍內，以最大得率為目標，利用Design-Expert 8.0.6 Trial 軟件中的Optimization 功能，確定最優酶解工藝條件。使用修正工藝條件，重復3 次實驗對響應面優化工藝進行驗證。

1.2.6 體外模擬胃腸消化 在確定的最優酶解工藝條件下，按照上述提取條件制備蘿卜硫素乙酸乙酯提取物，并參考Lü等[15]的方法對其進行體外消化實驗，主要步驟如下：

胃消化：將1 g 提取物樣品溶解于50 mL 甲醇，用1 mol/L 的鹽酸溶液調節pH 到2.0 后，加入胃蛋白酶溶液（0.48 g 胃蛋白酶溶解于15 mL 0.1 mol/L HCl）12 mL，恒溫水浴振蕩（37 ℃，160 r/min）2 h 模擬體外胃內消化，消化過程避光進行。消化結束后，另一部分在沸水浴中加熱5 min 終止酶解反應，冷卻，5000 r/min 離心10 min，收集上清液及殘渣待測。

腸消化：胃液消化結束步驟以后，取30 mL 胃消化液，用NaOH 調節pH 到7.8，加入胰蛋白酶液（0.288 g 胰蛋白酶溶于12 mL pH7.0 的0.01 mol/L PBS 緩沖液中）8 mL，在避光條件下恒溫水浴振蕩2 h 模擬腸道消化（37 ℃，160 r/min），模擬消化結束后，在沸水浴中加熱5 min，終止酶解反應，冷卻，5000 r/min 離心10 min，收集上清液及殘渣待測。

1.2.7 胃腸消化對清除自由基能力的影響

1.2.7.1 DPPH 自由基清除實驗 參照郭麗萍等[16]的方法，略有改動，具體步驟：取2 mL 消化液樣品，加入2 mL 現配的DPPH 乙醇溶液（0.1 mmol/L），混合均勻，室溫下避光反應35 min，在517 nm 波長下測其吸光度值，實驗重復三次，按公式（2）計算DPPH 自由基清除率。

式中：A0為DPPH 乙醇溶液吸光度值；A1為DPPH 乙醇溶液和樣品液反應液吸光度值；A2為乙醇與樣品溶液混合液吸光度值。

1.2.7.2 ABTS+自由基清除實驗 參考龍芳[17]的方法，略有改動，如下：ABTS 溶液（7 mmol/L）和K2S2O8（2.45 mmol/L）1:1（v/v）混合。在室溫避光條件下放置16 h，用乙醇稀釋混合溶液至734 nm 波長處吸光值在（0.700±0.005）范圍內，即為ABTS+工作液。取50 μL 消化液樣品，加入0.15 mL ABTS+工作液，室溫避光靜置6 min 后測定734 nm 處的吸光值。按照式（3）計算清除率。

式中：As為樣品和ABTS+工作液吸光值；Ab為無水乙醇替代ABTS+工作液的吸光度；A0為無水乙醇替代樣品的吸光度。

1.2.7.3 OH 自由基清除實驗 參考Wang 等[18]的方法，略有改動。取1.0 mL 消化液樣品，加入2.0 mL 水楊酸乙醇溶液（6 mmol/L）和2.0 mL FeSO4（6 mmol/L）混合均勻，再加入0.1 mL H2O2溶液（6 mmol/L）于試管中，混勻，在37 ℃水浴中反應30 min，在510 nm 波長測定吸光度，按照公式（4）計算羥基自由基清除率，結果以羥基自由基清除率（%）表示。

式中：A1為樣品吸光度值；A2為不加顯色劑H2O2吸光度值；A0為空白吸光值。

1.3 數據處理

2 結果與分析

2.1 單因素實驗結果

2.1.1 酶解時間對蘿卜硫素得率的影響 如圖1 所示，蘿卜硫素得率在酶解20 min 時達到最大（1.55 mg/g），顯著高于10 min 及40～60 min（P＜0.05）。該結果表明，酶解時間小于20 min 時，隨著酶解時間的延長，蘿卜硫素得率增高，而隨著酶解時間過長，得率反而下降。酶解時間過短，蘿卜硫素提取不充分，得率較低。隨著酶解時間的增加，蘿卜硫素被充分提取，得率增高。但酶解時間過長，蘿卜硫素的降解量超過其生成量，導致得率降低[19]。通過統計學分析，酶解時間對蘿卜硫素得率的影響有顯著差異（P＜0.05），其中酶解時間20 min 時極顯著，選取酶解時間10、20、30 min 進行響應面試驗。

圖1 酶解時間對蘿卜硫素得率的影響Fig.1 Effect of enzymatic hydrolysis time on extraction yield of sulforaphane

2.1.2 酶解溫度對蘿卜硫素得率的影響 如圖2 所示，隨溫度升高，蘿卜硫素得率先增加后降低（P＜0.05），在40 ℃條件下得率達到最高值。說明40 ℃為外源芥子酶的最適反應溫度。這和Gonzalez 等[20]的研究結果相似。隨著溫度的繼續升高，蘿卜硫素得率不斷降低。在適宜的溫度條件下，芥子酶活性高，有利于硫代葡萄糖苷水解生成蘿卜硫素[21]；但當溫度過高時，芥子酶活性大大降低，或高溫使生成的蘿卜硫素部分分解[2]，從而導致得率下降。通過統計學分析，酶解溫度對蘿卜硫素得率的影響有顯著差異（P＜0.05），其中酶解溫度40 ℃時極顯著，選取酶解溫度35、40、45 ℃進行響應面試驗。

圖2 酶解溫度對蘿卜硫素得率的影響Fig.2 Effect of enzymatic hydrolysis temperature on extraction yield of sulforaphane

2.1.3 VC添加量對蘿卜硫素得率的影響 如圖3 所示，當VC添加量達到0.7 mg/g 時得率最高，達到1.75 mg/g，顯著高于VC添加量為0.1、0.4、2.0 及3.0 mg/g 條件下的蘿卜硫素得率（P＜0.05）。該結果表明較低和較高的VC添加量均不利于蘿卜硫素提取。VC是芥子酶的非競爭性激化劑，添加VC濃度適宜，有利于異硫氰酸鹽的生成，提高蘿卜硫素生成量[22]。而VC添加量過高時，則對芥子酶活性有一定的抑制作用[23]，從而導致蘿卜硫素的生成量降低。通過統計學分析，VC添加量對蘿卜硫素得率的影響有顯著差異（P＜0.05），其中VC添加量0.7 mg/g 時極顯著，選取VC添加量0.4、0.7、1.0 mg/g 進行響應面試驗。

圖3 VC 添加量對蘿卜硫素得率的影響Fig.3 Effect of VC addition on extraction yield of sulforaphane

2.2 響應面試驗結果及分析

蘿卜硫素得率（Y）被認為是自變量組合的響應值，各自變量因素對響應值的影響可以由以下二次方程解釋：

式中，β0是偏移項，βi、βii和βij分別是線性、二次和交互回歸系數。

所有試驗設計和數據分析均采用試用版軟件Design Expert（Version 12.0）進行，以估計自變量的響應值。應用 Box-Behnken 建立了三因素三水平的響應面優化試驗，結果見表2。用Design Expert 12.0 軟件擬合得到如下編碼值回歸方程：

表2 BBD 試驗設計及結果Table 2 Experimental design and results of BBD

方差分析結果如表3 所示。模型F=322.65（P＜0.001），表明該模型方程具有較高的精確度。失擬項通常用來表示所用的模型方程和實驗的擬合程度，即二者差異的程度，而回歸模型的失擬項F=5.11（P＞0.05），說明失擬項誤差不顯著，該響應面模型的誤差較小。模型的校正決定系數為R2adj=0.9945，決定系數R2=0.9976，表明該模型能較好地解釋響應值的變化，該模型能較好地描述各因素與響應值之間的真實關系。總的來說，該模型方程可以較好地預測蘿卜硫素得率。一次項A、B、C 對得率均具有極顯著的影響（P＜0.01）。二次項（A2、B2、C2）及交互作用項（AB、AC、BC）均極顯著（P＜0.01）。各因素的影響順序為：A（酶解時間）＞C（VC添加量）＞B（酶解溫度）。

表3 蘿卜籽蘿卜硫素得率回歸分析Table 3 Regression analysis of sulforaphane yield of Raphanus sativus seeds

2.3 響應面分析

響應面圖可以形象地反映工藝條件對響應值影響的交互作用，一般響應曲線越陡峭，因素的影響越顯著，而走勢越平滑，影響越小。由圖4 所示，得率曲線隨著各因素（酶解時間、酶解溫度、VC添加量）的變化規律相似，在這三個自變量取值接近0 編碼值時，得率值最大，但當各因素水平超過0 編碼值時，得率反而降低。適當的延長酶解時間和提高酶解溫度，有利于蘿卜籽中的GLS 向蘿卜硫素的酶解和轉換，但過高的時間和溫度可能導致芥子酶的損失，不利于GLS 的酶解[24]。VC能保護生成的蘿卜硫素，避免其氧化損失，提高蘿卜硫素得率[25]。而過多的VC可能改變提取體系的pH，從而導致得率降低，其影響規律有待于進一步研究。

圖4 各因素交互作用響應面圖與等高線圖Fig.4 Response surface and contour plots of the interactive effects of various factors

此外，各因素的響應面圖顏色由綠變紅，顏色變化差異較大，且存在最高點。各等高線圖的中心區域均呈橢圓形，以上結果表明各因素對蘿卜硫素得率的影響存在顯著的交互作用。其中，酶解時間與其他兩個因素的響應面圖中心區域呈現較為顯著的橢圓形，且交互項F值較高，表明交互作用較為明顯。郭彩慧等[26]研究發現，酶解時間與酶解溫度的交互作用對西蘭花蘿卜硫素提取量的影響較大。其機制有待于進一步研究。

2.4 驗證實驗

進一步通過回歸分析得到蘿卜硫素的理論最佳酶解工藝條件為：酶解時間21.59 min、酶解溫度為39.39 ℃、VC添加量為0.809 mg/g，蘿卜硫素得率為2.14 mg/g。考慮到實踐操作的可行性，將實際提取條件調整為酶解時間22 min、酶解溫度40 ℃、VC添加量為0.8 mg/g。平行3 次實驗驗證優化工藝的真實性，得到實際蘿卜硫素得率為2.11±0.02 mg/g，與理論值接近，相對誤差為1.40%，說明優化的酶解工藝準確可靠，對實際生產具有指導意義。

2.5 體外模擬胃腸消化中蘿卜硫素的變化

體外胃腸消化模型能反映生物活性物質在人體胃腸道消化過程中的生物利用情況，被廣泛應用于植物活性成分生物可及性研究[27]。本研究在最優酶解條件下制備蘿卜籽乙酸乙酯提取物，并采用體外消化模擬模型評價了胃腸消化對提取物中蘿卜硫素含量的影響。結果如圖5A 所示，未消化的提取物中蘿卜硫素含量為1.85±0.02 mg/g，經過體外消化實驗后，不可溶殘渣中的蘿卜硫素含量約為0.4 mg/g，而胃腸消化液中蘿卜硫素的含量分別1.47±0.05 和1.41±0.03 mg/g，保留率分別為79.64%±1.58%、76.22%±2.17%，差異不顯著（P＞0.05）（圖5B）。胃消化液及腸消化液中的蘿卜硫素含量差異不顯著（P＞0.05）。腸消化液中蘿卜硫素一般容易被機體吸收或被腸道菌群利用，該結果表明蘿卜籽蘿卜硫素有較好的生物可及性。以往類似研究也表明西蘭花籽蘿卜硫素經唾液及胃腸消化后，能有效到達腸道被腸道菌群利用，具有較好生物可及性[28]。此外，該結果還提示胃消化對提取物中蘿卜硫素的破壞較強，其可能原因與蘿卜硫素被胃酸及胃蛋白降解或轉化有關[29-30]。

圖5 蘿卜籽乙酸乙酯提取物在體外模擬胃腸消化中蘿卜硫素的變化Fig.5 Changes of sulforaphane in ethyl acetate extracts from Raphanus sativus seeds during different stages in vitro simulated digestion

2.6 體外模擬胃腸消化中抗氧化活性的變化

單一的抗氧化檢測方法無法充分評價物質抗氧化活性，一般使用多種抗氧化檢測方法共同解釋其抗氧化能力。因此，本研究采用體外胃腸消化模型，結合DPPH、ABTS+及OH 自由基清除實驗綜合檢測了提取物在模擬消化過程中的抗氧化活性變化規律，結果見圖6 所示，未消化組中，ABTS+、DPPH、OH 三種自由基清除率分別為64.80%、44.46%及20.63%，提取物對這三種自由基均表現出有一定的清除作用。以往研究已經證實了蘿卜硫素具有較強的自由基清除能力[31]，因此，推測蘿卜籽提取物的抗氧化活性與蘿卜硫素有關。在胃消化液中，這三種自由基清除率分別為54.25%、33.90%及15.07%，均顯著低于未消化組（P＜0.05），其中DPPH 自由基的清除率下降率最大，達到了23.75%。而在腸消化液中，三種自由基清除率分別降低至42.36%、32.70%及15.95%，與胃消化組比較，差異不顯著（P＞0.05）。胃腸消化過程中自由基清除率與蘿卜硫素含量的變化趨勢相符，進一步提示提取物抗氧性的變化與蘿卜硫素有關。但以往有研究表明蘿卜籽提取物中含有包括蘿卜硫素在內的多種抗氧化活性成分[32]，本研究蘿卜籽乙酸乙酯提取物中的蘿卜硫素含量僅約為1.85 mg/g，是一種混合組分，其表現的抗氧化活性是該體系中所有組分綜合作用的結果，尚不能闡明其中具體的活性組分及其作用機制，因此有必要對其進行進一步分離純化，對其抗氧化活性進行分析。

圖6 蘿卜籽乙酸乙酯提取物在體外模擬消化中DPPH、ABTS+和OH 自由基清除率變化Fig.6 DPPH,ABTS+ and OH free radical scavenging rate in ethyl acetate extracts from Raphanus sativus seeds during different stages in vitro simulated digestion

3 結論

制備蘿卜籽蘿卜硫素最優酶解工藝：酶解時間22 min，酶解溫度40 ℃，VC添加量0.8 mg/g，在此最佳酶解條件下，蘿卜硫素得率為2.11±0.02 mg/g。得到的二次回歸模型擬合度高。蘿卜籽乙酸乙酯提取物中蘿卜硫素成分在胃腸消化過程中出現一定程度的降解或轉化，但仍有約80%的該成分得到了保留。胃液消化對蘿卜硫素的影響高于腸液消化。三種自由基（ABTS+、DPPH、OH 自由基）清除率在胃腸消化過程中的變化與蘿卜硫素含量變化規律一致。本研究探索了酶法制備蘿卜籽蘿卜硫素的最優酶解工藝參數，建立的模型方程能可靠預測蘿卜硫素得率。蘿卜籽蘿卜硫素提取物經消化，蘿卜硫素釋放性較好，具有較好的生物可及性及抗氧化活性。本研究不僅對蘿卜硫素的實際生產具有一定的指導意義，同時也為提高蘿卜籽經濟附加值提供了一定的理論依據。

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