羊梭菌性疾病的流行病學特征及臨床診斷

戴 雪，張絮穎，李 欣，金 浩，郭 晨，李洪恩，吳佳琦，叢百明，王 梓★

（1.通遼市動物疫病預防控制中心 028000；2.通遼市農(nóng)牧科學研究所 028000；3.通遼市畜牧業(yè)發(fā)展中心 028000）

我國羊肉產(chǎn)量在2022 年達到525 萬t，比2021 年增加10 萬t，同比增長2.0%。在我國羊肉產(chǎn)量增長的同時，需求也在增加，目前我國已成為羊肉消費大國，2022 年我國羊肉消費量達527 萬t，較2021 年增長4.96%，是近三年來消費量增長較大的一年。我國羊肉需求量大于產(chǎn)量，需求缺口主要來自進口。羊梭菌性疾病以發(fā)病急、病程短、病死率高等特點對養(yǎng)羊業(yè)危害大、經(jīng)濟損失嚴重，限制了現(xiàn)代肉羊養(yǎng)殖業(yè)的快速健康發(fā)展，是羊養(yǎng)殖技術(shù)和疾病防治的重中之重。因此，對羊梭菌性疾病的深入了解、有效預防和準確治療非常必要。

1 常見病原

羊梭菌性疾病的病原為梭菌屬的桿菌。最常見的是產(chǎn)氣莢膜梭菌、腐敗梭菌及諾維氏梭菌。細菌形態(tài)、培養(yǎng)特性及染色特征是鑒定梭菌的重要指標之一。羊梭菌性疾病在世界各地都廣泛存在，尤其是養(yǎng)羊產(chǎn)業(yè)較為發(fā)達的國家。

1.1 產(chǎn)氣莢膜梭菌

產(chǎn)氣莢膜梭菌屬革蘭氏陽性厭氧產(chǎn)芽孢桿菌，是氣性壞疽病常見的病原菌?？梢鹑撕蛣游锏亩喾N疾病，也是常見的食源性病原菌之一。該菌常在氣候突變、突然更換飼料和轉(zhuǎn)群等應激條件下引起羊發(fā)病，是一種條件性致病菌。

產(chǎn)氣莢膜梭菌一般情況下單個或雙排分布，偶呈鏈狀，菌體兩端頓圓，無鞭毛，不能運動，大小為1.0～1.5 μm×4.0～8.0 μm。在特定培養(yǎng)條件下能形成橢圓形芽孢，芽孢直徑小于等于菌體，分布在菌體的近端或中央，在一般培養(yǎng)條件下不易形成芽孢[1]。產(chǎn)氣莢膜梭菌的莢膜可以在動物體內(nèi)形成，也可以在含有血清或糖的培養(yǎng)基上形成，在普通培養(yǎng)基上連續(xù)培養(yǎng)容易消失。與其他梭菌不同的是，產(chǎn)氣莢膜梭菌在體內(nèi)形成莢膜的同時可以釋放毒素[2]。

產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種對培養(yǎng)基的營養(yǎng)要求不高的溫和專性厭氧菌，在培養(yǎng)液中添加葡萄糖和血液，有助于產(chǎn)氣莢膜梭菌的生長和繁殖。大部分產(chǎn)氣莢膜梭菌的可生長的溫度在20～50℃，最適宜生長的溫度在不同類型的產(chǎn)氣莢膜梭菌中存在一定的差異。產(chǎn)氣莢膜梭菌增殖極快，在具備適宜的生長條件的情況下，僅需8 min 左右即可完成增代。氣莢膜梭菌根據(jù)產(chǎn)生毒素的種類和致病性的不同，有A，B，C，D，E，F(xiàn) 六種類型[3]。能產(chǎn)生卵磷脂酶，纖維蛋白酶，透明質(zhì)酸酶，膠原酶等約18種具有毒性作用的酶和毒素。莢膜、外毒素、侵襲性酶，使產(chǎn)氣莢膜梭菌具有極強的侵襲性?！皼坝堪l(fā)酵”是本菌的生化特征之一，表現(xiàn)為分解牛乳培養(yǎng)基中的乳糖，使牛乳中酪蛋白凝固的同時，產(chǎn)生大量氣體，沖擊乳凝塊，使凝塊碎裂，呈爆裂發(fā)酵狀，是鑒別本菌的一項重要指標。

1.2 腐敗梭菌

腐敗梭菌是一種引起羊快疫的主要病原菌，腐敗梭菌與其他梭菌一樣，存在于被污染的飼料、飲水、糞便、煙塵以及自然環(huán)境中。腐敗梭菌是一種兩端鈍圓，能形成芽孢，但無莢膜，有鞭毛，能運動的革蘭氏陽性粗大桿菌，且具有嚴格的厭氧性。卵圓形的芽孢位于菌體中央或近端。腐敗梭菌單個菌體呈長桿型，大小為0.6～0.8 μm×2.0～4.0 μm。通常3 個左右的菌體聚集時會首尾相連，多個菌體聚集時會呈現(xiàn)絲狀，這種狀態(tài)下的腐敗梭菌，經(jīng)革蘭氏染色顯現(xiàn)出的陽性并不明顯。在病變滲出液的觸片中，該菌呈長絲狀或長鏈狀，這是本菌具有重要診斷意義的一個形態(tài)學特征。在肝片肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)37℃培養(yǎng)6 h，培養(yǎng)基變混濁，并有氣體產(chǎn)生，繼續(xù)培養(yǎng)到48 h，菌體將肉眼可見的下沉于管底。腐敗梭菌的芽孢在腐敗的尸體中可存活3 個月，自然環(huán)境的土壤中可存活20～25 年。使用1.05%～1.2%的甲醛溶液處理10 min 可殺滅芽孢，一般消毒藥短時間可殺死繁殖體。

該菌能產(chǎn)生四種外毒素分別是：α、β、γ、δ。α毒素的本質(zhì)是卵磷脂酶，作用是溶血導致組織壞死進而引發(fā)動物死亡；β毒素的本質(zhì)是脫氧核糖核酸酶，具有殺白細胞的作用；γ毒素是一種透明質(zhì)酸酶、δ毒素是一種溶血素[4]。γ毒素和δ毒素都能破壞毛細血管壁，提高其通透性，最終導致肌肉組織壞死。腐敗梭菌的毒素相關(guān)研究，目前國內(nèi)外都在持續(xù)深入地開展，但在毒素的致病機理方面，還有待加強。

1.3 諾維氏梭菌

諾維氏梭菌是一種嚴格厭氧的粗大桿菌，即使有微量氧氣存在也會抑制其生長，對培養(yǎng)條件比較苛刻。在自然界，尤其是土壤中廣泛存在。飼草料和水源被其芽孢污染后，羊采食被污染的飼草或飲水，導致芽孢進入機體，由消化道途徑進入肝臟引起動物發(fā)病。

諾維氏梭菌為大型芽孢桿菌，粗細基本一致，菌體兩端鈍圓，無莢膜，具有鞭毛，能運動。尺寸為1.2～2.0 μm×4.0～20.0 μm，革蘭氏染色為陽性。多單在，有時成雙或呈短鏈存在，易在菌體近端或中央形成芽孢，芽孢呈卵圓形的空泡狀[5]。芽孢抗性強，95℃時多數(shù)芽孢可存活15 min。在厭氧肉肝湯中培養(yǎng)，能產(chǎn)生腐爛蔥味臭氣。菌體最適生長溫度為45℃，37℃生長表現(xiàn)為良好，25℃時表現(xiàn)為微弱生長或不生長。

關(guān)于諾維氏梭菌的分型，目前主要存在兩種觀點，一種是按諾維氏梭菌分泌的毒素類型分為四種型：A型、B 型、C 型和D 型。另一種觀點則認為諾維氏梭菌分為A、B、C 三個型，而D 型諾維氏梭菌應稱為溶血梭菌。B 型諾維氏梭菌是導致羊黑疫的主要病原菌，能產(chǎn)生五種外毒素，分別是α、β、η、ξ、θ。α毒素是一種可致死的水腫活性蛋白，在體外可破壞細胞骨架，引起細胞形態(tài)的顯著變化[6]。

2 流行病學特征

2.1 羔羊痢疾

由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起。主要危害1 周齡以內(nèi)的綿羊羔，較大月齡的比較少見。可通過臍帶斷裂處傷口或是其他外傷感染，但主要的傳播途徑是經(jīng)口采食受污染的水或飼料，經(jīng)消化道感染。產(chǎn)羔季節(jié)過于寒冷或炎熱、產(chǎn)房不經(jīng)常消毒等環(huán)境因素，母羊營養(yǎng)不良，均有利于本病的發(fā)生。純種細毛羊和改良羊由于適應性較本地土種羊差，羔羊的發(fā)病率和死亡率都較本地土種羊高。

2.2 羊猝疽

由C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起。主要侵害6 月齡至2歲的綿羊，成年羊較幼齡羊發(fā)病多。本病多發(fā)在地處低洼易積水的牧場或是位于濕地的牧場，散發(fā)或呈地方流行性。初春、秋季、冬季是本病的長發(fā)季節(jié)。食入帶雪水的牧草或寄生蟲感染等均是本病的誘因。

2.3 羊腸毒血癥

由D 型產(chǎn)氣莢膜梭菌（魏氏梭菌）引起。多發(fā)生于成年綿羊或羔羊，山羊較少發(fā)生，一般以2 歲以下的幼齡羊較為常見，春末夏初或秋末冬初飼料改變時本病易發(fā)生，但多為散發(fā)。本病發(fā)生后，可在羊群中流行1～2個月。發(fā)病初始來勢洶洶，但反復發(fā)生幾次疫情后，會逐漸趨于平緩，直至平息。

2.4 羊快疫

主要病原菌是腐敗梭菌。大部分反芻動物如山羊、綿羊、鹿等都可以感染腐敗梭菌。6～18 月齡的綿羊最易感，致死率高于50%，危害性很大。羊快疫在我國很多地區(qū)均有發(fā)生，特別是以養(yǎng)羊業(yè)為主的地區(qū)。消化道是本病的主要傳播途徑。

2.5 羊黑疫

由B 型諾維氏梭菌引起，以2～4 歲的綿羊最多發(fā)，山羊也可感染。本病主要發(fā)生在低洼、潮濕的放牧牧場，特別是肝片吸蟲流行的春、夏季節(jié)。諾維氏菌可以芽孢形式潛伏在羊的肝、脾等器官內(nèi)，肝片吸蟲或其他原因引起肝臟損傷后，滯留在此的芽孢獲得適宜條件即大量繁殖，產(chǎn)生毒素而引起羊發(fā)病。

3 臨床癥狀及病理變化

3.1 羔羊痢疾

自然環(huán)境條件下感染的羔羊，多數(shù)表現(xiàn)為急性或亞急性。潛伏期一般為24～48 h，最初表現(xiàn)的癥狀是發(fā)病羔羊精神低沉、不吃飼料、行走時弓背、喜臥，持續(xù)性腹瀉，大便黃色水樣，有時還伴有血絲。病理解剖可發(fā)現(xiàn)肛門周圍被稀便污染，尸體脫水嚴重。小腸尤其是回腸呈出血性腸炎變化，有的腸內(nèi)充滿血樣物，真胃內(nèi)有未消化的凝乳塊。病程稍長時，解剖小腸或結(jié)腸可發(fā)現(xiàn)其表面黏膜出現(xiàn)潰瘍灶，多在1～2 mm 間，腸系膜淋巴結(jié)腫大、充血。

3.2 羊猝疽

一般在無先兆的情況下忽然發(fā)病，發(fā)病的3～6 h內(nèi)便死亡。患病羊在發(fā)病初期幾乎沒有明顯癥狀，個別的病例能看到突然倒地，身體抽搐，牙齒緊咬，眼球突出，不久后便死亡。對死亡羊進行解剖，可發(fā)現(xiàn)小腸黏膜呈節(jié)段性或全部出現(xiàn)出血、腫脹，有些病例的小腸病變可延伸至黏膜肌層，導致腸壁出現(xiàn)糜爛和潰瘍。因為細菌及毒素進入消化道后，經(jīng)腸壁進入血液，隨血液流動，使胸、腹腔臟器的微血管受到損傷，發(fā)生怒張、通透性增加，胸腔、腹腔與心包腔內(nèi)滲出大量液體。腎腫大但不軟。死后8 h 內(nèi)，病菌在肌肉和其他器官繼續(xù)繁殖、并引起變化，故尸體剖檢延遲，可在骨骼肌中見到氣腫樣病變。

3.3 羊腸毒血癥

突然發(fā)生、不久便死亡，很難見到癥狀，或剛察覺癥狀后便死亡。發(fā)病后的羊通常在2～4 h 內(nèi)死亡，病羊死前初期表現(xiàn)的癥狀主要是呼吸急促、全身肌肉抖動、走路不穩(wěn)，倒地后便無法起身，身體左右翻滾，頭頸伸直，腹部緊縮，抽搐的同時鼻孔流出白色泡沫，可視黏膜發(fā)白，觸摸四肢和耳尖皮膚發(fā)涼，隨后便昏迷，最終死亡[7]。一般情況下體溫不升高，但病死率非常高。病變主要發(fā)生在腎臟，表現(xiàn)為腎臟變軟，摸起來手感像泥巴。心包腔、腹腔、胸腔內(nèi)有積水。心臟的內(nèi)膜和外膜上均可發(fā)現(xiàn)出血點，心臟向外擴張。小腸表面黏膜有輕微的滲出性炎癥。眼觀可見腦組織中的液化性壞死灶。

3.4 羊快疫

發(fā)病突然，未出現(xiàn)明顯臨床癥狀便死亡。有些病羊在死亡前表現(xiàn)出虛弱、不肯進食、離群、不愿行走，嘴角流出帶血的泡沫。有些病羊死亡前癥狀更明顯些，表現(xiàn)為眼結(jié)膜發(fā)紅、磨牙、發(fā)出呻吟聲，排便痛苦，有時大便呈黑色，糞便中混有血液、黏液及脫落的腸黏膜。這些癥狀出現(xiàn)后，幾小時甚至幾分鐘后，患病羊便死亡[8]。病理變化為真胃黏膜充血，并出現(xiàn)明顯出血斑塊，黏膜下層腫脹，有時可見胃底部黏膜出現(xiàn)潰瘍和壞死。腸道內(nèi)充滿氣體，腸黏膜也可見出血點。若尸體未及時剖檢，會迅速的發(fā)生腐敗，鏡檢時可在真胃和腸黏膜中發(fā)現(xiàn)大量氣泡。

3.5 羊黑疫

羊腸毒血、羊快疫與羊黑疫的臨床癥狀相似度極高。病程都很短，幾乎都是在沒有任何臨床表現(xiàn)的情況下忽然死亡，部分病例1～2 d 死亡。病羊表現(xiàn)為精神頹廢，不喜進食，反芻減少或停止，遠離羊群，忽然倒地昏迷，不久后死亡。病理解剖后可觀察到皮膚發(fā)黑，皮下瘀血的特征較為明顯。肝臟表面凹凸不平，分布很多壞死灶，大小不超過3 cm。

4 診斷與防治

診斷羊梭菌性疾病在病原、流行病學、癥狀和病理變化等方面頗易混淆。動物發(fā)病月齡、特征性病變、流行病學特點等，有助于做出初步診斷，確診可依賴于病原分離和毒素中和試驗。諾維氏梭菌可以檢測外毒素，用卵磷脂酶試驗，檢出率和特異性均較高。檢測腐敗梭菌，應在動物死后1 h 內(nèi)取心血或臟器制成乳劑，離心，取上清肌內(nèi)注射小鼠，可在24 h 內(nèi)引起小鼠死亡。及時取樣進行細菌分離、鑒定，可獲得較好結(jié)果。若在小鼠肝被膜觸片中見到呈無關(guān)節(jié)絲狀的細菌，則對確診羊快疫有重要參考價值。

羊梭菌性疾病發(fā)病突然，很難見到明顯臨床癥狀，即因梭菌毒素中毒而亡。因此，幾乎沒有治療的時間，即便快速發(fā)現(xiàn)后治療效果也多不滿意。在發(fā)病初期，用抗毒素血清可能有一定療效。在本病常發(fā)地區(qū)，每年可定期注射1～2 次二聯(lián)苗（羊快疫、羊猝疽）或三聯(lián)苗（羊快疫、羊猝疽、羊腸毒血癥）。一旦發(fā)生本病，要迅速將羊群轉(zhuǎn)移到干燥牧場，減少青飼料飼喂量，増加粗飼料，并及時隔離病羊，抓緊治療。做好肝片吸蟲的驅(qū)蟲工作，有利于控制羊黑疫的發(fā)生[9]。同時要做好消毒，對病死羊及時焚燒處理或深埋，以防病原擴散，導致更嚴重的經(jīng)濟損失。