外周血液中脂筏標(biāo)記蛋白表達(dá)水平與重性抑郁障礙全病程相關(guān)性的研究

陳曉昕 王 巍 紀(jì)家武 張清如

1.福建省福州神經(jīng)精神病防治院精神三科，福建福州 350007；2.福建省福州神經(jīng)精神病防治院兒童老年科，福建福州 350007；3.福建省福州神經(jīng)精神病防治院院長辦公室，福建福州 350007；4.福建省福州神經(jīng)精神病防治院精神二科，福建福州 350007

重性抑郁障礙（major depressive disorder，MDD）以情緒或心境低落為主要表現(xiàn)，患者可能伴有不同程度的認(rèn)知和行為改變或幻覺、妄想等精神病性癥狀，但不能歸因于某種生理效應(yīng)或其他疾病[1]。生物標(biāo)志物是一種客觀可測量的生物學(xué)特征，可與一種或多種疾病相聯(lián)系。一項(xiàng)新的研究集中在一種快速、客觀的方法來診斷抑郁癥和測量抗抑郁藥物對個體的有效性，這一發(fā)現(xiàn)與脂筏中一種關(guān)鍵蛋白的捕獲有關(guān)，這種蛋白質(zhì)通常發(fā)生在抑郁癥患者中[2]。脂筏標(biāo)記蛋白（lipid rafts marker protein flotillin，F(xiàn)LOT）1是細(xì)胞膜上一類高度保守的FLOT[3]。本研究選取100例MDD患者為試驗(yàn)組，在MDD的不同時期（急性期、鞏固期、穩(wěn)定期）分別采取患者的外周血樣本檢測FLOT1的表達(dá)水平，并以漢密頓抑郁量表-17（Hamilton depression scale-17，HAMD-17）評估患者M(jìn)DD的程度，尋找FLOT1表達(dá)水平與MDD全病程之間的關(guān)聯(lián)，并選取50名健康體檢者為對照組。檢驗(yàn)經(jīng)過規(guī)范化的抗抑郁治療過程中（急性期、鞏固期、穩(wěn)定期）FLOT1表達(dá)水平的變化，并探討MDD全病程中FLOT1表達(dá)水平變化規(guī)律。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取福建省福州神經(jīng)精神病防治院（本院）2022年9月至2023年8月收治的100例MDD患者為試驗(yàn)組，其中男42例，女58例，平均年齡（38.26±9.52）歲，病程1.3個月至20年，平均（3.24±1.05）年。以同期50名健康體檢者為對照組，男20例，女30例，平均年齡（37.98±9.24）歲。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05），具有可比性。所有患者及家屬均知情同意本研究，且本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

將美國精神疾病協(xié)會的《精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊》第五版（diagnostic and statistical manual of mental disorders-5，DSM-5）作為診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：MDD患者必須在兩周內(nèi)持續(xù)出現(xiàn)至少以下5種癥狀：①情緒抑郁；②失去興趣或愉悅；③明顯的體重變化；④失眠；⑤精神運(yùn)動性激動或遲鈍；⑥低能量或乏力；⑦毫無價值的感覺；⑧思維和注意力的困難；⑨反復(fù)想到死亡。

1.3 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：試驗(yàn)組患者均符合DSM-5中關(guān)于MDD的診斷標(biāo)準(zhǔn)；試驗(yàn)前所有患者均未使用抗抑郁藥或停止使用抑郁藥≥8周；HAMD-17評分≥24分。

排除標(biāo)準(zhǔn)：MDD外的DSM-5軸Ⅰ診斷；存在重大軀體疾病（神經(jīng)系統(tǒng)疾病、糖尿病等）；妊娠期或哺乳期婦女。

1.4 方法

根據(jù)患者治療全病程分為急性期、鞏固期、穩(wěn)定期3個時間段，分別采取不同時期（急性期、鞏固期、穩(wěn)定期）MDD患者及對照組的外周血樣本，采用實(shí)時熒光定量PCR（realtime fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）法測定外周血單核細(xì)胞FLOT1表達(dá)水平。

使用乙二胺四乙酸抗凝管分別采集試驗(yàn)組急性期、鞏固期、穩(wěn)定期及對照組全血各5 ml，并在2 h內(nèi)處理。qRT-PCR用TaqMan MicroRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒從外周血細(xì)胞中提取RNA，并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。mRNA生成cDNA時，RNA序列充當(dāng)逆轉(zhuǎn)錄酶的模板。得到的單鏈DNA然后用作PCR的模板。使用qRT-PCR技術(shù)，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至合成新的DNA，重復(fù)，即可使目的DNA片段得以擴(kuò)增，用以檢測FLOT1的表達(dá)水平。

1.5 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

檢驗(yàn)規(guī)范化的抗抑郁治療過程中（急性期、鞏固期、穩(wěn)定期）FLOT1表達(dá)水平的變化，并尋求在MDD全病程中FLOT1表達(dá)水平變化規(guī)律。觀察FLOT1表達(dá)水平是否能作為MDD發(fā)病的標(biāo)志物；FLOT1表達(dá)水平與MDD全病程的相關(guān)性，以及是否能起到預(yù)測MDD復(fù)發(fā)與難治性MDD的作用。

采用HAMD-17評分量表對不同時期試驗(yàn)組的抑郁情緒進(jìn)行評估，得分越低代表病情越輕。

分析FLOT1表達(dá)水平變化與生活事件（主要為負(fù)性事件）的相關(guān)性，引入生活事件量表（life event scale，LES），參照張明園等[5]文獻(xiàn)。負(fù)性事件刺激量等于全部壞事刺激量之和，生活事件應(yīng)激項(xiàng)目內(nèi)容共48條，包括3個方面（家庭生活28條、工作學(xué)習(xí)13條、社交及其他7條），采用0～4分五級評分，生活事件應(yīng)激總分越高表示承受的精神壓力越大。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS 26.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，三組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman分析，P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)組治療前后FLOT1表達(dá)水平比較

與治療前[（3.04±0.42）2-△△Ct]相比，試驗(yàn)組治療后的FLOT1 mRNA相對表達(dá)量[（1.56±0.35）2-△△Ct]明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=9.015，P=0.000）。

2.2 試驗(yàn)組不同時期及對照組外周血的FLOT1 mRNA相對表達(dá)量比較

與對照組比較，試驗(yàn)組FLOT1 mRNA相對表達(dá)量明顯升高（t=8.294，P=0.003）。對于試驗(yàn)組，急性期的FLOT1 mRNA相對表達(dá)量明顯高于鞏固期與穩(wěn)定期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=10.467，P=0.000）；鞏固期與穩(wěn)定期FLOT1 mRNA相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05）。見表1。

表1 試驗(yàn)組不同時期及對照組外周血的FLOT1 mRNA相對表達(dá)量比較（2-△△Ct，）

表1 試驗(yàn)組不同時期及對照組外周血的FLOT1 mRNA相對表達(dá)量比較（2-△△Ct，）

注 FLOT1：脂筏標(biāo)記蛋白1

組別nFLOT1 mRNA試驗(yàn)組1002.49±0.45試驗(yàn)組急性期1003.12±0.47試驗(yàn)組鞏固期1001.54±0.32試驗(yàn)組穩(wěn)定期1001.52±0.29對照組500.91±0.08 t試驗(yàn)組與對照組比較值8.294 P試驗(yàn)組與對照組比較值0.003 t試驗(yàn)組急性期與鞏固期比較值9.673 P試驗(yàn)組急性期與鞏固期比較值0.000 t試驗(yàn)組急性期與穩(wěn)定期比較值9.803 P試驗(yàn)組急性期與穩(wěn)定期比較值0.000 t試驗(yàn)組鞏固期與穩(wěn)定期比較值1.075 P試驗(yàn)組鞏固期與穩(wěn)定期比較值0.682

2.3 試驗(yàn)組不同時期的HAMD評分比較

試驗(yàn)組患者急性期、鞏固期、穩(wěn)定期的HAMD評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=18.592，P=0.000）。與穩(wěn)定期、鞏固期比較，急性期HAMD評分升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）；穩(wěn)定期與鞏固期比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05）。見表2。

表2 試驗(yàn)組不同時期的HAMD評分比較（分，）

表2 試驗(yàn)組不同時期的HAMD評分比較（分，）

注 HAMD-17：漢密頓抑郁量表-17

時期nHAMD-17評分急性期10040.29±4.92鞏固期10020.36±3.05穩(wěn)定期10018.58±2.75 t急性期與鞏固期比較值12.385 P急性期與鞏固期比較值0.000 t急性期與穩(wěn)定期比較值12.971 P急性期與穩(wěn)定期比較值0.000 t鞏固期與穩(wěn)定期比較值1.843 P鞏固期與穩(wěn)定期比較值0.512

2.4 兩組負(fù)性事件刺激量及生活事件應(yīng)激總分比較

試驗(yàn)組負(fù)性事件刺激量、生活事件應(yīng)激總分均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05），見表3。

表3 兩組負(fù)性事件刺激量及生活事件應(yīng)激總分比較（分，）

表3 兩組負(fù)性事件刺激量及生活事件應(yīng)激總分比較（分，）

組別n負(fù)性事件刺激量生活事件應(yīng)激總分試驗(yàn)組100172.24±24.25180.35±35.64對照組5010.31±3.1214.64±4.31 t值7.29310.264 P值0.0080.000

2.5 FLOT1表達(dá)水平與MDD全病程、生活事件應(yīng)激總分的相關(guān)性分析

Spearman分析結(jié)果顯示，F(xiàn)LOT1 mRNA相對表達(dá)量與MDD患者急性期、鞏固期、穩(wěn)定期的HAMD-17評分呈正相關(guān)（P＜ 0.05），急性期FLOT1 mRNA相對表達(dá)量偏高，且與MDD患者的HAMD-17評分呈正相關(guān)（P＜ 0.05）。FLOT1 mRNA相對表達(dá)量與負(fù)性事件刺激量、生活事件應(yīng)激總分呈正相關(guān)，MDD患者FLOT1 mRNA相對表達(dá)量增加，負(fù)性事件刺激量及生活事件應(yīng)激總分也相應(yīng)升高（P＜ 0.05）。見表4。

表4 FLOT1表達(dá)水平與MDD全病程的相關(guān)性分析

3 討論

MDD是一種常見的精神障礙，病因復(fù)雜。作為最普遍的精神障礙，MDD是造成全球殘疾類疾病的主要原因，也是造成全球疾病負(fù)擔(dān)的主要因素[6-7]。MDD的病因仍然未知，并且仍無法準(zhǔn)確預(yù)測MDD的發(fā)病風(fēng)險以及療效，國內(nèi)鮮有關(guān)于MDD治療效果和復(fù)發(fā)風(fēng)險可靠的、客觀的生物學(xué)標(biāo)志物的研究[8-9]。MDD一般包括急性期、鞏固期、穩(wěn)定期3個階段。急性期的抑郁癥會出現(xiàn)較明顯的抑郁傾向，治療周期一般為2～3個月，需要在這一時間內(nèi)盡快控制抑郁癥的癥狀[10]。鞏固期可能維持4～9個月，受患者的病情程度影響，期間內(nèi)患者的病情不穩(wěn)定，容易復(fù)發(fā)。應(yīng)保持急性期的治療方案，并根據(jù)患者的表現(xiàn)及時調(diào)整用藥和藥量。穩(wěn)定期前規(guī)范的治療可以降低復(fù)發(fā)率，一般需要2～3年[11-12]。此時如果去除誘發(fā)疾病的原因，可以在醫(yī)生指導(dǎo)下緩慢減藥，甚至停藥。一旦發(fā)現(xiàn)有急性期癥狀應(yīng)該遵照恢復(fù)治療。

FLOT廣泛存在于體內(nèi)不同的組織和細(xì)胞，由FLOT1和FLOT2組成[13]。FLOT1是FLOT主要組成部分，其編碼基因位于染色體6p21.3區(qū)段，基因全長15 kb，含13個外顯子和12個內(nèi)含子，編碼427個氨基酸組成分子質(zhì)量為48 kd的蛋白質(zhì)。近來研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)LOT1表達(dá)的增高與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[14]。現(xiàn)有研究[15]表明FLOT1在不同惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的作用不同，現(xiàn)有研究多是證明FLOT1在腫瘤細(xì)胞或組織中表達(dá)水平的變化，但并未證明FLOT1是否能作為有效的生物標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，試驗(yàn)組FLOT1 mRNA相對表達(dá)量明顯升高；對于試驗(yàn)組，急性期的FLOT1 mRNA相對表達(dá)量明顯高于鞏固期與穩(wěn)定期；Spearman分析結(jié)果顯示，F(xiàn)LOT1 mRNA相對表達(dá)量與MDD患者的急性期、鞏固期、穩(wěn)定期呈正相關(guān)，急性期的FLOT1 mRNA相對表達(dá)量偏高，且與MDD患者的HAMD-17評分呈正相關(guān)。因此，外周血液中FLOT1表達(dá)水平與MDD全病程有相關(guān)性，可能是MDD發(fā)病的一種生物學(xué)標(biāo)志物。但由于本研究時間限制，對穩(wěn)定期的MDD患者觀察的參數(shù)還不夠嚴(yán)謹(jǐn)，需在后期研究中加長研究時間，以期得到更有說服力的臨床支撐數(shù)據(jù)。