胸水細胞蠟塊與免疫組化對肺癌的診斷敏感性分析

郭娟，徐顯輝

廈門醫學院附屬第二醫院，廈門 361000

肺癌的發生與多種因素密切相關，其中已經被臨床研究證實的危險因素主要包括以下幾種：一是吸煙，臨床研究指出長期吸煙會使肺癌發生風險提高數十倍，同時還會明顯增加發病后患者死亡風險；二是空氣污染，燃燒、工業生產等產生的氣體均可能誘發肺癌；三是職業接觸，一些特殊崗位在工作中經常接觸氡氣、煤焦油等物質可能誘發肺癌；四是電離輻射，其造成的肺損傷可能誘發癌變；五是遺傳基因，該因素也與肺癌的發生存在聯系。50%左右的肺癌患者就診時已經出現不同程度的胸腔積液癥狀[1]，此時采用手術治療已經難以將癌灶完全切除，患者預后普遍較差，因此及時而準確的診斷肺癌至關重要[2]。細胞學標本是臨床診斷肺癌的關鍵，目前臨床上常用的細胞學標本包括胸水、痰液等，但該技術尚未完全成熟，在實際應用中其診斷準確性并不穩定[3]。基于此，本研究分析聯用胸水細胞蠟塊與免疫組化技術對肺癌的診斷效能。

1 對象與方法

1.1 研究對象 納入2020 年1 月至2023 年1 月廈門醫學院附屬第二醫院收治的126 例疑似肺癌患者，經病理檢查105 例確診肺癌，21 例確診肺良性病變。患者年齡29～84 歲，平均（58.02±9.73）歲；男、女例數分別為85、41 例；BMI 19～29 kg/m2，平均（22.78±2.21）kg/m2。納入標準：①已簽署知情同意書；②能夠配合臨床檢查。排除標準：①合并其他惡性腫瘤者；②合并其他嚴重呼吸系統疾病者；③臨床資料缺失者。本研究符合醫學倫理規范。

1.2 方法 薄層液基細胞學檢查：采集100 ml 胸水標本與保存液混合均勻，將其中50 ml 進行離心處理（1500 r/min，5 min），完成后將上清液去除，并取5 ml 細胞固定液加入其中混合均勻，再次進行離心處理（1500 r/min，5 min），完成后將上清液去除，并取1 ml 緩沖液加入其中混合均勻，在沉降倉內放置800 μL 靜置，時間設定為20 min。之后將沉降液去除，取沖洗液、緩沖液各1 ml先后加入其中進行沖洗處理，蘇木素染色后靜置，時間設定為90 s，再次取沖洗液、緩沖液各1 ml 先后加入其中進行沖洗處理，隨后行伊紅染色處理，時間設定為10 s，隨后連續進行2 次沖洗，將玻片取出，分別用乙醇、二甲苯進行脫水與透明處理后封片。

胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查：將上述檢查完成后剩余的50 ml 胸水樣本與保存液充分混合均勻，在4℃環境下靜置一段時間，監測細胞沉淀情況，待其完全沉淀即可，將上清液去除，進行離心處理（2000 r/min，5 min），取5 ml 福爾馬林溶液與離心處理后的沉淀物混合均勻，再次進行離心處理（2000 r/min，5 min），完成后將沉淀物取出，用95%乙醇進行脫水處理，再次進行離心處理（2000 r/min，5 min），用擦鏡紙妥善包裹后，進行脫水處理，隨后包埋、切片。細胞蠟塊的免疫組化染色操作采用MaxVision 二步法，之后將蠟塊 切成蠟片，厚度為3 μm，裱片使用防脫玻片，隨后分別用二甲苯與常規梯度乙醇進行脫蠟、水化處理，完成后進行高壓修復，于3% H2O2室溫下靜置，時間為10 min，之后一抗、二抗在37℃環境下分別孵育60 min、15 min，行DAB 顯色，時間設定為10 min，通過流水持續沖洗使染色終止，隨后蘇木素染色、PBS 返藍，分別用乙醇、二甲苯進行脫水與透明處理后封片。

1.3 觀察指標 以病理檢查結果作為金標準，評估薄層液基細胞學檢查、胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查診斷肺癌的檢出率。

1.4 統計學方法 使用SPSS 27.0 軟件處理數據，計量資料符合正態分布以表示行t檢驗，計數資料以n（%）表示行χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 薄層液基細胞學檢查診斷肺癌的效能分析 薄層液基細胞學檢查結果顯示，93 例為惡性，占比73.81%；33 例為良性，占比26.19%。以病理檢查結果為金標準，則薄層液基細胞學檢查的靈敏度為80.95%（85/105），特異度為61.90%（13/21），準確度為77.78%（98/126），陽性預測值為91.40%（85/93），陰性預測值為39.39%（13/33），見表1。

表1 薄層液基細胞學檢查診斷肺癌的結果（例）

2.2 胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查診斷肺癌的效能分析 胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查結果顯示，103 例為惡性，占比81.75%；23 例為良性，占比18.25%。以病理檢查結果為金標準，則胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查的靈敏度為96.19%（101/105），特異度為90.48%（19/21），準確度為95.24%（120/126），陽性預測值為98.06%（101/103），陰性預測值為82.61%（19/23），見表2。

表2 胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查診斷肺癌的結果（例）

2.3 不同檢查方法診斷肺癌的效能比較 相較薄層液基細胞學檢查，胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查靈敏度（P＜0.001）、特異度（P=0.030）、準確度（P＜0.001）及陰性預測值（P＜0.001）均更高，陽性預測值組間無統計學差異（P=0.073）。

2.4 胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查對肺癌不同分型的檢出率分析 胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查診斷腺癌的檢出率為96.00%（72/74），診斷鱗癌的檢出率為90.00%（18/20），診斷鱗腺癌的檢出率為75.00%（6/8），診斷未分化癌的檢出率為0，診斷肺癌不同分型的整體檢出率為91.43%（96/105），見表3。

表3 胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查對肺癌不同分型的檢出率分析

3 討論

胸腔積液是晚期肺癌的典型癥狀之一，臨床上通過影像學技術對患者漿膜腔積液進行觀察時會受到積液的嚴重干擾，在這種情況下很難對腫瘤病灶進行準確觀察，并且獲取腫瘤組織標本的途徑有限，主要通過采集漿膜腔積液進行病理學檢查，以此明確是否為惡性病變[4]。液基細胞學檢查在臨床上有較長的應用歷史，近年來在漿膜腔積液檢測中也開始逐漸推廣[5]。薄層液基細胞學檢查相比普通涂片，其優勢主要體現在涂片厚度較薄且均勻，能夠清晰觀察細胞各部分結構，特別是背景比較干凈，能夠對細胞各部分情況進行三維立體觀察，因此能夠較好的診斷肺癌[6]。但在實際應用中發現該檢查方式由于自身特點的限制，缺乏較高的敏感性與特異性，主要是因為采用該方式制備細胞時會影響原來的細胞排列方式，并且會失去背景細胞，受此影響導致其難以準確鑒別包括未分化癌在內的一些惡性病；同時其缺乏較高的免疫組化染色率，并且標本保存時間也較短[7]。

改良細胞蠟塊技術是通過去除經離心處理后富集標本中的血細胞，在此基礎上分別以不同的溶液固定，主要為福爾馬林、乙醇，完成以上步驟后進行脫水處理，以石蠟包埋制片。與常規薄層液基細胞學檢查相比，細胞蠟塊與免疫組化檢查的優勢主要在于，進行固定處理時所使用的福爾馬林、乙醇與一般固定液相比，能夠獲得更好的細胞形態固定效果，對細胞不同部位的結構進行更加清晰地顯示，同時還能夠維持松散細胞避免其過度散開，可有效固定細胞核結構，并保留細胞中大部分抗原活性，其制片效果更加接近于組織學樣本[8]。在本研究中，胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查靈敏度、特異度、準確度及陰性預測值較薄層液基細胞學檢查均更高（P＜0.05），且對不同分型的肺癌整體診斷準確率達到91.43%，提示胸水細胞蠟塊與免疫組化檢查診斷肺癌的效能更高，且能夠有效辨別不同類型的肺癌病變。在實際臨床檢查工作中聯用液基細胞學檢查與細胞蠟塊技術，可取長補短解決單項檢查存在的缺陷和不足，能夠使診斷效能進一步提高，同時還能夠指導腫瘤的組織學分型，并為患者的臨床治療提供依據[9]。常規細胞學檢查對于存在胸腔積液癥狀的晚期肺癌患者，一般只能夠明確其是否為惡性病變，而無法確定原發病灶。而細胞蠟塊切片能夠反復切片，可在其他檢查中發揮輔助診斷作用，且能夠利用其提供的信息幫助尋找原發病灶，同時可通過明確組織分型，為臨床分子靶向治療提供指導，對于難以獲取組織標本的晚期肺癌患者采用該檢查方式具有多方面的優勢[10]。

綜上所述，胸水細胞蠟塊與免疫組化診斷肺癌的敏感性與特異性較高，且對不同類型肺癌能夠進行有效診斷，具有較高的準確率。但本研究也存在自身局限性，主要在于觀察時段和病例數有限，因而所得結論的代表性有待于進一步的大樣本驗證分析。