富血小板血漿制備套裝研究進(jìn)展及審評思考

朱俊泰 葉成紅 國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心 （北京 100081）

內(nèi)容提要： 通過文獻(xiàn)檢索的方式收集關(guān)于富血小板血漿制備套裝的相關(guān)研究和應(yīng)用的文章，探討富血小板血漿制備套裝的研究進(jìn)展及審評思考。檢索文獻(xiàn)內(nèi)容范圍包括臨床試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)室研究和技術(shù)評估。文獻(xiàn)綜合整理結(jié)果顯示，富血小板血漿制備套裝在臨床取得了顯著的進(jìn)展，產(chǎn)品具有操作簡單、安全性較高的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)，產(chǎn)品的應(yīng)用也存在質(zhì)量差別較大、評價(jià)方法未統(tǒng)一、臨床應(yīng)用較窄等問題。富血小板血漿制備套裝作為一種具有廣泛應(yīng)用前景的制備方法，通過深入研究和改進(jìn)，有望進(jìn)一步探索產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)化，為富血小板血漿的臨床應(yīng)用提供更加可靠的保障。

富血小板血漿（Platelet-Rich Plasma，PRP）是從自體血液中提取的血小板及血漿的濃縮物，即血小板濃度高于基礎(chǔ)值的血漿[1]。近年來，由于其包含具有促進(jìn)組織修復(fù)、抗炎潛在作用等多種生物活性成分物質(zhì)而備受關(guān)注。目前PRP的制備方法有很多，其中專用于PRP的制備耗材被稱為PRP制備套裝，套裝在我國按照第三類醫(yī)療器械管理。文章通過文獻(xiàn)檢索的方式收集關(guān)于PRP制備套裝的相關(guān)研究和應(yīng)用的文章（檢索文獻(xiàn)內(nèi)容范圍包括臨床試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)室研究和技術(shù)評估；檢索文獻(xiàn)發(fā)表的時(shí)間段：1962年～2022年），主要圍繞PRP制備套裝的研究進(jìn)展和審評思考進(jìn)行綜述。

1.PRP制備套裝的發(fā)展歷程

PRP最早于1977年被Harke等[2]從全血中分離制備，并用于心臟外科手術(shù)患者的治療。隨著PRP在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，相應(yīng)的PRP的制備和提取也受到了研究者關(guān)注。近年來，PRP的制備技術(shù)經(jīng)歷了快速發(fā)展，從最初的手工分離法到現(xiàn)在的PRP制備套裝法，使PRP的制備效率及安全性得到了一定的提高。

2.PRP制備套裝的結(jié)構(gòu)及制備原理

PRP制備套裝一般采用高分子材料制成，主要包括以下幾個(gè)部分：①采血器械：如采血針等，用于采集自體血液。②離心分離器具：如制備器或離心管等，用于對采集的血液進(jìn)行離心處理并分離出PRP。③注射器具：包括注射器、針頭等，用于將收集到的PRP注入治療部位。

目前PRP制備套裝一般采用密度梯度離心法這一原理。密度梯度離心法是通過離心的方法使不同密度的物質(zhì)快速分層，物質(zhì)的密度越大，沉降速度就越快；在PRP制備套裝采集的全血中，紅細(xì)胞密度大，沉降速度最快，離心分層后位于下層，密度較小的血小板、白細(xì)胞和血漿成分就位于上層。因此，通過人為調(diào)整離心參數(shù)，即可從全血中分離提取出PRP[3]。

3.PRP制備套裝的特點(diǎn)

目前臨床制備PRP的方法主要有四種，即：PRP制備套裝制備法、成分血單采機(jī)制備法、血袋采集制備法和手工法制備法，四種PRP的制備方法各有優(yōu)劣[4]（見表1）。

表1.四種PRP制備技術(shù)的特點(diǎn)

相比其他三種方法，PRP制備套裝制備法具有操作簡單，安全性較高，白細(xì)胞混入量較高、質(zhì)量差別較大的特點(diǎn)。其整個(gè)制備過程均在密閉的容器中，不易受外部環(huán)境影響，無需專門的場地，通常不再需要其他配套耗材，可直接在床旁進(jìn)行PRP的制備，一般為1次采集1次使用，使PRP臨床使用更加便利[5]。此外，由于PRP制備套裝的技術(shù)特點(diǎn)，使用套裝制備出的PRP白細(xì)胞混入量高于其他方法，同時(shí)由于不同制造商采用的制備工藝不同，不同套裝制備出的PRP質(zhì)量差異較大。

4.PRP制備套裝的關(guān)鍵技術(shù)

PRP制備套裝的關(guān)鍵技術(shù)可能會根據(jù)不同的產(chǎn)品和制造商有所不同，通常包括制備環(huán)境、制備體積、離心次數(shù)和離心機(jī)參數(shù)等。

制備環(huán)境：目前PRP制備套裝的采血點(diǎn)一般為肘靜脈，且為“現(xiàn)采現(xiàn)制”，建議由醫(yī)護(hù)人員在接受制造商的培訓(xùn)后，嚴(yán)格按照制造商說明書要求在醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)使用。

制備體積：一般情況下，離心法可制備得到全血體積10%的PRP[7]。已上市的PRP制備套裝宣稱的制備體積差異性較大，范圍為0.4～30mL，常見的制備體積為4～5mL。

離心次數(shù)：PRP制備套裝的制備原理可根據(jù)離心次數(shù)不同分為一次離心法和二次離心法。一般情況下，一次離心法制備的PRP濃度和純度差異較大，但操作較為簡便；而二次離心法可以制備出相對質(zhì)量更加穩(wěn)定、濃度更高的PRP。目前已上市PRP制備套裝的原理多采用二次離心法[8]。

離心機(jī)參數(shù)：離心機(jī)參數(shù)是制備過程中的關(guān)鍵指標(biāo)，離心力和離心時(shí)間等因素均會對制備得到的PRP產(chǎn)生影響。研究發(fā)現(xiàn)，增大離心力可加速血液中各成分的沉降速率，但過高離心力會產(chǎn)生高剪切應(yīng)力，可能誘導(dǎo)血小板聚集、活化，生長因子提前釋放，降低PRP治療效果[9]。離心力與離心機(jī)轉(zhuǎn)速的平方成正比，見公式（1）：

其中，G表示離心力，R表示離心轉(zhuǎn)子半徑，rpm表示離心機(jī)轉(zhuǎn)速。因此離心力可能受不同制造商離心機(jī)的尺寸與制備時(shí)離心機(jī)轉(zhuǎn)速的影響。而離心時(shí)間則是決定血液成分在離心力作用下分離效果的關(guān)鍵因素，另外，離心時(shí)間也會影響到血小板的回收率。

5.PRP制備套裝的質(zhì)量評價(jià)要求

PRP制備套裝作為第三類醫(yī)療器械，除了要滿足產(chǎn)品本身的安全性、有效性指標(biāo)，如無菌、密閉性等要求外，還應(yīng)對制備所得的PRP進(jìn)行質(zhì)量控制。在目前的PRP制備套裝的技術(shù)審評中，常將血小板富集率、白細(xì)胞和紅細(xì)胞的混入量、pH值、微生物污染等指標(biāo)作為產(chǎn)品的質(zhì)量要求進(jìn)行控制。

眾所周知，PRP是一種復(fù)雜的混合物，里面含有多種生長因子和細(xì)胞因子等成分。有研究表明，PRP中生長因子的濃度與療效之間有顯著相關(guān)性[10]。但目前臨床廣泛應(yīng)用的PRP制備方法迥異，導(dǎo)致生長因子等含量不穩(wěn)定，且沒有相應(yīng)的快速、單樣品檢驗(yàn)生長因子的方法[11]。目前的質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)難以真實(shí)反映出該制品在體內(nèi)發(fā)揮作用的機(jī)制，從而限制了該產(chǎn)品的臨床應(yīng)用。

與此同時(shí)，作為PRP質(zhì)量評價(jià)的重要指標(biāo)，白細(xì)胞混入量在不同PRP制備套裝中的要求差異同樣較大。PRP中白細(xì)胞的存在對創(chuàng)面愈合治療的利弊仍存在爭議，建議由臨床醫(yī)師根據(jù)患者的治療需求選擇不同白細(xì)胞濃度標(biāo)準(zhǔn)的PRP制備套裝[12-14]。

此外，美國食品藥品監(jiān)督管理局公示的PRP制備套裝產(chǎn)品概要中，將制備的PRP中平均血小板回收率、P-選擇素在血小板中的表達(dá)、低滲透壓反應(yīng)、血小板聚集等作為產(chǎn)品體外臺架試驗(yàn)的質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)[15-17]。上述標(biāo)準(zhǔn)可以更加全面地對PRP中血小板的質(zhì)量和活性進(jìn)行評價(jià)，對我國PRP制備套裝的質(zhì)量評價(jià)具有一定的啟發(fā)作用。

6.PRP制備套裝的審評思考

目前，富血小板血漿制備套裝所采用的制備方法尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，不同廠商的套裝所制備的PRP組分存在一定差異。同時(shí)制備所得到的PRP中血小板濃度指標(biāo)受多方面因素的影響，如離心機(jī)的種類、離心速度、離心時(shí)間、白細(xì)胞和/或紅細(xì)胞的相對濃度、保存方法與時(shí)間等，此外還與采集者的個(gè)體因素有關(guān)，如采集者的外周靜脈血的參數(shù)、有無并發(fā)癥、年齡和循環(huán)血中生長因子和細(xì)胞組分等，這些因素均對產(chǎn)品的技術(shù)審評帶來挑戰(zhàn)。

為確保PRP制備套裝制備PRP的質(zhì)量穩(wěn)定性，技術(shù)審評一般建議注冊人明確PRP制備的工藝條件及參數(shù)，如離心機(jī)型號、離心速度、離心時(shí)間等；明確制備PRP的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，如血小板濃度、白細(xì)胞、紅細(xì)胞的濃度等。此外，在使用方法方面，建議臨床制備PRP后立即注射進(jìn)入人體，操作時(shí)禁止未消毒物品碰及采血針（靜脈輸液針）、注射器等與血液接觸的部件，以免造成污染。

隨著技術(shù)的進(jìn)步，新型的PRP制備套裝產(chǎn)品不斷涌現(xiàn)，近年來，含有分離膠的產(chǎn)品進(jìn)入大眾的視野。分離膠由于密度介于紅細(xì)胞和血漿之間，離心后可以在紅細(xì)胞與血漿之間形成屏障，在一定時(shí)間內(nèi)保持血漿成分的穩(wěn)定，更好地輔助PRP的分離效果，并得到更高濃度血小板的PRP[18]。但是由于分離膠的特性，離心過程中可能會發(fā)生解體進(jìn)入PRP中。因此，為保證臨床使用的安全性，制造商一般對制備得到的PRP中分離膠等添加物質(zhì)及其所產(chǎn)生的可瀝濾物的含量進(jìn)行測定及安全性評價(jià)。雖然分離膠的應(yīng)用可能會提高產(chǎn)品制備PRP中的血小板富集效率，但是由于PRP的各種適應(yīng)證所需最佳血小板濃度尚不明確，因此，分離膠在PRP制備套裝的應(yīng)用前景還有待進(jìn)一步研究。

7.小結(jié)

近年來，隨著PRP臨床應(yīng)用的增加，PRP制備套裝產(chǎn)品的注冊申報(bào)量也逐年增加。但是，現(xiàn)階段PRP制備套裝仍存在質(zhì)量差別較大、評價(jià)方法未統(tǒng)一、臨床應(yīng)用較窄等問題。因此，相關(guān)研究的規(guī)范需要全行業(yè)的參與，共同推進(jìn)PRP制備套裝的制備方法和評價(jià)方法的統(tǒng)一，建立一個(gè)穩(wěn)定的、相對統(tǒng)一的質(zhì)量評價(jià)體系，提高PRP制備套裝技術(shù)審評的科學(xué)化、規(guī)范化水平，進(jìn)一步促進(jìn)行業(yè)發(fā)展。