基于網絡藥理學和實驗驗證探討麥門冬湯治療特發性肺纖維化的作用機制

馬 先，于明玥，周博文，李澤峰，李傳慧，辛玲杰，賈新華

（1.山東中醫藥大學中醫學院，山東 濟南 250014；2.山東中醫藥大學第一臨床醫學院，山東 濟南 250014；3.山東大學附屬公共衛生臨床中心/山東省公共衛生臨床中心中西醫結合科，山東 濟南 250013；4.山東中醫藥大學附屬醫院呼吸與危重癥醫學科，山東 濟南 250014）

特發性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一種慢性進行性間質性肺疾病，病因不明，預后不良［1］。流行病學研究顯示［2］，IPF 在全球范圍內的發生率和患病率介于每萬人0.09～1.30 例，并且這一數字隨著時間推移呈現增長趨勢。在治療IPF 患者時，尼達尼布和吡非尼酮這兩種藥物已經獲得了批準使用，它們具有減緩肺功能衰退和延緩病情惡化的效果，但同時也存在與副作用和耐藥性相關的問題［3，4］。而中醫藥具有多成分、多靶點、多通路的獨特優勢，臨床治療特發性肺纖維化療效可觀，有待發掘［5-7］。

然中醫病名中未有IPF 的記載，大多數現代學者基于肺纖維化的臨床特征和病理進程，將其歸類為中醫學中的“肺痿”和“肺痹”范疇，病理特點包括“肺 燥 葉 焦”“肺 氣 虧 虛”“津 枯 液 亡”“絡 阻 血 瘀”［8］。在疾病的發展過程中，肺燥、氣虛和陰損相互作用，故中醫理論認為本病治宜養陰益氣。《金匱要略·肺痞肺癰咳嗽上氣病》篇中指出：“大 （火） 逆上氣，咽喉不利，止逆下氣者，麥門冬湯主之?！痹谂R床實踐中，使用麥門冬湯來治療 IPF 能有效地緩解患者的癥狀，并且效果較常規治療方法更佳［9］。但麥門冬湯的現代研究未集中在中藥復方上，藥物作用靶點對應疾病發病機制不明，且忽略了多信號通路的相互聯系和影響［10］。本文擬通過網絡藥理學結合相應的動物實驗研究，探討麥門冬湯治療 IPF 的作用機制，以期為中醫中藥臨床治療肺纖維化提供新的治療靶點。

1 網絡藥理學

1.1 麥門冬湯活性成分及相關靶點篩選

利用TCMSP 數據庫［11］，設置口服生物利用度（OB）不小于30%和藥物相似性（DL）不小于0.18作為篩選標準，對麥門冬湯中各個藥材進行檢索，以識別出各藥物中的有效活性成分。對于在TCMSP 數據庫中未能檢索到的藥物，可以借助ETCM數據庫（http：//www.tcmip.cn/ETCM/index.php/Home/Index/）進行查詢，并結合查閱已發表的文獻來收集藥物成分。接著，使用SwissADME 平臺（http：//www.swissadme.ch/）進行成分的活性篩選，從而確定藥物的有效活性成分。隨后，通過SwissTargetPredict 網 站（http：//www.swisstargetprediction.ch/）執行靶點預測工作。如果在SwissTargetPrediction 網站上無法確認某個成分的靶點信息，可以采用TCMSP 網站提供的靶點數據。隨后，通過UniProt 數據庫［12］對這些靶點信息進行標準化處理，以獲取規范化的成分靶點數據。

1.2 IPF 相關靶點篩選

使 用“Idiopathic Pulmonary Fibrosis”作 為 關 鍵字詞，在OMIM 數據庫［13］和GeneCards 數據庫［14］中查詢，以獲得與 IPF 相關的靶點信息。

1.3 麥門冬湯與特發性肺纖維化共同靶點Venn 圖構建

利用Venn diagrams 的在線繪圖服務（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/），對IPF 的相關靶點與麥門冬湯的靶點進行交集分析。通過繪制靶蛋白的Venn 圖，篩選出中藥與疾病共有的關鍵靶點。

1.4 蛋白質-蛋白質（PPI）相互作用網絡構建及核心靶點的篩選

導入IPF 與麥門冬湯共同靶點至String 數據庫［15］以執行蛋白質-蛋白質相互作用（PPI）分析。隨后，將得到的PPI 結果輸入到Cytoscape 3.9.1 軟件中，進行網絡的拓撲屬性分析，這包括計算每個節點的連接度（Degree）、介度（Betweenness）以及緊密度（Closeness）?；诔^中位數的標準來篩選出核心靶點，如果核心靶點數量較多，將進一步進行篩選，從而構建出核心靶點與成分之間的網絡圖，并識別出關鍵的活性成分。

1.5 共同靶點的GO富集分析和KEGG通路分析

將共有靶點導入DAVID 數據庫［16］中，以執行GO 及KEGG 通路富集分析。

2 動物實驗

2.1 實驗動物

30 只SPF 級別的健康雄性SD 大鼠，年齡為7周，體重在（180±20） g 范圍內，購于山東濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，室內環境實行12 h 的光照周期和12 h 的黑暗周期進行飼養，提供標準的食物和水源，同時保持室溫在大約（22±1）℃和大約40%的相對濕度。本研究通過山東中醫藥大學附屬醫院實驗動物倫理委員會審查（實驗動物倫理審查批件號：2020-45）。本研究所采用的所有實驗方案均遵循中國倫理委員會制定的關于實驗動物使用的指導準則。

2.2 實驗試劑

麥門冬湯組成：麥冬，人參，半夏，大棗，甘草（比例7∶1.5∶1∶1∶1），購自山東中醫藥大學附屬醫院，按照人與動物體表面積折算公式［17］，大鼠（0.2 kg）等效劑量換算為人類（70 kg）的6.3 倍，計算生藥給藥劑量為12.6 g 生藥/kg 體質量，按照大鼠每100 g 體重給藥體積為1 mL，確定藥物濃度，將原藥材煎煮后濃縮為中藥液，按大鼠實際質量灌胃。硫酸博來霉素購自賽默飛世爾科技有限公司；反轉錄試劑盒購自山東思科捷生物技術有限公司；多聚甲醛購自成都市科隆化學品有限公司。

2.3 實驗儀器

高速組織研磨儀（武漢賽維爾生物科技有限公司），酶標檢測儀（美國BioTeK 儀器有限公司），熒光定量PCR 儀（美國Bio-rad 科技公司）。

2.4 實驗方法

2.4.1 動物分組 在經過一周的適應性飼養之后，30 只大鼠被隨機分配到三個不同的組別：空白對照組、模型對照組和麥門冬湯治療組，每個組別包含10 只大鼠。

2.4.2 動物造模 按照Szapiel 等的方法，通過硫酸博來霉素的氣管內滴注來建立大鼠的肺纖維化模型。首先，大鼠通過腹腔注射1.5%的戊巴比妥鈉（劑量為30 mg/kg）進行麻醉。麻醉后，大鼠被仰臥固定在傾斜35°的板上，使用75%的醫用酒精對頸部皮膚進行常規消毒。然后在頸部中線切開2～3 cm 的皮膚，利用血管鉗進行鈍性分離肌肉以露出氣管。接著，用4 號針頭穿過氣管軟骨環的間隙，向心臟方向刺入氣管，并通過空針筒注射約0.3 mL 含有硫酸博來霉素（劑量為7 mg/kg）的溶液。注射完畢后，迅速將鼠板垂直旋轉并豎直放置3 min，以便讓藥物在肺部均勻分布。之后縫合肌肉和皮膚，進行再次消毒，并注射青霉素鈉以預防感染。對照組大鼠則只接受等量生理鹽水的氣管內注射，其他操作與造模組相同。除空白對照組以外，其余各組均被制成肺纖維化模型。

2.4.3 動物給藥 各組動物分別于造模第2 天開始灌胃，按照每10 mL/kg 給藥，同時抽取與之相等劑量的生理鹽水，給予模型對照組和空白對照組灌胃，每日一次，連續給藥28 d。

2.4.4 標本采集 在給藥28 d 后，通過左心室取血的方法處死大鼠。無菌操作下打開胸膛，取出肺組織，隨后將兩肺分離；將右肺置于4%多聚甲醛溶液中進行固定，并進行石蠟包埋以備后續的病理學切片分析；左肺則保存于-80℃的冷凍條件下，用于PCR 檢測。

2.4.5 肉眼標本觀察 肉眼觀察各組大鼠雙肺外觀、肺葉輪廓、體積、顏色、彈性等。

2.4.6 肺組織形態觀察 取病理切片，行HE 染色，檢測肺組織病理變化。

2.4.7 實時熒光定量PCR（RT-PCR）分析 取大鼠肺組織，Trizol 法抽提總RNA，Nanodrop 和瓊脂糖凝膠電泳檢測其純度和濃度。將總RNA 溶液稀釋至 200 ng/μL，用MLV 反轉錄酶體系，反轉錄成cDNA，然后進行 RT-PCR 反應。反應條件： 95 ℃，10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，共40 個循環。分別計算每個樣本內參基因平均CT值，目的基因平均CT 值，根據公式“ΔCT=目的基因平均CT 值-內參基因平均CT 值”計算各個樣本的ΔCT，進而求出各組數據的平均ΔCT，根據公式“ΔΔCT=處理組ΔCT-空白組ΔCT”計算各組數據的ΔΔCT，比較2-ΔΔct的大小關系 計算各處理組相對的基因轉錄水平。包括TGF-β1、α-SMA、IL-4、IFN-γ、LC3-Ⅱ、beclin1的mRNA。 引 物 序 列見表1。

表1 PCR 引物序列Tab 1 PCR primer sequences

2.5 統計學分析

使用SPSS 26.0 軟件進行數據的統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，符合正態分布并且方差齊的情況下，采用獨立樣本t檢驗進行比較；若不滿足方差齊，則應用校正的t檢驗。實驗結果中，當P＜0.05 時，差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 麥門冬湯有效活性成分篩選

麥門冬湯中5 味中藥的159 種活性成分，其中麥冬23 種，人參17 種，甘草88 種，半夏12 種，大棗19 種，有6 種成分為共有成分，見表2。

表2 麥門冬湯共同化合物成分信息Tab 2 Common compound composition of Maimendo decoction

3.2 中藥與疾病共同靶點Venn 圖的繪制

在進行檢索和篩選后，共識別出4 190 個針對IPF 治療的潛在靶點。同時，識別出674 個與麥門冬湯相關的靶點。通過取交集，共確定了402 個在IPF 治療中與麥門冬湯相關的潛在靶蛋白。為了直觀展示這些靶蛋白之間的關系，使用了在線韋恩圖工具（Venndiagrams）來繪制了靶蛋白的韋恩圖，見圖1。

圖1 麥門冬湯治療特發性肺纖維化的交集靶點Venn 圖Fig 1 Venn plot of intersection targets of Maimendong decoction in the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis

3.3 “中藥-活性成分-疾病-靶點”網絡圖的構建

通過將麥門冬湯與IPF 的共有靶點信息輸入到Cytoscape 3.9.1 軟件中進行圖形化展示。生成的網絡圖包含1 個疾病節點、5 種中藥成分、以及159 個活性成分節點?！爸兴?活性成分-疾病-靶點”網絡圖，見圖2。

圖2 中藥-活性成分-疾病-靶點網絡圖Fig 2 Network diagram of traditional Chinese medicine-active ingredients-diseases-targets

3.4 PPI 網絡拓撲分析及核心靶點的篩選

PPI 網絡基于STRING 數據庫構建，分析麥門冬湯和特發性肺纖維化的402 個共有靶點，設置默認置信度并隱藏孤立靶點，所得PPI 網絡圖，共含9 970 條連線。使用NetworkAnalyzer 篩選核心靶點，通過cytoscape3.9.1 插件設置連接度、介度和緊密度，所得麥門冬湯治療特發性肺纖維化的關鍵靶點基因為轉化生長因子-β1（TGF-β1）、白細胞介素-4（IL-4）、蛋 白 激 酶（AKT1）、腫 瘤 壞 死 因 子（TNF）、白蛋白（ALB）、白細胞介素-6（IL-6）、血管內皮生長因子-A（VEGFA）、表皮生長因子受體1（EGFR）、白細胞介素-1b（IL-1β）、非受體酪氨酸激酶（SRC）、胱天蛋白酶3（CASP3）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK3）、表皮生長因子（EGF）、基質金屬蛋白酶-9（MMP9）、白細胞介素-8（CXCL8）等50 個，見圖3。

圖3 麥門冬湯治療特發性肺纖維化的PPI 網絡及關鍵靶點網絡圖Fig 3 PPI network and key target network diagram of Maimendong decoction in the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis

3.5 麥門冬湯核心靶點GO 功能富集和KEGG 通路富集

GO 分 析 包 括 生 物 途 徑（BiologicalProcess，BP）、細胞組分（CellularComponent，CC）、分子功能（MolecularFunction，MF）。PPI 網 絡 核 心 靶 點 的GO、KEGG 富集結果顯示，核心靶點的BP 與細胞對氮化合物的反應、炎癥反應、細胞凋亡、氧化應激反應等相關；CC 與膜筏、受體復合物、細胞外基質等相關；MF 與蛋白激酶活性、激酶結合、蛋白酪氨酸激酶活性等相關，見圖4。KEGG 除了癌癥、病毒相關通路外，與PI3K-Akt 信號通路、絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）信號通路、cAMP 信號通路、鈣信號通路、細胞衰老等信號通路密切相關，見圖5。

圖4 麥門冬湯核心靶點GO 富集分析柱狀圖Fig 4 Bar chart of GO enrichment analysis for the core target of Maimendong decoction

圖5 麥門冬湯核心靶點KEGG 通路富集分析氣泡圖Fig 5 Bubble diagram of KEGG pathway enrichment analysis for the core target of Maimendong decoction

3.6 肉眼標本觀察

空白對照組大鼠肺外觀光滑潤澤，呈淡紅色，肺葉輪廓清晰，體積大小適中，組織柔軟，富有彈性。模型對照組大鼠肺外觀見大量瘢痕，組織結構破壞，呈蒼白色或紅黑色，肺葉輪廓不清晰，體積縮小，彈性變差，質地較硬。麥門冬湯治療組大鼠肺外觀少量瘢痕組織，呈暗紅色，肺葉輪廓較清晰，體積大小適中，彈性一般。與模型對照組比較，麥門冬湯治療組大鼠雙肺外觀、顏色、肺葉輪廓、體積彈性有所改善。見圖6。

圖6 麥門冬湯對博來霉素肺纖維化大鼠肺纖維化程度的影響Fig 6 Effect of Maimendong decoction on the degree of pulmonary fibrosis in rats with bleomycin induced pulmonary fibrosis

3.7 肺組織形態的觀察

在空白對照組的大鼠中，肺組織的結構保持完好，未觀察到顯著的形態學改變。而在模型對照組的大鼠中，肺泡的結構受損，表現為肺泡間隔增寬、肺泡結構破損不完整，并伴隨著炎癥細胞的浸潤以及纖維細胞和纖維組織的過度增生。在麥門冬湯治療組的大鼠中，肺泡結構有輕微的紊亂，仍可見到一定程度的炎癥細胞滲透和纖維細胞及組織的增生，但這些病理變化相較于模型對照組有了明顯減輕，詳見圖7。

圖7 各組大鼠肺組織H＆E 染色結果（×100）Fig 7 H＆E staining results of lung tissue in each group of rats（×100）

3.8 麥 門 冬 湯 對 大 鼠TGF-β1、α-SMA、IL-4、IFN-γ、LC3-Ⅱ、beclin1 mRNA 的影響

定量PCR 結果顯示，與空白對照組相比，模型對照組的TGF-β1、α-SMA、IL-4mRNA 表達水平顯著 上 升（P＜0.05），LC3-Ⅱ、beclin1、IFN-γmRNA表達水平顯著下降（P＜0.05）；與模型對照組相比，麥門冬湯治療組可顯著下調TGF-β1、α-SMA、IL-4的mRNA 相 對 表 達 水 平（P＜0.05），顯 著 上 調LC3-Ⅱ、beclin1、IFN-γmRNA 的相對表達水平（P＜0.05），差異具有統計學意義，見圖8、表3。

圖8 麥門冬湯對大鼠TGF-β1、α-SMA、IL-4、IFN-γ、LC3-Ⅱ、beclin1 mRNA 的影響Fig 8 Maimendong decoction on TGF-β1，α- SMA， IL-4， IFN- γ， LC3-Ⅱ and beclin1 mRNA in rats

表3 麥門冬湯對大鼠TGF-β1、α-SMA、IL-4、IFN-γ、LC3-Ⅱ、beclin1 mRNA 的影響（n＝3，±s）Tab 3 Maimendong decoction on TGF-β1，α- SMA， IL-4， IFN- γ，LC3-Ⅱ and beclin1 mRNA in rats（n＝3，±s）

表3 麥門冬湯對大鼠TGF-β1、α-SMA、IL-4、IFN-γ、LC3-Ⅱ、beclin1 mRNA 的影響（n＝3，±s）Tab 3 Maimendong decoction on TGF-β1，α- SMA， IL-4， IFN- γ，LC3-Ⅱ and beclin1 mRNA in rats（n＝3，±s）

注：與空白組相比，*P＜0.05；與模型組相比，#P＜0.05。

組別TGF-β1 α-SMA LC3-ⅡIFN-γ IL-4 beclin1空白組模型組麥門冬湯組1.000±0.095 2.300±0.325*1.360±0.440#1.040±0.275 2.900±1.055*0.570±0.345#1.000±0.010 0.830±0.375*2.860±0.705#1.000±0.085 1.190±0.365*3.730±1.630#1.050±0.330 6.650±0.200*1.470±0.060#1.000±0.030 3.720±0.985*0.920±0.430#30.84＜ 0.000 1 F P 21.09＜ 0.000 1 18.15＜ 0.000 1 29.44＜ 0.000 1 11.35 0.001 2 826.80＜ 0.000 1

4 討論

4.1 麥門冬湯成分分析

通過藥物-活性成分-疾病-靶點網絡，共篩選得到槲皮素、山奈酚、人參皂苷等159 種治療IPF 的潛在活性成分。槲皮素能夠通過抑制 TGF-β1 信號傳導緩解肺纖維化［18］，并與核轉錄因子-κB（NF-κB）信號通路、SphK1/S1P 信號通路等有關［19］。山奈酚通過靶向TGF-β 下調Smad2 和Smad3 磷酸化，抑制成纖維細胞膠原合成、增殖和活化治療纖維增生性疾?。?0］。人參皂苷在降低膠原產生和增強細胞對氧化損傷的防御能力方面表現出顯著效果，具有抗肺纖維化的潛在能力，這種效果與TGF-β 的抑制作用有關［21，22］。以上研究提示：槲皮素、山奈酚、人參皂苷通過多通路作用于TGF-β 等靶點來發揮抗纖維化作用。

4.2 麥門冬湯主要靶點分析

GO 富集分析表明，麥門冬湯治療IPF 可能涉及對氮化合物的反應、炎癥反應、細胞凋亡以及氧化應激反應等多個生物學途徑。通過對PPI 網絡進行拓撲學分析，預測出TGF-β1、IL-4、AKT1、TNF、ALB、IL-6、VEGFA、EGFR、IL1-β、SRC、CASP3、MAPK3、EGF、MMP9、CXCL8 等50 個核心靶點。前人已通過實驗驗證麥門冬湯調節p-AKT、AKT及VEGF 表達［23］。其中，TGF-β1 具有促進成纖維細胞激活與增殖的作用，這會引起細胞外基質的堆積。TGF-β1 的表達水平上升與多種纖維化疾病的發生有關，并且其表達的多寡往往與疾病的嚴重性成正比。因此，針對TGF-β1 及其信號通路的抑制策略在治療肺纖維化以及其他纖維化疾病方面顯示出了巨大的療效潛力［24，25］。2 型免疫促進損傷后組織再生和纖維化，其特征是產生IL-4，IL-5，IL-9和IL-13，表達失調會導致許多不同器官系統中病理性纖維化的發展［26］?；谏鲜鲅芯拷Y果，可以推測TGF-β1 和IL-4 可 能 是 治 療IPF 的 關 鍵 靶 點，它們有望成為針對IPF 防治的分子機制研究的重點。

4.3 麥門冬湯主要通路分析

KEGG 富集分析表示，PPI 的核心靶點主要通過PI3K-Akt 信號通路、MAPK 信號通路、cAMP 信號通路、鈣信號通路等信號通路發揮作用。PI3K-AKT 信號通路介導自噬影響多種疾病，多個實驗表明，PI3K/Akt/mTOR 信號通路能夠抑制支氣管上皮細胞自噬，促進肺部炎癥和纖維化［27-29］，并與TGF-β1-PI3K-Akt 信 號 通 路 相 關［30］。MAPK 家族，包含c-Jun N 末端激酶、p38 MAPK 以及細胞外信號相關激酶，這些激酶參與調控多種細胞功能，并在平衡調節自噬與細胞凋亡過程中扮演關鍵角色［31］，并受TGF-β1 調節促進IPF 的纖維化過程［32］。由以上研究可知，麥門冬湯可能通過抑制PI3K-Akt信號通路、MAPK 信號通路等信號通路介導細胞自噬，延緩肺纖維化進程。

4.4 實驗驗證分析

自噬，是一種基本的細胞穩態過程，可響應細胞內或細胞外因素誘導，降解和回收細胞蛋白并去除受損的細胞器。LC3 蛋白質家族作為自噬體形成的結構成分起作用，是最好的表征形式，也是最廣泛的自噬標志物。LC3 的胞質形式（LC3-Ⅰ）轉化為脂化形式（LC3-Ⅱ）表明自噬體形成［33］。自噬體形成前，beclin 1 需與自噬前體結合參與啟動自噬過程［34］。在IPF 中，自噬是一種通過調節膠原蛋白降解和自噬相關細胞死亡來控制肺部纖維化發展的保護機制［35］。IPF 患者的肺上皮細胞和肺成纖維細胞，與用TGF-β1 激活的成纖維細胞，及博來霉素誘導的IPF 小鼠中自噬途徑均有所減少［36］。實驗數據表明，與空白組相比，模型組與麥門冬湯組LC3-Ⅱ mRNA 和beclin1mRNA 水平降低；與模型組 相 比，麥 門 冬 湯 組LC3-ⅡmRNA 和beclin1mRNA 水平增加，表明自噬能夠改善博來霉素誘導的大鼠肺纖維化，麥門冬湯可通過增強自噬，抑制肺纖維化的發展。

此外，自噬還參與巨噬細胞極化的調節［37］。巨噬 細 胞 可 分 為M1 表 型 和M2 表 型，M1 和M2 巨 噬細胞表型分別與促炎和促纖維化特征相對應。M1巨噬細胞活化通過細胞外基質基質降解金屬蛋白酶和促炎細胞因子清除病原微生物并促進炎癥，M2巨噬細胞活化通過抑制炎癥反應和/或直接調節肺纖維化疾病的發展和進展，以及分化為表達膠原蛋白的纖維細胞樣細胞的能力［38］。自噬抑制巨噬細胞M2 表型極化，M2 表達的標志物包括IL-4、TGF-β1，增加了M1 表達的標志物如IFN-γ。本實驗數據表明，與空白組相比，模型組與麥門冬湯組IL-4mRNA、TGF-β1mRNA、IFN-γmRNA 水平升高；與模型組相比，麥門冬湯組IL-4mRNA、TGF-β1mRNA 水平降低，IFN-γ mRNA 水平升高，表明巨噬細胞參與肺損傷和修復具有促進和抑制纖維化的雙重作用，麥門冬湯可以通過增強自噬調節巨噬細胞極化改善博來霉素誘導大鼠的肺纖維化。IFN-γ/IL-4 比 例 失 調 也 提 示 其 可 能 與Th1/Th2 細胞失衡有關［39］，表明麥門冬湯糾正Th1/Th2 失衡來調控肺泡炎癥及肺纖維化發展進程。

TGF-β1 長期以來一直被認為是涉及多個器官（包括皮膚，肝臟，腎臟和肺）的組織纖維化的中樞介質［40］。在IPF 的發展中，TGF-β1 同樣起著核心作 用。TGF-β1 通 過MAPK 和ERK 信 號 通 路 等 信號 通 路 促 進IPF 的 纖 維 化 過 程［32］。因 此，TGF-β1及其信號通路一直是開發抗纖維化藥物的有吸引力的治療靶點［41］。本實驗數據表明，與空白組相比，模型組與麥門冬湯組TGF-β1mRNA、α-SMAmRNA 水平升高；與模型組相比，麥門冬湯組TGF-β1mRNA、α-SMAmRNA 水 平 降 低，表 明TGF-β1能夠促進博來霉素誘導的大鼠肺纖維化，麥門冬湯可通過抑制TGF-β1 表達，抑制肺纖維化的發展。

并且，TGF-β1 介導自噬反應的調節［42］。成纖維細胞到肌成纖維細胞分化（FMD）是肺纖維化的重要特征，其中促纖維化細胞因子TGF-β1 起關鍵作用，而自噬作用在于維持正常的肺成纖維細胞的命運。TGF-β1 通過減少自噬通量介導FMD，促進肺纖維化進程，增強自噬可改善TGF-β1 介導的肺纖維化［43］。數據表明，與空白組相比，模型組和麥門 冬 湯 組LC3-ⅡmRNA 和beclin1mRNA 水 平 降低，TGF-β1mRNA 水平升高；與模型組相比，麥門冬 湯 組LC3-ⅡmRNA 和beclin1mRNA 水 平 升 高，TGF-β1mRNA 水平降低，表明麥門冬湯可通過增強自噬減弱TGF-β1 驅動的級聯反應改善博來霉素誘導肺纖維化大鼠的治療效果。

總結來看，網絡藥理學的分析表明，麥門冬湯治療IPF 的機制涉及其多成分、多靶點和多途徑的特性，尤其在調節細胞自噬、炎癥反應和巨噬細胞極化等生物學過程上發揮關鍵作用。動物實驗證實麥門冬湯能夠降低IPF 模型大鼠肺組織中TGF-β1、α-SMA、IL-4mRNA 水平，增 加LC3-Ⅱ、beclin1、IFN-γ mRNA水平，緩解肺纖維化。然而，由于IPF 的發病機制較為復雜，加之本實驗的樣本量有限，并未對網絡藥理學所預測的關鍵靶點進行全面的驗證，網絡藥理學的結果仍可以為未來深入的機制性研究提供堅實的理論基礎。

作者貢獻度說明：

馬先、于明玥、周博文、李澤峰：執筆撰寫，李傳慧、辛玲杰、賈新華：審校。

所有作者聲明不存在利益沖突關系。