肝細胞癌患者血清ECM1、MMP-9 和VEGF 水平的變化及其意義

郭雅明 陳艷哲 李艷杰 李國超 張國友 陳博

肝細胞癌死亡率較高, 常會累及患者的肝臟, 若其發生轉移, 還會對患者的大腦、胃腸道以及腎臟等器官造成嚴重影響［1］。臨床早期手術或者移植等辦法能夠治愈該疾病, 但若發展至晚期, 其治療難度較大, 且術后極易發生轉移和復發, 所以了解患者肝細胞癌發展情況對于術后患者恢復情況有重要意義［2］。臨床上首次發現小鼠成骨基質細胞中細胞外基質蛋白-1(serum extracellular matrix-1, ECM1) 能夠參與細胞增生、皮膚分化以及腫瘤發展的多個過程中, 故臨床對此進行了進一步研究, 發現其在多種惡性腫瘤中具有高表達；以及隨著對肝細胞癌的深入鉆研, 發現基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在腫瘤轉移過程中也有重要意義［3-5］, 所以本文選擇了60 例肝細胞癌患者進行實驗, 現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 對本院2021 年9 月～2022 年12 月收治的60 例肝細胞癌患者進行回顧性分析, 其中, 男39 例, 女21 例；年齡30～90 歲, 平均年齡(60.00±10.10)歲；TNM 分期［6］：Ⅰ～Ⅱ期33 例, Ⅲ～Ⅳ期27 例；24 例患者血管遭到侵犯, 36 例血管無礙；Edmondson分期［7］：Ⅰ～Ⅱ期24 例, Ⅲ～Ⅳ期36 例；腫瘤直徑：≥5 cm 45 例, <5 cm 15 例；24 例出現淋巴結轉移,36 例未出現淋巴結轉移；腫瘤包膜情況：包膜完整42 例, 無或不完整18 例；Child-Pugh 分級［8］：A 級50 例, B 級10 例。本實驗已經過醫院倫理委員會同意。

納入標準：①對本次實驗均已知情, 并自愿簽訂同意書；②臨床資料完善者, 可供參考；③無視覺、聽覺功能障礙；④患有肝細胞癌患者, 且在入組前未接受放療、化療治療。

排除標準：①無故退出實驗者；②患有自身免疫性疾病者；③交流溝通功能障礙者。

1.2 方法 患者主要使用甲磺酸阿帕替尼進行治療,必要時也可聯合GEMOX 方案肝動脈化療栓塞術進行治療。采用經酶聯免疫吸附法檢測患者治療前后血清ECM1、MMP-9 和 VEGF 水平。在微孔中加入提前配制好的標準液與樣本, 將其搖勻, 在37℃下保存0.5 h,之后使用沖洗液沖洗微孔板, 并加入50 μl 的標記二抗,之后在室溫下保存放置0.5 h, 在沖洗5 次后, 加入底物,放置黑暗環境下0.5 h, 之后加入終止液停止反應, 振蕩搖勻后, 在酶標儀器下進行比色, 得出相應的OD 值,并根據其計算濃度。該實驗中使用的儀器、液體和操作均按照說明書進行。

1.3 觀察指標 ①比較患者治療前后ECM1、MMP-9和 VEGF 水平。②比較不同臨床病理特征(年齡、性別、血管侵犯、淋巴結轉移、TNM 分期、Edmondson 分期和腫瘤直徑)患者ECM1、MMP-9 和VEGF 水平。

1.4 統計學方法 采用SPSS23.0 軟件分析及處理數據。計量資料以均數±標準差(±s)表示, 采用t檢驗。以P<0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 患者治療前后 ECM1、MMP-9 和VEGF 水平比較 治療前, 患者ECM1 水平為(215.56±30.80)pg/ml、MMP-9 水 平 為(499.56±30.56)μg/L、VEGF 水 平 為(798.02±50.79)pg/ml；治療后, 患者ECM1、MMP-9以及VEGF 水平分別為(135.23±44.58)pg/ml、(421.25±87.56)μg/L 和(657.56±54.56)pg/ml。治療后, 患者癌組織ECM1、MMP-9 和VEGF 水平低于治療前(t=11.483、6.541、14.596, P<0.001)。

2.2 不同臨床病理特征患者ECM1、MMP-9 和VEGF水平比較 不同年齡、性別患者ECM1、MMP-9、VEGF 水平比較差異無統計學意義(P>0.05)；不同血管侵犯、淋巴結轉移、TNM 分期、Edmondson 分期和腫瘤直徑患者ECM1、MMP-9、VEGF 水平比較差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同臨床病理特征患者ECM1、MMP-9 和VEGF 水平比較( ±s)

表1 不同臨床病理特征患者ECM1、MMP-9 和VEGF 水平比較( ±s)

注：不同血管侵犯、淋巴結轉移、TNM 分期、Edmondson 分期和腫瘤直徑比較, P<0.05

項目 類別 例數 ECM1(pg/ml) MMP-9(μg/L) VEGF(pg/ml)數值 t P 數值 t P 數值 t P年齡 ≥60 歲 35 214.56±30.05 0.339 0.735 503.68±31.02 1.040 0.302 800.58±50.48 0.381 0.705<60 歲 25 217.23±30.02 495.28±30.56 795.56±50.05性別 男 39 215.03±30.02 0.109 0.913 501.79±30.58 0.458 0.649 799.56±50.23 0.204 0.839女 21 215.92±30.13 497.99±30.89 796.79±50.32血管侵犯 有 24 239.22±30.56 5.970 0.000 539.59±30.64 10.079 0.000 869.98±50.98 10.742 0.000無 36 191.16±30.54 459.20±30.02 726.23±50.65淋巴結轉移 有 24 231.10±30.02 3.783 0.000 563.26±30.02 16.036 0.000 856.74±50.32 8.811 0.000無 36 201.05±30.23 435.63±30.32 739.56±50.56 TNM 分期 Ⅰ～Ⅱ期 33 189.68±30.56 6.574 0.000 450.69±31.03 12.237 0.000 696.42±50.23 15.591 0.000Ⅲ～Ⅳ期 27 241.56±30.23 548.56±30.56 899.65±50.23 Edmondson 分期Ⅰ～Ⅱ期 24 179.62±30.98 7.376 0.000 452.73±30.46 11.637 0.000 697.02±50.46 15.291 0.000Ⅲ～Ⅳ期 36 239.35±30.56 546.49±30.65 898.39±49.65腫瘤直徑 ≥5 cm 45 239.98±41.37 7.630 0.000 518.35±29.98 8.407 0.000 831.34±50.66 8.633 0.000<5 cm 15 151.49±30.56 443.12±30.12 700.59±51.23

3 討論

肝細胞癌是一種死亡率極高的惡性腫瘤, 手術雖然能夠延長患者的生命, 但極易復發, 腫瘤轉移和侵襲是該病復發的重要影響因素, 所以了解有關腫瘤轉移和侵襲相關的指標, 以便尋求相關干預措施［9］。

李長生等［10］選擇了153 例患者分3 組進行實驗,將其3 組治療前后的MMP-9 和VEGF 水平進行對比發現, 治療后, 肝細胞癌患者的MMP-9 和VEGF 水平均有所下降, 在本文實驗中, 同樣發現與治療前相比,患者的MMP-9 和VEGF 水平得到降低, 本文實驗結果與李長生等［10］結果一致, 這說明通過治療, 可改善患者的MMP-9 和VEGF 水平, 所以通過檢測MMP-9 和VEGF 水平情況, 即可判斷患者肝細胞狀況。此外, 在本實驗中還發現ECM1 的水平變化也能反映患者肝細胞健康情況。分析原因如下：血管不僅能夠為腫瘤細胞提供充足的營養物質, 還能夠為各個器官組織輸送癌細胞, 進而使得其發生轉移和分化［11］。內皮細胞的生長發育、浸潤以及基底膜的降解過程是血管形成過程最為重要的環節, MMP-9、VEGF 是血管形成過程中的不可缺少的因子, 能夠保障血管的再生和發展, 其中VEGF 是對于血管調控能力較強的一種因子, 特異性高, 能夠與血管內皮細胞表面的受體特異性結合, 進而促進細胞發生有絲分裂, 促進內皮細胞增殖, 提升血管的通透性, 促進新生血管生成, 進而會滿足腫瘤細胞轉移、生長的需要, 所以, 在患有腫瘤的患者體內,VEGF 水平較高［12］。MMP-9 是一種蛋白水解酶, 能夠有效降解、破壞細胞質基質, 促進腫瘤細胞的轉移和侵襲, 同時, 其還能夠提高內皮細胞的活性, 參與到腫瘤細胞血管的生長中, 有效促進肝癌細胞的生長和轉移, 所以其在腫瘤患者體內水平也比較高［13］。ECM1是一種分泌性糖蛋白, 能夠參與血管生成、腫瘤細胞分化過程, 促進腫瘤細胞發生轉移, 主要指通過抑制金屬蛋白酶組織抑制劑表達, 進而使得MMP-9 水平提升, 加速細胞質基質的降解, 從而促進腫瘤細胞發生轉移［14］, 而本次實驗采用的治療藥物為甲磺酸阿帕替尼,其能夠抑制酪氨酸激酶激活, 阻礙細胞周期進程, 且能夠有效抑制肝癌細胞的增殖過程, 殺滅腫瘤細胞, 從而VEGF、ECM1、MMP-9 的水平均下降, 所以通過檢測機體血清中VEGF、ECM1、MMP-9 水平, 即可判斷機體患病狀況。

此外, 在本實驗中發現患者的年齡、性別均與ECM1、MMP-9、VEGF 水平無關, 但不同血管侵犯、淋巴結轉移、TNM 分期、Edmondson 分期和腫瘤直徑患者ECM1、MMP-9、VEGF 水平比較差異具有統計學意義(P<0.05)。分析原因如下：隨著患者年齡的增加, 其各項生理機能會發生退化, 但是癌細胞發展情況以及直徑大小等并不會有所變化；同樣, 性別也和癌細胞的生長發育情況無關, 所以患者血清中的ECM1、MMP-9、VEGF 水平并不會因為年齡、性別的不同而有所差異［15］。由于淋巴結系統是人體免疫防御屏障,能夠保護機體免受侵害, 具有殺滅腫瘤、炎癥作用, 因此當其發生轉移時, 將會導致患者病情惡化, 腫瘤發生轉移, 所以患者血清中的ECM1、MMP-9、VEGF 水平會受到影響；腫瘤直徑越大, 其分化的速度越快, 所以患者的腫瘤生長越快, 腫瘤越嚴重, 故患者的血清指標會發生變化；一般良性腫瘤并不會發生血管侵犯,受到侵犯的多為惡性腫瘤, 說明此時患者的癌細胞已穿透患者的血管壁, 在血管內部形成癌栓, 進而會隨血液留至患者各處器官和組織中, 病情惡化, 進而其ECM1、MMP-9、VEGF 水平較高；TNM 分期是根據腫瘤大小、血管侵犯程度以及淋巴結轉移情況進行評估的, 由于上文已介紹血管侵犯程度、淋巴結轉移情況和腫瘤直徑情況均會影響患者血清ECM1、MMP-9、VEGF 水平, 所以TNM 分期不同, 患者血清ECM1、MMP-9、VEGF 水平也會有所變化；同時, Edmondson分期反映的是肝細胞癌的惡化程度, 其等級越高, 說明患者病情惡化越嚴重, 所以根據Edmondson 分期, 可判斷患者病情情況, 故分期變化會影響患者血清ECM1、MMP-9、VEGF 指標水平變化［16］。

綜上所述, ECM1、MMP-9、VEGF 三者相互作用可促進肝癌細胞的轉移, 可根據其水平情況, 了解患者肝細胞、肝功能健康狀況。