LAMP在下呼吸道感染病原菌快速檢測中的臨床應(yīng)用

雷星 龍麗

[摘要]?目的?利用環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增檢測（loop?mediated?isothermal?amplification，LAMP）即呼吸道病原菌核酸聯(lián)合檢測法（13聯(lián)）分析痰標(biāo)本病原菌的檢出情況，為臨床診療提供病原學(xué)循證依據(jù)。方法?選取2022年1月至12月銅仁市人民醫(yī)院收治的1642例下呼吸道感染患者作為研究對象，采集痰標(biāo)本/肺泡灌洗液進(jìn)行LAMP（13聯(lián)）檢測，分析呼吸道病原菌檢出情況及其與性別、年齡、季節(jié)的關(guān)系。結(jié)果?13種呼吸道病原菌的總體檢出率男性明顯高于女性（P<0.01）。在不同年齡組中，3～6歲患者流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌的檢出率、6～18歲患者肺炎支原體的檢出率、>60歲患者耐甲氧西林葡萄球菌、嗜麥芽窄食單胞菌和肺炎克雷伯菌的檢出率均明顯高于其他組（P<0.05）。在不同季節(jié)組中，肺炎鏈球菌和肺炎衣原體好發(fā)于春季，肺炎支原體在秋節(jié)感染率最高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論?LAMP可快速檢測出病原菌，為下呼吸道感染的預(yù)防及臨床診療提供病原學(xué)依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]?下呼吸道感染；常見病原菌；環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增檢測

[中圖分類號]?R743.3??????[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]?A??????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2024.12.014

Clinical?application?of?LAMP?in?rapid?detection?of?pathogens?in?lower?respiratory?tract?infections

LEI?Xing，?LONG?Li

Department?of?Laboratory，?Tongren?City?Peoples?Hospital，?Tongren?554300，?Guizhou，?China

[Abstract]?Objective?Loop?mediated?isothermal?amplification?（LAMP）?was?used?to?detect?the?distribution?of?pathogens?in?sputum?samples，namely?combined?nucleic?acid?detection?of?respiratory?pathogens?（13?pairs），?so?as?to?provide?provide?reference?for?clinical?accurate?diagnosis?and?treatment.?Methods?A?total?of?1642?patients?with?lower?respiratory?tract?infection?admitted?to?Tongren?City?Peoples?Hospital?from?January?to?December?in?2022?were?selected.?Each?patient?collected?sputum?specimens/?bronchoalveolar?for?detection?by?using?LAMP?（13?pairs）.?The?detection?of?pathogenic?bacteria?in?respiratory?tract?and?the?relationship?with?sex，?age?and?season?were?analyzed.?Results?The?overall?detection?rate?of?13?respiratory?pathogens?was?significantly?higher?in?males?than?in?females?（P<0.01）;?In?different?age?groups，?the?detection?rates?of?Haemophilus?influenzae?and?Streptococcus?pneumoniae?in?patients?aged?3-6，?Mycoplasma?pneumoniae?in?patients?aged?6-18，?and?methicillin-resistant?Staphylococcus?aureus，?Streptococcus?maltophilus，?and?Klebsiella?pneumoniae?in?patients?aged?over?60?were?significantly?higher?than?those?in?other?groups?（P<0.05）;?In?different?seasonal?groups，?Streptococcus?pneumoniae?and?Chlamydia?pneumoniae?were?more?prevalent?in?spring，?while?Mycoplasma?pneumoniae?had?the?highest?infection?rate?in?autumn，?and?the?differences?were?statistically?significant?（P<0.05）.?Conclusion?LAMP?can?be?used?to?detect?the?pathogen?rapidly?and?provide?the?basis?for?clinical?diagnosis?and?treatment.

[Key?words]?Lower?respiratory?tract?infection;?Common?pathogens;?Loop?mediated?isothermal?amplification

下呼吸道感染是由病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體等病原菌入侵呼吸道引起的臨床常見的感染性疾病，在世界十大疾病死率中排名第4位。盡早啟用有效的干預(yù)措施對下呼吸道感染的防治具有重要意義[1]。由于不同病理生理條件下病原菌存在流行病學(xué)差異，影響疾病早期的診療，因此快速、高效的檢測手段顯得尤為重要。目前病原菌監(jiān)測主要采用傳統(tǒng)的細(xì)菌分離培養(yǎng)法，該方法用時長、操作復(fù)雜，且陽性率低，難以滿足臨床的診療需求[2]。環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增檢測（loop?mediated?isothermal?amplification，LAMP）作為一種新興檢測技術(shù)，擴(kuò)增效率高、反應(yīng)時間短、特異性強(qiáng)，可快速、準(zhǔn)確地檢測出下呼吸道感染病原菌（包括單一和混合的病原菌感染），極大彌補(bǔ)了傳統(tǒng)方法的不足。本研究應(yīng)用LAMP（13聯(lián)）檢測1642例疑似下呼吸道感染患者樣本中13種常見病原體，分析研究其分布特點，為臨床診療提供詢證依據(jù)。

1??資料與方法

1.1??一般資料

收集2022年1月至12月在銅仁市人民醫(yī)院門診及住院部就診的1642例急性下呼吸道感染患者作為研究對象，其中男1002例，女640例；年齡0～89歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①首發(fā)癥狀以發(fā)熱，咳嗽、咳黃膿痰為主；②白細(xì)胞總數(shù)和（或）中性粒細(xì)胞比例增高；③胸部影像學(xué)提示有下呼吸道感染表現(xiàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：具有非感染原因如心力衰竭、肺水腫等或病毒所致的下呼吸道的影像學(xué)表現(xiàn)。本研究經(jīng)銅仁市人民醫(yī)院倫理委員會審批通過（倫理審批號：TSYGJZ2021-5），所有患者均簽署知情同意書。

1.2??方法

1.2.1??痰標(biāo)本的采集??痰標(biāo)本的采集需在各病區(qū)專業(yè)護(hù)士的指導(dǎo)下進(jìn)行，對昏迷或咳痰能力差無法自主咳痰者采用纖支鏡或肺泡灌洗法采集。痰液留取成功后由專業(yè)人員涂片染色并在低倍鏡下觀察，以白細(xì)胞>25個/LP，鱗狀上皮細(xì)胞<10個/LP，或鱗/白比例<1∶2.5為判定標(biāo)準(zhǔn)，若不合格則重新留取。

1.2.2??檢測方法??提取痰標(biāo)本中的核酸后使用呼吸道病原菌核酸檢測試劑盒（北京博奧晶典生物技術(shù)有限公司）及配套軟件、運用LAMP（13聯(lián)）進(jìn)行檢測，以陽性檢出率為統(tǒng)計指標(biāo)分析呼吸道病原菌的檢出情況及與性別、年齡、季節(jié)之間的關(guān)系。

1.3??統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS?26.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，比較采用c2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2??結(jié)果

2.1??病原菌的檢出情況

1642例患者中903例患者的病原菌檢測結(jié)果為陽性，病原菌檢出率為54.99%，排名前5位的病原菌分別為流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、耐甲氧西林葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌。其中檢測出1種病原菌的患者534例，占比59.13%；檢測出2種病原菌的患者317例，占比35.11；檢測出3種及以上病原菌的患者52例，占比5.76%；見表1。

2.2??病原菌與性別的關(guān)系

1642例患者中男1002例，女640例，男性患者陽性率為58.69%（588/1002），高于女性患者的49.21%（315/640），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（c2=14.133，P<0.01）；其中男性患者的流感嗜血桿菌、耐甲氧西林葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌檢出率均高于女性患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3??病原菌與年齡的關(guān)系

將患者按年齡劃分為0～3歲（n=1028）、3～6歲（n=211）、6～18歲（n=83）、18～60歲（n=162）、>60歲（n=158）5個年齡組，病原菌在上述5個年齡組中的檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（c2=17.124，P<0.01）；其中流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌以3～6歲最多見，耐甲氧西林葡萄球菌、嗜麥芽窄食單胞菌及肺炎克雷伯菌在>60歲的老年人群檢出最多，肺炎支原體感染在6～18歲的青少年中較為突出，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.4??不同季節(jié)病原菌檢出情況

以春、夏、秋、冬4個季節(jié)分組，患者檢出的陽性率分別為46.75%（88/189）、60.56%（253/418）、51.75%（227/438）、58.82%（351/597），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（c2=18.714，P<0.01）。除嗜肺軍團(tuán)菌外，其余12種呼吸道病原菌在4個季節(jié)均有檢出，其中肺炎鏈球菌和肺炎衣原體好發(fā)于春季，肺炎支原體在秋節(jié)檢出率最高，陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表4。

3??討論

1642例痰標(biāo)本中共檢出陽性標(biāo)本903例，總陽性率為54.99%，檢測出1種病原菌的患者占比59.13%，2種及以上病原菌的患者占比40.86%；多為6歲以下兒童，可能與患兒年齡偏小、免疫力較差有關(guān)[3]。檢出排前5位病原菌分別為流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、耐甲氧西林葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌，男性患者總體陽性率為58.69%，高于女性患者的49.21%，與段肖麗等[4]研究基本一致；其中男性患者流感嗜血桿菌、耐甲氧西林葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌的檢出率均高于女性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與顧錦等[5]報道一致。有研究表明吸煙、飲酒、手衛(wèi)生管理是男性比女性更容易發(fā)生下呼吸道感染的3個重要因素，盡早戒煙、戒酒及正確的洗手方式等可很好地預(yù)防下呼吸道感染，尤其是對于老年男性患者[6]。

本研究中，13種呼吸道病原菌在0～3歲、3～6歲、6～18歲、18～60歲及>60歲5個年齡組的檢出情況存在顯著差異，其中流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌以3～6歲的學(xué)齡前兒童最多見，這與李巖等[7]研究基本一致。流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌為13種病原菌中檢出最多的2種病原體，3～6歲兒童由于呼吸系統(tǒng)發(fā)育相對欠完善、免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未健全，體質(zhì)普遍偏弱；加之與同齡兒童間的接觸較多，更容易受呼吸道病原菌的感染，群體間的交叉感染風(fēng)險也較大。研究發(fā)現(xiàn)加強(qiáng)戶外活動鍛煉，每天的運動時間超過3h，均衡飲食及疫苗接種均可減少兒童呼吸道感染的發(fā)生[8]。同時盡早查明病原菌，合理使用抗菌藥物對兒童呼吸道感染的治療及減少細(xì)菌的耐藥也非常關(guān)鍵[6]。耐甲氧西林葡萄球菌、嗜麥芽窄食單胞菌及肺炎克雷伯菌在>60歲的老年人群檢出最多。該類患者的痰標(biāo)本多來源于呼吸內(nèi)科、重癥醫(yī)學(xué)科、神經(jīng)外科等，患者的基礎(chǔ)疾病多、病情重、住院時間長，醫(yī)院獲得性感染機(jī)會增加，與2021年全國細(xì)菌耐藥監(jiān)測報告數(shù)據(jù)基本吻合[9]。

在春、夏、秋、冬四季中，患者的病原菌陽性檢出率分別為46.75%（88/189）、60.56%（253/418）、51.75%（227/438）、58.82%（351/597），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。除嗜肺軍團(tuán)菌外，其余12種病原菌在四季均有檢出。其中肺炎鏈球菌好發(fā)于春、冬季，在夏季檢出率明顯下降，提示春、冬季尤其要加強(qiáng)對肺炎鏈球菌防控措施，可在春、冬季提前接種肺炎鏈球菌疫苗，及時提供有效的主動免疫，降低發(fā)病風(fēng)險；肺炎支原體在夏、秋季的檢出率較為突出，在冬季檢出率出現(xiàn)回落，春季的檢出率最低，與左麗娜等[10]研究基本一致。鄭素娟等[11]研究發(fā)現(xiàn)，肺炎支原體對溫、濕度比較敏感，夏季溫、濕度驟然升高，助長其繁殖和傳播，增加感染機(jī)會；加上夏季人們室外活動減少，使病原體更易侵入人體。定時打開門窗自然通風(fēng)，減少空調(diào)的使用，可有效降低室內(nèi)空氣中微生物的數(shù)量；同時佩戴口罩、保持有效安全社交距離（1m以上）也是減少肺炎支原體感染簡單、有效的方法。

綜上所述，通過對2022年銅仁市人民醫(yī)院疑似下呼吸道感染患者病原菌數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，病原菌的分布在性別、年齡、季節(jié)方面存在顯著差異，利用LAMP可快速檢測下呼吸道感染的病原菌，為臨床預(yù)防及診斷、盡早啟動針對性抗感染治療提供可靠依據(jù)，值得深入探討和應(yīng)用。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻(xiàn)]

[1] LI?Z?J，?ZHANG?H?Y，?REN?L?L，?et?al.?Etiological?and?epidemiological?features?of?acute?respiratory?infections?in?China[J].?Nat?Commun，?2021，?12（1）：?5026–5030.

[2] 陳鵬翔.?重癥醫(yī)院獲得性肺炎的病原菌檢測方法對比及病原學(xué)特點[D].?西寧：?青海大學(xué)，?2020.

[3] 白思遠(yuǎn)，?郭素香，?陳慧.?兒童反復(fù)呼吸道感染危險因素的Meta分析[J].?中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，?2021，?31（12）：?1811–1816.

[4] 段肖麗，?周漫，?郭曉倩，?等.?12828例疑似下呼吸道感染患者病原體檢測結(jié)果分析[J].?國際呼吸雜志，?2022，?42（13）：?1013–1019.

[5] 顧錦，?郭會，?周圍，?等.?環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)在下呼吸道感染常見病原體檢測中的應(yīng)用[J].?臨床檢驗雜志，?2021，?39（1）：?12–16.

[6] GBD?2019?LRI?Collaborators.?Age-sex?differences?in?the?global?burden?of?lower?respiratory?infections?and?risk?factors，?1990–2019：?Results?from?the?Global?Burden?of?Disease?Study?2019[J].?Lancet?Infect?Dis，?2022，?22（11）：?1626–1647.

[7] 李巖，?韓光躍，?姜彩肖，?等.?河北省石家莊地區(qū)住院兒童肺炎病例病原譜及流行特征分析[J].?國際病毒學(xué)雜志，?2021，?28（1）：?23–27.

[8] 關(guān)宏巖，?趙星，?屈莎，?等.?學(xué)齡前兒童（3～6歲）運動指南[J].?中國兒童保健雜志，?2020，?28（6）：?714–720.

[9] 佚名.?2021年全國細(xì)菌耐藥監(jiān)測報告（簡要版）[R/OL].?北京：?國家衛(wèi)生計生委合理用藥專家委員會，?2021.?https：//www.carss.cn/Report/Details？aId=862.

[10] 左麗娜，?陳碧，?陳玉玲，?等.?利用核酸恒溫擴(kuò)增技術(shù)檢測下呼吸道感染病原菌的分布特征[J].?中國校醫(yī)，?2021，?35（2）：?93–96.

[11] 鄭素娟，?張雅潔.?2018–2020年廣州市海珠區(qū)肺炎支原體感染的流行病學(xué)分析[J].?國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，?2021，?42（14）：?1765–1768，?1772.

（收稿日期：2023–06–18）

（修回日期：2024–04–03）