HPV DNA、HPV E6/E7蛋白和TCT在宮頸上皮內瘤變及宮頸癌篩查中的價值

[摘要]"目的"探討人乳頭瘤病毒（human"papilloma"virus，HPV）"DNA、HPV"E6/E7蛋白和液基薄層細胞學檢查（thin-prep"cytology"test，TCT）在宮頸上皮內瘤變（cervical"intraepithelial"neoplasia，CIN）及宮頸癌篩查中的價值。方法"選取2021年7月至2022年6月于諸暨市人民醫院婦科接受早期宮頸癌篩查的成年女性190例為研究對象，分別進行HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白及TCT檢測，并進一步行陰道鏡活檢檢查。比較不同病變患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白和TCT對高級別病變的診斷效能。結果"CIN3及宮頸癌患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢查及三者聯合檢測的陽性率均顯著高于宮頸炎患者（Plt;0.05），宮頸癌患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢查及三者聯合檢測的陽性率均顯著高于CIN1患者（Plt;0.05）。CIN2+患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT及三者聯合檢測的陽性率顯著高于CIN1–患者。HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT三者聯合診斷高級別病變的敏感度、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為90.80%、30.10%、52.32%、79.48%。結論"HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白及TCT可作為篩查宮頸癌和癌前病變的手段，且三者聯合檢測的敏感度最高。

[關鍵詞]"HPV"DNA；HPV"E6/E7蛋白；液基薄層細胞學檢查；上皮內瘤變；宮頸癌篩查

[中圖分類號]"R737.3""""""[文獻標識碼]"A""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.10.007

Value"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"TCT"in"cervical"intraepithelial"neoplasia"and"cervical"cancer"screening

HE"Liqun，"ZHANG"Shuyun，"YUAN"Jing，"LYU"Yanting

Department"of"Pathology，"Zhuji"People’s"Hospital，"Zhuji"311800，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"investigate"the"value"of"human"papilloma"virus"（HPV）"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"thin-prep"cytology"test"（TCT）"in"cervical"intraepithelial"neoplasia"（CIN）"and"cervical"cancer"screening."Methods"A"total"of"190"adult"women"who"received"early"cervical"cancer"screening"in"Department"of"Gynecology，"Zhuji"People’s"Hospital"from"July"2021"to"June"2022"were"selected"as"the"study"objects."HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"TCT"were"detected，"respectively，"and"further"colposcopic"biopsy"was"performed."The"diagnostic"efficacy"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"TCT"in"patients"with"different"lesions"were"compared."Results"The"positive"rates"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein，"TCT"and"combined"detection"in"CIN3"and"cervical"cancer"patients"were"significantly"higher"than"those"in"cervicitis"patients"（Plt;0.05）."The"positive"rates"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein，"TCT"and"combined"detection"in"cervical"cancer"patients"were"significantly"higher"than"those"in"CIN1"patients"（Plt;0.05）."The"positive"rates"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein，"TCT"and"combined"detection"in"CIN2+"patients"were"significantly"higher"than"those"in"CIN1–"patients."The"sensitivity，"specificity，"positive"predictive"value"and"negative"predictive"value"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"TCT"in"the"diagnosis"of"high-grade"lesions"were"90.80%，"30.10%，"52.32%"and"79.48%，"respectively."Conclusion"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"TCT"can"be"used"as"screening"methods"for"cervical"cancer"and"precancerous"lesions，"with"the"combination"of"the"three"being"the"most"sensitive.

[Key"words]"HPV"DNA;"HPV"E6/E7"protein;"Thin-prep"cytology"test;"Intraepithelial"neoplasia;"Cervical"cancer"screening

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一。據統計，中國每年因宮頸癌死亡的女性患者高達3萬[1]。宮頸癌發現越早，治愈率和生存率越高，因此早期篩查宮頸癌并及時干預具有重要意義[2]。人乳頭瘤病毒（human"papilloma"virus，HPV）DNA是該病毒的遺傳物質，通過檢測HPV"DNA可了解患者的HPV感染情況及其分型[3]。雖然HPV"DNA檢測有較高的敏感度，但對高級別病變特異性不高[4]。HPV"E6/E7基因是早期轉錄基因，可用于評估HPV感染程度，通過檢測患者HPV"E6/E7蛋白表達，宮頸癌的檢出率明顯提高[5]。隨著HPV感染進展為宮頸上皮內瘤變（cervical"intraepithelial"neoplasia，CIN）及宮頸癌，宮頸上皮可見DNA倍體異常細胞。液基薄層細胞學檢查（thin-prep"cytology"test，TCT）采集的是患者宮頸表面脫落細胞，且因檢查人員操作失誤易造成漏診誤診[6]。早期篩查中將HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT三者聯合或可提高檢查的準確性、敏感度和特異性。

1""資料與方法

1.1""一般資料

選取2021年7月至2022年6月于諸暨市人民醫院婦科接受早期宮頸癌篩查的成年女性190例為研究對象。納入標準：①有性生活史；②有陰道分泌物增多、白帶異常、陰道出血等癥狀；③自愿接受HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測；④行陰道鏡子宮頸病理活檢者；⑤年齡18～68歲。排除標準：①患有其他惡性腫瘤；②做過2次以上TCT結果顯示為宮頸癌；③妊娠期或哺乳期女性；④有自身免疫性疾病或正在接受免疫抑制治療者；⑤不愿意配合本研究；⑥拒絕進行宮頸活檢和行陰道鏡檢查者。本研究經諸暨市人民醫院醫學倫理委員會批準（倫理審批號：[2023]"醫倫第（0602）號），所有受試者均知情并簽署知情同意書。

1.2""方法

1.2.1""HPV"DNA檢測""刷取患者的宮頸脫落細胞放入培養皿中，HPV基因擴增后，采用HPV反向點雜交法檢測HPV"DNA，使用亞能全自動核酸分子雜交儀及配套試劑進行分型檢測，共檢測16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68等高危型。任一上述分型HPV"DNA≥1pg/ml即為HPV"DNA陽性。

1.2.2""HPV"E6/E7蛋白檢測""蛋白質印跡法檢測16、18高危型E6/E7蛋白的表達情況，借助Quantity"One"Software進行灰度值掃描和分析，當任一高危型HPV"E6或E7蛋白相對表達量≥0.1，則HPV"E6/E7蛋白結果為陽性；反之為陰性。

1.2.3""TCT檢測""被檢者取樣前3d應避免陰道沖洗及性生活，避開經期。患者膀胱截石位，TCT專用取材刷按順時針方向在患者宮頸口處采集宮頸脫落上皮細胞，置于保存液中，制作薄層細胞涂片，涂片固定染色完成后進行TCT檢測。診斷TCT陽性的標準：非典型鱗狀上皮細胞不除外高度鱗狀上皮內病變、低級別鱗狀上皮內病變、高級別鱗狀上皮內病變及宮頸癌判定為TCT陽性。

1.2.4""三者聯合陽性""HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測任意一種陽性即為三者聯合陽性。

1.2.5""陰道鏡子宮頸病理活檢""被檢者取樣前3d應避免陰道沖洗及性生活，避開經期。擴陰器充分暴露子宮頸，在3、6、9、12點對疑似子宮頸內的非正常組織進行病理活檢。病理判定標準采用宮頸上皮內病變三級分類法。慢性宮頸炎：上皮及間質增生，無異型細胞；CIN1：上皮下1/3，輕度異型細胞，較少核分裂；CIN2：上皮下1/3～2/3，中度異型細胞，較多核分裂；CIN3：上皮下2/3至全層，重度異型細胞，核分裂象多；宮頸癌：CIN3基礎上癌變細胞至上皮下基底層。將CIN2及以上病變（即CIN2+，包括CIN2、CIN3和宮頸癌）定義為高級別病變，CIN1及以下病變（即CIN1–，包括宮頸炎及CIN1）定義為低級別病變。本研究以陰道鏡活檢病理報告為金標準。

1.3""統計學方法

采用SPSS"20.0軟件對數據進行統計分析。計數資料以例數（百分率）[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗。統計分析HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢查的敏感度、特異性和陽性預測值。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2""結果

2.1""不同病變患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測及三者聯合檢測的陽性率比較

CIN3及宮頸癌患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測及三者聯合檢測的陽性率均顯著高于宮頸炎患者（Plt;0.05），宮頸癌患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測及三者聯合檢測的陽性率均顯著高于CIN1患者（Plt;0.05），見表1。

2.2""CIN2+和CIN1-患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測及三者聯合檢測的陽性結果比較

CIN2+患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測及三者聯合檢測的陽性例數均顯著高于CIN1–患者，見表2。

2.3""HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT及三者聯合對高級別病變的診斷價值

HPV"DNA檢測診斷高級別病變的敏感度、特異性分別為91.95%、39.81%；HPV"E6/E7蛋白分別為77.01%、59.22%；TCT分別為67.81%、65.04%；三者聯合檢測分別為90.80%、30.10%，見表3。

3""討論

宮頸癌的發生與HPV長期反復感染密切相關[7-10]。宮頸癌的發生與多種因素息息相關，如HPV在人體組織內的病毒載量、HPV分型及活躍度[11-12]。宮頸癌嚴重危害女性的生命健康，合理的篩查方法有利于及時檢出高危患者，早發現、早治療，改善患者預后，延長患者的生存期。目前，臨床上篩查宮頸癌的方法很多，但單一檢查存在不足，漏診或過度治療的情況時有發生。聯合幾種篩查方法可提高準確性，降低漏診率。宮頸活檢是診斷子宮頸癌及癌前病變的金標準，但其為有創操作且檢查費用較高[13-14]。

HPV感染是宮頸癌發病的必要條件[15]。世界衛生組織指南建議將HPV"DNA檢測作為預防宮頸癌的主要篩查方法。與細胞學檢查相比，基于HPV的宮頸癌篩查具有較高的臨床敏感度和較高的陰性預測值，但其臨床特異性較低[16-17]。HPV篩查的臨床特異性較低可導致不必要的陰道鏡檢查轉診，因此HPV陽性女性目前通過子宮頸涂片檢查進行分類，只有那些確診宮頸細胞學異常的女性才接受陰道鏡檢查。在HPV陽性女性分診中使用巴氏涂片或TCT可提高特異性，但其性能取決于操作者，且該方法不易重復和標準化。此外，宮頸細胞學檢查不能對自行采集的樣本進行檢測，而這些樣本越來越多地被引入篩查項目中，以提高女性的參與度。

高危型HPV感染被認為是宮頸癌發生的必要但非充分條件。與宮頸細胞學相比，HPV"DNA檢測可提高臨床敏感度，但臨床特異性較低，可預測女性患宮頸癌的風險增加。目前，人們正在大力尋找具有更高特異性的生物標志物，能夠將短暫性、臨床上無關的高危HPV感染女性與有較高風險進展為宮頸癌的女性區分開來。HPV"E6/E7蛋白表達是導致宮頸癌發展的重要因素，HPV"E6/E7蛋白檢測作為早期篩查宮頸癌的一種新技術，能有效檢測出宮頸癌的病變程度，但E6/E7蛋白的表達水平受多種因素影響，如患者的免疫水平及E6/E7癌基因的表達水平。在檢測過程中能提高一定的篩查效率，去除一些假陽性結果[18]。但HPV"E6/E7蛋白檢測呈陽性是一個定性結果，對其定量的最佳診斷還存在爭議。目前臨床上宮頸癌篩查多采用TCT檢測，但該方法結果受客觀因素影響大，如涂片質量、閱片、取標本技術及診斷醫生水平等，假陰性率高、準確率底，有漏診可能[19]。

本研究結果顯示，宮頸癌患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測陽性率均顯著高于宮頸炎和CIN1患者，究其原因早期宮頸病變中病毒處于相對靜默期，而CIN1可自行消退，因此其陽性率較低。本研究結果發現，單一檢測方法在高級別病變篩查中具有一定的價值，但HPV"DNA檢測比HPV"E6/E7蛋白、TCT的特異性高，而敏感度較低，三者聯合可提高敏感度，既提高對不同級別宮頸病變的辨別能力，同時也降低漏診風險，可有效避免對疾病的誤判，減輕患者的心理負擔，但三者聯合檢測可增加相應的費用。

綜上所述，HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白及TCT可作為篩查宮頸癌和癌前病變的手段，聯合檢測可提高宮頸病變篩查的敏感度。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻]

[1] ZHENG"R"S，"ZHANG"S"W，"ZENG"H"M，"et"al."Cancer"incidence"and"mortality"in"China，"2016[J]."J"Natl"Cancer"Cent，"2022，"2（1）："1–9.

[2] 王淑偉，"殷進軍，"岳青青，"等."早期宮頸癌術后不同治療方法的治療效果分析[J]."社區醫學雜志，"2023，"21（9）："466–471.

[3] 耿晨，"陳鐲，"侍孝遠."宿遷地區女性人群中HPV病毒感染情況及亞型分析[J]."系統醫學，"2022，"7（19）："176–179.

[4] 孫俊."腫瘤標志物聯合TCT與HPV"DNA檢測對子宮頸癌及癌前病變的診斷價值[J]."中國衛生標準管理，"2022，"13（21）："50–54.

[5] 劉丹丹，"孫健，"鄔劍."子宮頸癌及癌前病變中E6/E7"mRNA的表達水平及與HR-HPV感染的相關性分析[J]."中國醫學創新，"2023，"20（1）："127–131.

[6] 劉娜，"曹付梅，"孫夏，"等."液基薄層細胞學檢查聯合人乳頭瘤病毒檢測對早期宮頸癌的診斷價值[J]."癌癥進展，"2023，"21（13）："1482–1485.

[7] GROVER"S，"MEHTA"P，"WANG"Q，"et"al."Association"between"CD4"count"and"chemoradiation"therapy"outcomes"among"cervical"cancer"patients"with"HIV[J]."J"Acquir"Immune"Defic"Syndr，"2020，"85（2）："201–208.

[8] 劉舒舒，"劉飛飛，"石一扭呷."HIV感染合并宮頸癌血清中T細胞亞群的表達[J]."中國性科學，"2019，"28（10）："101–104.

[9] 祝榮，"楊霞，"何佳萌，"等."宮頸癌患者T淋巴細胞亞群與自然殺傷細胞水平和病情的相關性[J]."中國臨床保健雜志，"2018，nbsp;21（2）："172–175.

[10] DERBIE"A，"MEKONNEN"D，"WOLDEAMANUEL"Y，"et"al."HPV"E6/E7"mRNA"test"for"the"detection"of"high"grade"cervical"intraepithelial"neoplasia"（CIN2+）："A"systematic"review[J]."Infect"Agent"Cancer，"2020，"15（7）："9–18.

[11] KWAN"T"T，"CHEUNG"A"N，"LO"S"S，"et"al."Psychological"burden"of"testing"positive"for"high-risk"human"papillomavirus"on"women"with"atypical"cervical"cytology："A"prospective"study[J]."Acta"Obstet"Gynecol"Scand，"2011，"90（5）："445–451.

[12] LIU"J，"YANG"T，"HU"Y，"et"al."The"value"of"HPV"E6/E7"mRNA"quantitative"analysis"in"distinguishing"high-grade"cervical"squamous"intraepithelial"lesions"from"low-grade"cervical"squamous"intraepithelial"lesions[J]."J"Virol"Methods，"2021，"289："114014.

[13] 唐夢瑩，"尤志學."妊娠期子宮頸癌前病變診治的研究進展[J]."中華婦產科雜志，"2020，"55（6）："420–424.

[14] BARON"C，"HENRY"M，"TAMALET"C，"et"al."Relationship"between"HPV"16，"18，"31，"33，"45"DNA"detection"and"quantitation"and"E6/E7"mRNA"detection"among"a"series"of"cervical"specimens"with"various"degrees"of"histological"lesions[J]."J"Med"Virol，"2015，"87（8）："1389–1396.

[15] MEIJER"C"J，"BERKHOF"J，"CASTLE"P"E，"et"al."Guidelines"for"human"papillomavirus"DNA"test"requirements"for"primary"cervical"cancer"screening"in"women"30"years"and"older[J]."Int"J"Cancer，nbsp;2009，"124（3）："516–520.

[16] DIJKSTRA"M"G，"SNIJDERS"P"J，"ARBYN"M，"et"al."Cervical"cancer"screening："On"the"way"to"a"shift"from"cytology"to"full"molecular"screening[J]."Ann"Oncol，"2014，"25（5）："927–935.

[17] DILLNER"J，"REBOLJ"M，"BIREMBAUT"P，"et"al."Long"term"predictive"values"of"cytology"and"human"papillomavirus"testing"in"cervical"cancer"screening："Joint"European"cohort"study[J]."BMJ，"2008，"337："a1754.

[18] 蒙志平，"黎勇明，"楊玲，"等."HPV"DNA和HPV"E6/E7"mRNA檢測在宮頸癌篩查中的應用價值探討[J]."實用臨床醫藥雜志，"2016，"20（11）："76–79.

[19] 沈丹華."宮頸鱗狀細胞前驅病變命名及其相應臨床處理原則--基于《第四版世界衛生組織女性生殖系統腫瘤分類》[J]."中華婦幼臨床醫學雜志（電子版），"2016，"12（4）："379–382.

（收稿日期：2023–05–29）

（修回日期：2024–03–07）