俞氏清熱活血方對潰瘍性結腸炎模型大鼠結腸黏膜的影響

[摘要]"目的"探討俞氏清熱活血方灌腸對潰瘍性結腸炎（ulcerative"colitis，UC）大鼠結腸黏膜的影響。方法"30只Wistar大鼠分為空白對照組、模型組、美沙拉嗪組和中藥高、中、低劑量組，每組各5只；使用三硝基苯磺酸造模成功后，分別予蒸餾水、美沙拉嗪混懸液與高、中、低濃度俞氏清熱活血方灌腸14d，每日記錄各組大鼠的一般情況及體質量變化，14d后比較各組大鼠的結腸黏膜損傷指數（colon"macroscopic"damage"index，CMDI）及鏡下黏膜損傷評分。結果"與空白對照組比較，模型組大鼠體質量顯著下降（Plt;0.05）。空白對照組大鼠的飲水、攝食、活動正常，毛色潤澤，大便正常；模型組和各給藥組大鼠均可見肛門污穢、有便血殘留、食欲下降、毛發凌亂、光澤暗淡等情況，灌腸治療后上述狀況均逐漸好轉。與空白對照組比較，模型組大鼠的CMDI及黏膜損傷評分顯著升高（Plt;0.05）；與模型組比較，美沙拉嗪組和中藥高、中、低劑量組大鼠的CMDI及黏膜損傷評分均顯著下降（Plt;0.05）。結論"俞氏清熱活血方可有效改善UC模型大鼠的腹瀉、黏液膿血便等臨床癥狀，減少結腸黏膜損傷，促進黏膜修復，對治療UC具有較好的療效。

[關鍵詞]"俞氏清熱活血方；潰瘍性結腸炎；結腸黏膜損傷指數；結腸黏膜損傷評分

[中圖分類號]"R574.1""""""[文獻標識碼]"A""""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.10.014

The"effect"of"Yu’s"Qingre"Huoxue"prescription"on"colonic"mucosa"of"ulcerative"colitis"model"rats

YANG"Yitian1，"CHEN"Wenjing2，"YE"Wei1

1.Department"of"Gastrointestinal，"Hangzhou"Hospital"of"Traditional"Chinese"Medicine"Affiliated"to"Zhejiang"Chinese"Medical"University，"Hangzhou"310007，"Zhejiang，"China;"2.The"Thirdnbsp;Clinical"School"of"Zhejiang"Chinese"Medical"University，"Hangzhou""310053，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"investigate"the"effect"of"Yu’s"Qingre"Huoxue"prescription"enema"on"colonic"mucosa"in"rats"with"ulcerative"colitis"（UC）."Methods"A"total"of"30"Wistar"rats"were"randomly"divided"into"blank"control"group，"model"group，"mesalazine"group，"Chinese"medicine"high-dose，"medium-dose"and"low-dose"groups"（5"rats"in"each"group）."After"successful"modeling"with"trinitrobenzene"sulfonic"acid，"the"rats"were"given"14"days"enema"with"distilled"water，"mesalazine"suspension，"and"high，"medium"and"low"concentration"Yu’s"Qingre"Huoxue"prescription."The"general"condition"and"weight"changes"of"rats"were"recorded"daily，"and"colon"macroscopic"damage"index"（CMDI）"and"mucosal"injury"score"under"microscope"of"rats"in"each"group"were"compared."Results"Compared"with"blank"control"group，"the"weight"of"rats"in"model"group"decreased"significantly"（Plt;0.05）."The"blank"control"group"had"normal"water"and"food"intake"and"activity，"glossy"fur"and"normal"stool."The"rats"in"model"group"and"each"administration"group"were"found"to"have"anal"fouling，"residual"blood"in"stool，"decreased"appetite，"messy"fur，"dim"luster"and"other"conditions，"and"the"above"conditions"were"gradually"improved"after"enema"treatment."Compared"with"blank"control"group，"the"CMDI"and"mucosal"injury"scores"of""model"group"were"significantly"increased"（Plt;0.05）."Compared"with"model"group，"CMDI"and"mucosal"injury"scores"of"mesalazine"group"and"Chinese"medicine"high-dose，"medium-dose"and"low-dose"groups"were"significantly"decreased"（Plt;0.05）."Conclusion"Yu’s"Qingre"Huoxue"prescription"can"effectively"improve"the"clinical"symptoms"of"diarrhea，"mucous，"pus"and"blood"stools"in"UC"model"rats，"reduce"the"damage"of"colonic"mucosa，"promote"mucosal"repair，"and"have"a"good"effect"on"the"treatment"of"UC"in"rats.

[Key"words]"Yu’s"Qingre"Huoxue"prescription;"Ulcerative"colitis;"Colon"macroscopic"damage"index;"Colonic"mucosal"injury"score

潰瘍性結腸炎（ulcerative"colitis，UC）是一種慢性非特異性炎癥性疾病，其病因不明，臨床主要表現為持續或反復發作的腹瀉、黏液膿血便并伴有消瘦、腹痛及不同程度的全身癥狀，反復發作可引起癌變[1]。腸鏡下可見連續性、彌漫性的結腸黏膜損傷（紅斑、充血、血管紋理消失、糜爛、黏膜脆性增加伴出血、潰瘍、瘢痕等），一般累及黏膜及黏膜下層，好發于直腸及乙狀結腸[2]。中醫中藥在UC的治療中發揮重要作用，俞尚德老先生總結多年臨床經驗，提出俞氏清熱活血方灌腸。本研究運用俞氏清熱活血方灌腸，觀察UC模型鼠的一般情況、結腸黏膜損傷指數（colon"macroscopic"damage"index，CMDI）及鏡下黏膜損傷評分，證實其臨床功效，為進一步研究提供數據支持。

1""材料與方法

1.1""實驗材料

1.1.1""實驗動物""SPF級Wistar大鼠30只，雄性，體質量180～200g，周齡6～8周，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，動物許可證號：SCXK（滬）2022-0004，實驗動物倫理審批號：ZJEY-"20210923-08。

1.1.2""藥物制備""俞氏清熱活血方、美沙拉嗪（法國愛的發制藥集團）均購自浙江中醫藥大學附屬杭州市中醫院中藥房及藥劑科，俞氏清熱活血方按配方（蒲公英、黃芩、敗醬草、紅藤、丹參各30g，半邊蓮、半枝蓮、薏苡仁各20g）分別制成高濃度（40g/kg）、中濃度（20g/kg）、低濃度（10g/kg）藥液備用，美沙拉嗪按濃度0.15g/kg制成混懸液備用。

1.2""實驗方法

1.2.1""實驗分組""將大鼠分為模型組、空白對照組、美沙拉嗪組及中藥高、中、低劑量組。

1.2.2""造模""適應性喂養后，大鼠禁食、不禁水24h。麻醉固定后將外徑0.2cm、長約15cm的輸液管從大鼠肛門逆行插入結腸內，深約8.0cm，一次性將100mg/kg三硝基苯磺酸（SIGMA公司，批號：SLCM5598，貨號：P2297）溶解于50%的乙醇0.25ml后注入大鼠結腸內，堵住肛門，輕揉大鼠腹部。然后將大鼠頭向下，身體傾斜45°，放置1min，再將大鼠放平；空白對照組大鼠用同樣方法，2ml生理鹽水灌腸。造模成功后按分組進行如下處理：空白對照組大鼠不處理；模型組大鼠予4ml蒸餾水灌腸；美沙拉嗪組大鼠予美沙拉嗪混懸液4ml灌腸；中藥高、中、低劑量組大鼠分別予相應濃度的中藥灌腸液4ml灌腸；每天1次，連續14d。

1.2.3""一般狀態觀察記錄""每日觀察并記錄大鼠的體質量、毛發、飲食、大便性狀等一般情況。

1.2.4""取材及損傷評分""灌腸14d后，末次給藥當晚大鼠禁食不禁水，次日上午空腹麻醉后剖取結腸，自肛門上2cm處往上剪取6～8cm結腸，沿腸系膜縱軸剪開腸腔，生理鹽水沖洗干凈，將腸黏膜向上平鋪，觀察炎癥及潰瘍發生情況并進行評分（按Wallace標準[3]）。留取病變最明顯的組織或黏膜修復組織或正常組織制成石蠟切片備用。

1.2.5""蘇木精-伊紅染色及病理評分""石蠟切片脫蠟入蘇木素染液染色，水洗，分化，水洗，返藍，流水沖洗后依次加入85%、95%的梯度酒精脫水各5min，再入伊紅染液中染色；最后脫水封片，顯微鏡鏡檢，圖像采集分析結果。評分標準按Geboes標準[4]。

1.3""統計學方法

采用SPSS"16.0統計軟件進行數據分析。所有數據以均數±標準差（）表示，計量資料若符合正態分布且符合方差齊性檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，進一步組間兩兩比較采用Tukey檢驗；若符合正態分布但方差不齊，則采用Dunnett’s"T3檢驗或獨立樣本t檢驗；若不符合正態分布，則采用Kruskal-Wallis"H檢驗。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2""結果

2.1""各組大鼠的一般狀態

自第2日起，與空白對照組比較，模型組大鼠體質量顯著下降（Plt;0.05）；在給藥周期內，與模型組比較，各給藥組大鼠體質量均無顯著變化（Pgt;0.05），見表1?？瞻讓φ战M大鼠的飲水、攝食、活動正常，毛色潤澤，大便正常。模型組和各給藥組大鼠均可見肛門污穢、便血殘留、食欲下降、毛發凌亂、光澤暗淡等情況，隨著灌腸治療后各給藥組大鼠上述癥狀均逐漸好轉。

2.2""各組大鼠的CMDI比較

與空白對照組比較，模型組大鼠的CMDI顯著升高（Plt;0.05）；與模型組比較，美沙拉嗪組和中藥高、中、低劑量組大鼠的CMDI均顯著下降（Plt;0.05），見圖1、圖2。

2.3""各組大鼠的結腸病理損傷評分

空白對照組大鼠的結腸組織結構基本正常，未見炎癥細胞浸潤，組織無明顯損傷；模型組大鼠的結腸組織結構遭到嚴重破壞，大量炎癥細胞浸潤，潰瘍、糜爛形成，隱窩缺失，嚴重水腫。與模型組比較，美沙拉嗪組大鼠的結腸損傷情況得到緩解，炎癥細胞浸潤至黏膜下層，隱窩部分缺失；中藥高、中、低劑量組大鼠的結腸組織損傷情況、潰瘍、糜爛、水腫等情況均出現不同程度的好轉，中藥高劑量組改善最明顯，見圖3。

與空白對照組比較，模型組大鼠的黏膜損傷評分顯著升高（Plt;0.05）；與模型組比較，美沙拉嗪組和中藥高、中、低劑量組大鼠的黏膜損傷評分均顯著下降（Plt;0.05），見圖4。

3""討論

近年來，炎癥性腸病在西方發達國家的發病率趨于穩定，而亞洲國家和其他發展中國家則呈上升趨勢，除嚴重影響患者的生活質量外，UC已被證實是結直腸癌的高危因素之一[5]。

研究表明UC的發生與下列致病因素相關：①飲食、吸煙、衛生、生活方式等環境因素；②基因突變等遺傳因素；③病原微生物感染及免疫異常因素等。近年來研究提示，腸道菌群失調與UC也有不少聯系。環境因素可影響遺傳易感者，或因為感染，在特定情況下啟動腸道異常免疫過程，促進炎癥相關因子釋放，該反應可持續數年，發作與緩解交替進行，最終損傷腸黏膜屏障，導致炎癥、糜爛、潰瘍、腸壁增厚等病理改變[6]。因此，如何緩解UC患者的臨床癥狀、減輕腸道炎癥、促進黏膜損傷修復是近年來UC的研究熱點。

UC于中醫并無特定病名對應，因反復黏液膿血便的臨床表現，目前的主流認知多將其歸于“腸澼”“便血”“痢疾”等范疇，認為該病為本虛標實之證，由感受外邪、飲食不節、情志失調、勞倦內傷等多種原因導致脾胃虛弱，中焦運化和通降功能失調，濕熱濁毒不能排出體外，壅塞腸中，阻滯氣機，瘀血內生，與腸中糟粕搏結并積滯于腸道，肉腐血敗，腸絡被傷，腐肉與絡血共下，故見下痢赤白，其本在脾腎，標在大腸[7]。而俞老另辟蹊徑，認為UC可從“腸癰”論治，急性期以清熱活血、利濕排膿為主，緩解期則以補益肺脾為主[8]。俞老根據其經驗，提出急性期俞氏清熱活血方灌腸，臨床效果明顯，可短期內緩解患者的黏液膿血便情況，但其機制尚待探究。

本研究結果顯示，模型組大鼠造模后體質量變化明顯，雖給藥期間與其他各組大鼠比較體質量無明顯差異，但給藥組黏液膿血便、食欲等均較前明顯改善，活躍度優于造模組，且體質量穩步增加，說明俞氏清熱活血方可有效改善模型鼠一般情況，減少急性期消耗，改善臨床癥狀。同時結果提示，無論是大體黏膜評分還是病理評分，與模型組相比，各給藥組均明顯改善。說明俞氏清熱活血方灌腸后，結腸黏膜組織炎癥減輕，損傷得到明顯修復，潰瘍、糜爛、水腫均較前出現不同程度好轉。

促炎因子與抗炎因子之間的平衡是UC發生發展的一個重要機制，也是目前研究的熱點[9]。急性期促炎因子的大量釋放可對腸道黏膜造成損傷，繼而形成潰瘍，甚至癌變。大量研究證實，單用中藥或聯合激素、美沙拉嗪可減少促炎因子的釋放，減輕炎癥反應，改善臨床癥狀[10-13]。這可能是俞氏清熱活血方治療UC的機制之一。

綜上，俞氏清熱活血方灌腸可有效改善UC模型大鼠的腹瀉、黏液膿血便等臨床癥狀，促進結腸黏膜修復，減輕炎癥反應。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2023–06–12）

（修回日期：2024–03–12）