雞傳染性貧血（CIA）活疫苗免疫肛拭子排毒規律

李玉燕 張秀明 彭曉艷 曲秀娟 來慶梅 郭龍宗 張鵬

摘 要：為調查雞傳染性貧血（CIA）活疫苗免疫后的排毒規律，本研究在隔離器中免疫CIAV活疫苗，免疫后每隔一周采集肛拭子，持續采樣至第7周，檢測CIAV疫苗的排毒陽性率。結果顯示：CIAV疫苗免疫后第10天排毒率為50%，免疫后第2周排毒率達到高峰為80%，免疫后第6周排毒率下降至27.27%，第7周不排毒，本研究為CIAV感染的監測提供了數據支持。

關鍵詞：CIAV疫苗；肛拭子；排毒

中圖分類號：S858.31文獻標識碼：B文章編號：1673-1085（2024）05-0025-03

基金項目：山東省重點研發計劃（2021CXGC010805）

第一作者：李玉燕（1982—），女，碩士，高級獸醫師，主要從事規?；N雞場禽病監測防控研究，E-mail：lyuyan918@163.com；

并列第一作者：張秀明（1981—），男，漢族，碩士，獸醫師，主要從事規?；N雞場飼養及蛋雞育種工作，E-mail：xmz1207@163.com

*通信作者：郭龍宗（1981—），男，碩士，高級獸醫師，主要從事規?；N雞場實驗室管理和主要疫病防控凈化，E-mail：guolongzong1981@163.com

*并列通信作者：張鵬（1980—），女，本科，獸醫師，主要從事規模化種雞場禽病監測防控研究，E-mail：zhangpeng80815@163.com

雞傳染性貧血病毒（chicken infectious anemia virus，CIAV），2015年劃分于圓環病毒科環狀病毒屬，不含囊膜，基因組為單股負鏈環狀DNA，基因組全長2 298 bp或2 319 bp，有3個開放閱讀框，編碼3種病毒蛋白（VPl、VP2和VP3），VP1是主要的結構蛋白，是變異率最大的蛋白；與VP2共同作用誘導產生中和抗體；VP3又稱為凋亡素，會誘導雞胸腺細胞和原始造血細胞凋亡，導致嚴重貧血、免疫抑制等癥狀[1-2] ，臨床常引起2～4周齡雛雞或育成雞群發生傳染性貧血綜合征（CIA）。CIAV在雞群中可水平傳播和垂直傳播，目前該病在規模化養殖場中感染壓力較大，給養禽業造成嚴重的經濟損失。目前尚無治療CIAV的有效藥物，臨床推薦以活苗免疫預防為主，配合良好的生物安全等綜合防控措施。本試驗對隔離器中飼養雞群CIAV活苗免疫后的排毒規律進行研究，可為臨床CIAV的活苗免疫防控提供參考依據。

1? 材料與方法

1.1? 試驗材料

1.1.1? 試驗對象和免疫程序? ?本試驗所選試驗雞來自膠東某養殖集團祖代哈伯德肉種雞場5#棟舍，該雞舍存欄雞數為9800只，選取30只放入隔離器中進行試驗。

免疫程序：該雞群于8周齡免疫CIAV活苗，免疫廠家為MSD，批號為02440066，免疫途徑：刺種。

1.1.2? 試驗試劑? ?2×Taq PCR MasterMix購自諾唯贊，生產批號為7E321B9；病毒DNA/RNA磁珠法機器提取試劑盒購自青島英賽特生物科技有限公司，生產批號為2022305010；GelStain、50×TAE緩沖液、瓊脂糖購自北京全式金生物技術有限公司。

1.1.3? 試驗儀器? 全自動核酸提取純化儀（青島英賽特生物科技有限公司）、普通PCR基因擴增儀和凝膠成像系統（美國伯樂公司）；SPF雞隔離器（蘇州市馮氏實驗動物設備有限公司）。

1.2? 試驗方法

1.2.1? ?樣品采集? 在CIAV疫苗免疫后1周、10日齡、2、3、4、5、6、7周采集肛拭子，采集30份肛拭子檢測CIAV病原。肛拭子采集使用一次性無菌植絨棉簽在雞只肛門內旋轉3圈，蘸取分泌物后放入1.5 mL無菌離心管中，剪去多余的部分、蓋緊離心管的蓋子并做好標記、冷藏保存。

1.2.2? 樣品前處理? 肛拭子樣品采用“3合一”混合樣品檢測方法，每個含肛拭子的離心管中加入450 L PBS，浸泡1 h左右后再進行機器提取加樣。

1.2.3? CIAV-PCR檢測? 根據任志浩發表的文獻引物[2]，由上海生工生物有限公司合成，上游序列為：GCAGGGGCAAGTAATTTCAA，下游序列為：GCCACACAGCGATAGAGTGA，擴增目的片段大小為164bp；PCR反應程序：94 ℃ 3 min，94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 40 s， 72 ℃ 10 min，35個循環。

2? 結果

2.1? CIAV病原檢測結果

部分肛拭子樣品PCR擴增的基因片段大小為164 bp，與預期的目的片段大小一致，說明CIAV檢測結果呈陽性。結果見圖1所示。

2.2? CIAV疫苗免疫后各周齡肛拭子排毒陽性率

CIAV疫苗免疫后第10天肛拭子開始排毒，陽性率為50%；免疫后2周排毒率最高，肛拭子CIAV陽性率達80%；免疫后3周開始下降，至第5周、第6周排毒率下降，肛拭子CIAV陽性率分別為10%和20%；免疫后第7周不再排毒，結果見表1。

3? 討論

CIAV既可以水平傳播，也可垂直傳播；種雞在產蛋期感染后幾乎無臨床癥狀，受精率和孵化率也不會受影響；但若產蛋期感染，則可垂直傳播到種蛋，導致后代雛雞感染病毒[3]。CIAV感染會引起雛雞全身淋巴組織萎縮，尤其是骨髓造血組織和胸腺等淋巴組織，進而導致雛雞發生免疫抑制[4]，同時會引起繼發感染，導致疫苗免疫失敗。目前CIAV 防控主要以疫苗預防為主，通過疫苗接種使種雞產生抗體，從而給子代提供高水平的母源抗體[5]。CIAV的疫苗主要為弱毒活疫苗，為了與野毒感染區分，需要摸清活疫苗免疫后的排毒規律。本研究結果顯示：CIAV活疫苗免疫7周后不再排毒，臨床規?；B殖場大群可采集肛拭子評估CIAV的野毒感染情況，免疫后超過7周采集的肛拭子樣品若檢出陽性，再結合現場雞群表現，應判定為野毒感染群。

參考文獻：

[1]? 宋麗霞，包小萌，范磊，等.雞傳染性貧血病研究進展[J].山東畜牧獸醫，2016，37（ 12）：82-84.

[2]? 任志浩，房立春，趙鵬，等.雞傳染性貧血病毒熒光定量PCR檢測方法的建立及其在疫苗污染檢測中的應用[J].畜牧獸醫學報，2016，47（7）：1459-1464.

[3]? 顏靜蕊，劉珂飛.雞傳染性貧血病的診斷與防控[C]/ /第四屆京津冀一體化畜牧獸醫科技創新研討會暨“瑞環杯”新思想、新方法、新觀點論壇論文集，2014： 211- 213.

[4]? 陳宗艷，徐大為，程安春，等. 雞傳染性貧血病毒引發的免疫抑制[J]. 養禽與禽病防治，2006（4）：2-5.

[5]? 藺文成，張新珩，謝青梅，等.4株雞傳染性貧血病毒的分離鑒定及其遺傳進化分析[J]. 中國預防獸醫學報，2016，38（9）：695-699.

The Detoxification Dattern of Anal Swabs Immunized with Chicken Infectious Anemia （CIAV） Vaccine

Li Yuyan，Zhang Xiuming ，Peng Xiaoyan ，Qu Xiujuan，Lai Qingmei，Guo Longzong， Zhang Peng

（Shandong Yisheng Animal and Poultry Breeding Company，Yantai? 265508，China）

Abstract：? In order to investigate the detoxification pattern after immunization with the chicken infectious anemia （CIAV） live vaccine， this study immunized the CIAV live vaccine in a isolator. After immunization， anal swabs were collected continuously every week， and continued sampling until the 7th week to test the positive detoxification rate of the CIAV vaccine. The results showed that the detoxification rate of CIAV vaccine was 50% on the 10th day after immunization， reaching a peak of 80% in the 2nd week after immunization. The detoxification rate decreased to 27.27% in the 6th week after immunization， and did not detoxify in the 7th week. This study provides data support for monitoring CIAV infection.

Keywords：? CIAV vaccine; Anal swab; Detoxification