蓮腐敗病菌遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建

摘要

由共享鐮刀菌Fusarium"commune引起的蓮腐敗病是我國蓮生產(chǎn)上的主要病害之一。本研究以強(qiáng)致病力菌株FCN23為供試菌株，通過PEG介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法研究了菌齡、酶解時(shí)間和滲透壓穩(wěn)定劑等對(duì)原生質(zhì)體制備的影響。結(jié)果表明，分生孢子在YPD液體培養(yǎng)基培養(yǎng)24"h獲得新鮮菌絲，在酶解時(shí)間為2.5"h，滲透壓穩(wěn)定劑為0.7"mol/L"NaCl溶液時(shí)原生質(zhì)體制備效率最高。進(jìn)而將遺傳霉素的抗性基因和綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)入蓮腐敗病菌原生質(zhì)體中，獲得了穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)化子，能夠穩(wěn)定遺傳gfp基因，說明蓮腐敗病菌的遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建成功。該體系的建立為蓮腐敗病菌的侵染過程及基因功能研究奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞

蓮腐敗病;"共享鐮刀菌;"原生質(zhì)體;"遺傳轉(zhuǎn)化;"GFP

中圖分類號(hào)：

S"436.45

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼："A

DOI："10.16688/j.zwbh.2022758

Construction"of"genetic"transformation"system"of"Fusarium"commune"causing"lotus"rhizome"rot

YE"Lifang1，"ZHANG"Yifan1，"ZHANG"Lianhu1，3，"LIN"Yachun1，3，"ZHENG"Xingwen2，3，"

CUI"Ruqiang1，3*，"KUANG"Weigang1，3*

（1."College"of"Agronomy，"Jiangxi"Agricultural"University，"Nanchang"330045，"China;"2."White"Lotus"Industrial"

Development"Center"of"Guangchang"County，"Jiangxi"Province，"Fuzhou"344000，"China;"3."Jiangxi"

Guangchang"White"Lotus"Science"and"Technology"Backyard，"Fuzhou"344000，"China）

Abstract

Lotus"rhizome"rot"caused"by"Fusarium"commune"is"one"of"the"major"diseases"in"lotus"production"in"China."In"this"study，"the"strongly"pathogenic"strain"FCN23"was"used"as"the"target"strain，"and"the"effects"of"enzymatic"digestion"time，"mycelial"age"and"osmoticnbsp;stabilizer"on"the"protoplast"preparation"were"investigated"by"PEGmediated"genetic"transformation."When"the"conidia"were"cultured"in"YPD"liquid"medium"for"24"h"to"obtain"fresh"mycelium，"the"enzyme"digestion"time"was"2.5"h，"the"osmotic"stabilizer"was"0.7"mol/L"NaCl"solution，"and"the"efficiency"was"the"highest."Geneticin"resistance"gene"and"green"fluorescent"protein"gene"were"transfered"into"the"protoplast"of"F.commune."The"results"showed"that"stably"expressed"transformants"were"obtained，"which"were"able"to"stably"inherit"the"gfp"gene，"indicating"that"the"genetic"transformation"system"of"F.commune"was"successfully"constructed."The"transformation"system"laid"the"foundation"for"the"study"of"the"infestation"process"and"gene"function"of"F.commune.

Key"words

lotus"rhizome"rot"disease;"Fusarium"commune;"protoplast;"genetic"transformation;"GFP

蓮Nelumbo"nucifera"Gaertn.屬于多年生水生草本植物，種質(zhì)資源豐富［12］，具有食用、藥用、觀賞等多種經(jīng)濟(jì)價(jià)值［34］。江西、福建和湖南等為籽蓮主產(chǎn)區(qū)，其中江西廣昌白蓮有1"000多年的種植歷史［5］。蓮腐敗病俗稱“蓮瘟”，是一種土傳病害，主要由共享鐮刀菌Fusarium"commune［68］引起，病菌往往造成蓮鞭、根的腐敗和蓮葉、花的青枯萎蔫，是蓮產(chǎn)區(qū)發(fā)生最普遍、為害嚴(yán)重的病害之一［5］。該病在江西省廣昌縣及其周邊廣大蓮區(qū)連年危害，部分嚴(yán)重田塊死株率達(dá)70%，甚至造成絕收，經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重［9］。

聚乙二醇（PEG）介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化是一種傳統(tǒng)的真菌遺傳轉(zhuǎn)化方法，通過酶解細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體，在PEG和Ca2+等其他二價(jià)陽離子的作用下，增加細(xì)胞膜的通透性，從而將外源"DNA"整合到受體的基因組中［1011］。目前尚未見到蓮腐敗病菌遺傳轉(zhuǎn)化的報(bào)道，為了研究蓮腐敗病的致病機(jī)理，有必要針對(duì)蓮腐敗病菌建立其遺傳轉(zhuǎn)化體系。

本研究以分離自江西廣昌的蓮腐敗病菌菌株FCN23為試驗(yàn)材料，對(duì)影響蓮腐敗病菌FCN23菌株原生質(zhì)體制備的關(guān)鍵因素（酶解時(shí)間、菌齡、滲透壓穩(wěn)定劑種類）進(jìn)行優(yōu)化，成功建立了蓮腐敗病菌遺傳轉(zhuǎn)化體系，獲得了帶有GFP熒光標(biāo)記的菌株，為下一步研究蓮腐敗病菌的基因功能以及解析其致病機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1"材料與方法

1.1"試驗(yàn)材料

1.1.1"供試菌株及質(zhì)粒

蓮腐敗病菌菌株FCN23分離自江西省廣昌縣發(fā)病蓮植株上，于本實(shí)驗(yàn)室鑒定并保存。質(zhì)粒pKNTRP27GFP，啟動(dòng)子為RP27，含gfp基因、氨芐青霉素（Amp）抗性和遺傳霉素（G418）抗性基因。

1.1.2"培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200"g，葡萄糖20"g，瓊脂20"g，用超純水定容至1"L。YPD培養(yǎng)基：酵母提取物10"g，胰蛋白胨20"g，葡萄糖20"g，用超純水定容至1"L。YEPD培養(yǎng)基：酵母提取物3"g，胰蛋白胨10"g，葡萄糖20"g，用超純水定容至1"L。TB3培養(yǎng)基：酵母提取物3"g，酸水解酪蛋白3"g，蔗糖200"g，瓊脂15"g，用超純水定容至1"L。

1.1.3"試劑

酶制劑：崩潰酶（driselase）、溶壁酶（lyticase）、蝸牛酶（snailase），氨芐青霉素（ampicillin，"Amp），遺傳霉素（geneticin，"G418）購自索萊寶公司。STC溶液：蔗糖40"g，1"mol/L"TrisHCl"（pH="8.0）"2"mL，CaCl2"1.109"8"g，加超純水定容至200"mL，用0.22"μm細(xì)菌過濾器進(jìn)行抽濾滅菌。PTC緩沖液：稱取20"g"PEG4000（聚乙二醇），加STC溶液加熱溶解定容至50"mL，用0.22"μm細(xì)菌過濾器進(jìn)行抽濾滅菌。酶解液：分別稱取0.1"g崩潰酶、0.1"g溶壁酶和0.1"g蝸牛酶加入10"mL濃度為0.7"mol/L"的NaCl中，用0.22"μm細(xì)菌過濾器進(jìn)行抽濾滅菌備用。

1.2"質(zhì)粒pKNTRP27GFP的提取

從轉(zhuǎn)入pKNTRP27GFP空載體的大腸桿菌中吸取10"μL菌液，接種至LB液體培養(yǎng)基（Amp"濃度為100"μg/mL）中37℃培養(yǎng)過夜，采用高純度質(zhì)粒DNA小量提取試劑盒（北京擎科生物科技有限公司）提取質(zhì)粒，測(cè)定質(zhì)粒濃度，并用試劑盒中適量的eluent將質(zhì)粒濃度調(diào)整至300"ng/μL。

1.3"蓮腐敗病菌對(duì)G418的敏感性測(cè)定

蓮腐敗病菌菌株FCN23"在PDA"培養(yǎng)基培養(yǎng)5"d后，沿菌落邊緣用直徑為8"mm的打孔器打取菌餅，轉(zhuǎn)接到G418濃度分別為0、30、60、90、120"μg/mL和150"μg/mL的PDA培養(yǎng)基上，置于"25℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)7"d。觀察生長(zhǎng)情況，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

1.4"蓮腐敗病菌的遺傳轉(zhuǎn)化

1.4.1"原生質(zhì)體制備條件的優(yōu)化

酶解時(shí)間：將孢子懸浮液加入100"mL"YPD培養(yǎng)基中，在28℃、150"r/min條件下培養(yǎng)24"h，用無菌的4層紗布過濾，收集菌絲，用少量的0.7"mol/L"NaCl溶液沖洗菌絲，放在濾紙上吸干水分。稱取0.1"g菌絲加入到無菌的酶解液中，28℃、85"r/min分別酶解1、1.5、2、2.5、3"h和4"h，用1層無菌的Miracloth過濾菌絲體，4℃、3"000"r/min離心10"min;棄上清，加入10"mL的STC溶液重懸原生質(zhì)體;4℃、5"000"r/min離心3"min;棄上清，加入10"mL的STC溶液重懸原生質(zhì)體。吸取20"μL原生質(zhì)體懸浮液加在血球計(jì)數(shù)板（25×16規(guī)格），在顯微鏡下觀察左上、左下、右上、右下和中央5個(gè)中格的原生質(zhì)體數(shù)量，計(jì)算產(chǎn)量。原生質(zhì)體數(shù)量/mL=5個(gè)中方格內(nèi)的原生質(zhì)體數(shù)/80×400×104×稀釋倍數(shù)。每處理重復(fù)3次。

菌絲體的培養(yǎng)時(shí)間：供試菌株在YPD培養(yǎng)基中于28℃、150"r/min條件下分別培養(yǎng)"12、24、36"h和48"h，收集菌絲。取0.1"g菌絲加入到10"mL"1%的酶解液中，按照上述已確定的最佳酶解時(shí)間制備原生質(zhì)體，用血球計(jì)數(shù)板鏡檢計(jì)數(shù)原生質(zhì)體，計(jì)算產(chǎn)量。每處理重復(fù)3次。

滲透壓穩(wěn)定劑：分別配制0.7"mol/L"的KCl、NaCl、蔗糖及山梨醇溶液，用來配制1%的混合酶解液。將新鮮菌絲加入10"mL酶解液，按照上述已確定的最佳酶解時(shí)間和最適菌絲體培養(yǎng)時(shí)間制備原生質(zhì)體，用血球計(jì)數(shù)板鏡檢計(jì)數(shù)原生質(zhì)體，計(jì)算產(chǎn)量。每處理重復(fù)3次。

1.4.2"遺傳轉(zhuǎn)化

將10"μL"300"ng/μL質(zhì)粒DNA加入200"μL濃度為1×108個(gè)/mL的原生質(zhì)體中，輕彈混勻，冰上靜置20"min;加入1.4"mL"PTC緩沖液，輕彈混勻，冰上靜置20"min;加入7"mL"TB3液體培養(yǎng)基，輕彈混勻，傾斜固定在恒溫?fù)u床上，28℃"90"r/min復(fù)蘇過夜。溶解TB3培養(yǎng)基，冷卻至45～55℃后加入適量抗生素（G418濃度為30"μg/mL，Amp濃度為200"μg/mL），將復(fù)蘇菌液倒入含有抗生素的培養(yǎng)基中，顛轉(zhuǎn)混勻后傾倒在無菌培養(yǎng)皿中;于25℃下黑暗培養(yǎng)24"h，在其上再次傾倒TB3培養(yǎng)基（G418終濃度為120"μg/mL，Amp終濃度為500"μg/mL）;于25℃下黑暗培養(yǎng)3～7"d，挑取單菌落接種至PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)化子篩選。

1.4.3"轉(zhuǎn)化子的PCR鑒定

將轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)接到含120"μg/mL"G418的PDA平板上連續(xù)培養(yǎng)3代，獲得穩(wěn)定生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)化子。從轉(zhuǎn)化子的菌落邊緣刮取菌絲，用CTAB粗提取法［12］提取轉(zhuǎn)化子DNA作為模板，分別用本研究設(shè)計(jì)的GFP特異性引物（GFPF："5′ACAAGTTCAGCGTGTCCG′和GFPR："5′CTCGTTGGGGTCTTTGCT3′）及G418抗性基因檢測(cè)的引物（G418F："5′GATGTTTCGCTTGGTGGTCG3′和G418R："5′TGATGCCGCCGTGTTCC3′）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系為：2×Rapid"Taq"Master"Mix"10"μL，上、下游引物各1"μL，模板0.8"μL，超純水補(bǔ)足至20"μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5"min;94℃變性15"s，54℃退火15"s，72℃延伸30"s，35個(gè)循環(huán);72℃延伸5"min，4℃保存。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.5"轉(zhuǎn)化子的GFP熒光觀察

將PCR驗(yàn)證正確的轉(zhuǎn)化子菌絲制成臨時(shí)玻片，用激光共聚焦顯微鏡觀察綠色熒光。對(duì)熒光保持良好的轉(zhuǎn)化子用20%甘油冷凍保存。

1.6"轉(zhuǎn)化子表型觀察

將野生型菌株FCN23和驗(yàn)證正確的轉(zhuǎn)化子接種在PDA平板中培養(yǎng)5"d，用直徑8"mm的打孔器沿菌落邊緣打取菌餅，接種于新的PDA平板中，重復(fù)3次，25℃培養(yǎng)6"d，觀察菌落形態(tài)并用十字交叉法測(cè)量菌落直徑;用無菌水將分生孢子洗脫制成孢子懸浮液，在光學(xué)顯微鏡下觀察分生孢子的形態(tài)特征，并測(cè)量孢子大?。╪=30）。"將野生型菌株和轉(zhuǎn)化子接種至100"mL"YPD液體培養(yǎng)基中，在28℃、150"r/min條件下培養(yǎng)4"d，過濾菌絲，收集孢子懸浮液，用血球計(jì)數(shù)板對(duì)分生孢子進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算產(chǎn)孢量。每處理重復(fù)3次。

1.7"數(shù)據(jù)分析

采用SPSS"25.0軟件對(duì)進(jìn)行差異顯著性分析，Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行單因素方差分析。

2"結(jié)果與分析

2.1"蓮腐敗病菌對(duì)G418的抗性

將培養(yǎng)5"d的蓮腐敗病菌菌株FCN23接種于含不同G418濃度（0、30、60、90、120"μg/mL和150"μg/mL）的PDA培養(yǎng)基上，"25℃培養(yǎng)7"d后，菌落平均直徑分別為9.00、5.35、3.20、1.68、0.80"cm和0.80"cm。試驗(yàn)結(jié)果表明，濃度為30～150"μg/mL的G418對(duì)蓮腐敗病菌的生長(zhǎng)有不同程度的抑制效果，在120"μg/mL濃度下病菌生長(zhǎng)完全受到抑制（圖1）。因此，選擇120"μg/mL"G418作為篩選轉(zhuǎn)化子的濃度。

2.2"不同因素對(duì)原生質(zhì)體產(chǎn)量的影響

2.2.1"酶解時(shí)間對(duì)原生質(zhì)體產(chǎn)量的影響

由圖2可知，蓮腐敗病菌原生質(zhì)體產(chǎn)量隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)呈先升高后降低的趨勢(shì)。酶解2.5"h時(shí)原生質(zhì)體的產(chǎn)量最高，達(dá)5.93×106個(gè)/mL，顯著高于其他酶解時(shí)間（Plt;0.05）。隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，原生質(zhì)體更易受到損傷。因此，選擇2.5"h作為最佳酶解時(shí)間。

2.2.2"菌齡對(duì)原生質(zhì)體產(chǎn)量的影響

由圖3可知，當(dāng)蓮腐敗病菌搖培時(shí)間為24"h時(shí)，原生質(zhì)體產(chǎn)量最高，達(dá)2.33×107個(gè)/mL。當(dāng)搖培時(shí)間超過36"h時(shí)，菌絲老化，有部分菌絲不能被酶解，原生質(zhì)體產(chǎn)量顯著低于搖培24"h（Plt;0.05）。因此，用于制備原生質(zhì)體的蓮腐敗病菌最佳搖培時(shí)間為24"h。

2.2.3"不同滲透壓穩(wěn)定劑對(duì)原生質(zhì)體產(chǎn)量的影響

在酶解時(shí)間、菌齡一致的條件下，采用0.7"mol/L的KCl、NaCl、蔗糖和山梨醇作為滲透壓穩(wěn)定劑。結(jié)果如圖4所示，利用NaCl作為滲透壓穩(wěn)定劑時(shí)原生質(zhì)體產(chǎn)量最高，顯著高于其他3種滲透壓穩(wěn)定劑（Plt;0.05）。因此，選擇0.7"mol/L的"NaCl作為蓮腐敗病菌原生質(zhì)體制備過程中的滲透壓穩(wěn)定劑。

2.3"蓮腐敗病菌FCN23轉(zhuǎn)化子的PCR鑒定

選取8個(gè)在PDA平板（含120"μg/mL"G418）上連續(xù)培養(yǎng)3代的GFP轉(zhuǎn)化子作為模板，以蓮腐敗病菌野生型菌株FCN23的基因組DNA作為陰性對(duì)照，以質(zhì)粒pKNTRP27GFP為陽性對(duì)照，分別用GFP特異性引物（GFPF/GFPR）、遺傳霉素特異性引物（G418F/G418R）進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，選取的8個(gè)轉(zhuǎn)化子及陽性對(duì)照pKNTRP27GFP均能擴(kuò)增出566"bp的gfp基因片段及323"bp的遺傳霉素抗性基因片段，而野生型菌株未擴(kuò)增出目的條帶（圖5），說明gfp基因均已成功轉(zhuǎn)化到蓮腐敗病菌的基因組中。

2.4"轉(zhuǎn)化子熒光觀察及生物學(xué)特性

2.4.1"轉(zhuǎn)化子熒光觀察

通過激光共聚焦顯微鏡對(duì)獲得的陽性轉(zhuǎn)化子進(jìn)行觀察，能夠觀察到較強(qiáng)的綠色熒光，說明gfp基因已成功整合到野生型菌株的基因組中。轉(zhuǎn)化子在含120"μg/mL"G418的PDA"培養(yǎng)基上連續(xù)培養(yǎng)3代后，菌絲和孢子仍能表達(dá)出較強(qiáng)的綠色熒光信號(hào)（圖6），表明其具有較高的遺傳穩(wěn)定性。

2.4.2"GFP轉(zhuǎn)化菌株及野生型菌株的生長(zhǎng)情況

在PDA平板上培養(yǎng)6"d后，轉(zhuǎn)化子的菌落形態(tài)和生長(zhǎng)速率與野生型菌株之間無顯著差異。轉(zhuǎn)化子大型分生孢子大小約為（23.52～40.44）μm×（2.82～4.31）μm，小型分生孢子大小約為（3.88～11.49）μm×（1.61～3.09）μm，與野生型菌株分生孢子大小無顯著差異（Plt;0.05）（圖7）。在YPD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)5"d后，轉(zhuǎn)化子的產(chǎn)孢量與野生型菌株之間無顯著差異，轉(zhuǎn)化子的產(chǎn)孢量為1.86×107個(gè)/mL，野生型菌株的產(chǎn)孢量為1.72×107個(gè)/mL。

3"結(jié)論與討論

在絲狀真菌中，遺傳轉(zhuǎn)化方法有根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化法（ATMT）［1314］、PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化［15］和電穿孔轉(zhuǎn)化法［1617］等。PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體遺傳轉(zhuǎn)化方法較其他方法快速簡(jiǎn)單，在絲狀真菌中應(yīng)用廣泛［18］。能否獲得高質(zhì)量、高濃度的原生質(zhì)體是決定其轉(zhuǎn)化效率的關(guān)鍵因素，由于真菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)復(fù)雜，制備同屬不同種真菌的原生質(zhì)體的最適條件也存在差異［19］。因此，開展原生質(zhì)體制備條件優(yōu)化的研究對(duì)蓮腐敗病菌遺傳轉(zhuǎn)化至關(guān)重要。

真菌對(duì)抗生素的敏感性是轉(zhuǎn)化系統(tǒng)中的一個(gè)重要因素，選擇合適的抗生素可以減少陰性轉(zhuǎn)化子的出現(xiàn)，并降低轉(zhuǎn)化成本［20］。目前，用于真菌遺傳轉(zhuǎn)化的選擇標(biāo)記有潮霉素、G418和博萊霉素等抗生素［21］。在尚不明確蓮腐敗病菌對(duì)G418敏感性的前提下，本研究開展了G418的敏感性測(cè)定，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)G418濃度為120"μg/mL時(shí)，能有效抑制蓮腐敗病菌的生長(zhǎng)，表明此濃度適合作為篩選轉(zhuǎn)化子的濃度。

菌絲是獲取原生質(zhì)體的重要材料，由于真菌細(xì)胞壁具有可塑性，其結(jié)構(gòu)在不同的生長(zhǎng)階段不盡相同，新生成的菌絲細(xì)胞壁薄而光滑，相比于老化的菌絲更有利于酶解［2223］。菌絲菌齡過短或過長(zhǎng)都不利于獲得大量的原生質(zhì)體，由幼嫩的菌絲制備出的原生質(zhì)體易破碎，菌齡過長(zhǎng)的菌絲因其增厚的細(xì)胞壁不易被酶解［2425］。酶解時(shí)間對(duì)原生質(zhì)體產(chǎn)量的影響也是如此，酶解時(shí)間過短，菌絲未能得到充分的酶解;酶解時(shí)間過長(zhǎng)，先釋放出的原生質(zhì)體易受酶解液的影響而破裂［26］。本研究結(jié)果表明，分生孢子在YPD液體培養(yǎng)基培養(yǎng)24"h獲得新鮮菌絲，酶解時(shí)間為2.5"h時(shí)原生質(zhì)體產(chǎn)量最高，這與已有的研究結(jié)果基本一致［27］。

適宜的滲透壓穩(wěn)定劑不僅可以維持原生質(zhì)體內(nèi)外的滲透壓平衡，還會(huì)影響酶的活性［28］。Lou等［29］研究發(fā)現(xiàn)，使用無機(jī)鹽作為滲透壓穩(wěn)定劑的原生質(zhì)體制備率高于有機(jī)物。本研究對(duì)不同種類的滲透壓穩(wěn)定劑進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)0.7"mol/L"NaCl"是制備共享鐮刀菌原生質(zhì)體的最佳滲透壓穩(wěn)定劑，而蔗糖、山梨醇等有機(jī)物不宜作為原生質(zhì)體制備的滲透壓穩(wěn)定劑。

本研究首次建立了PEG介導(dǎo)的蓮腐敗病菌遺傳轉(zhuǎn)化體系，這些轉(zhuǎn)化子的菌落形態(tài)、生長(zhǎng)速率及孢子形態(tài)與野生型菌株沒有差異，該結(jié)果可用于研究蓮腐敗病菌對(duì)宿主植物的侵染定殖規(guī)律，且該遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立為蓮腐敗病菌基因功能研究奠定基礎(chǔ)，有助于進(jìn)一步了解蓮腐敗病菌的致病機(jī)理、開發(fā)抗蓮腐敗病菌的靶標(biāo)藥物以及采取相應(yīng)的防治措施。

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（責(zé)任編輯：田"喆）