2012年-2022年TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在云南主要煙區(qū)的發(fā)生與分布

摘要

煙草叢頂病（tobacco"bushy"top"disease，TBTD）是一種由煙草叢頂病毒（tobacco"bushy"top"virus，TBTV）及其衛(wèi)星RNA（tobacco"bushy"top"virus"satellite"RNA，TBTVsatRNA）和煙草扭脈病毒（tobacco"vein"distorting"virus，TVDV）及其伴隨RNA（tobacco"vein"distorting"virus"associated"RNA，TVDVaRNA）共同侵染引起的危險(xiǎn)性病害，曾在云南很多煙區(qū)造成嚴(yán)重?fù)p失。本研究對(duì)煙草叢頂病及其相關(guān)病原物在云南煙草上的發(fā)生情況進(jìn)行了多年的調(diào)查研究，力圖對(duì)煙草叢頂病及其相關(guān)病原物的發(fā)生與分布進(jìn)行追蹤和分析。結(jié)果表明，2012年-2022年，煙草叢頂病在云南各大煙區(qū)僅零星發(fā)生，2019年以來已很難發(fā)現(xiàn)。煙草叢頂病的相關(guān)病原物主要在曾經(jīng)暴發(fā)流行過病害的楚雄、保山和大理發(fā)現(xiàn)，且TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在煙草上并不總是同時(shí)被檢出，其中引起煙草叢頂病典型癥狀的TBTV+TVDV+TBTVsatRNA+TVDVaRNA檢出率在5%以下，TVDV的檢出率最高，達(dá)30.44%，TBTVsatRNA的檢出率最低，為7.68%。TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA不能同時(shí)感染同一煙株可能是當(dāng)前煙草叢頂病很少發(fā)生的主要原因。

關(guān)鍵詞

煙草叢頂病毒;"煙草扭脈病毒;"煙草叢頂病毒衛(wèi)星RNA;"煙草扭脈病毒伴隨RNA;"發(fā)生與分布

中圖分類號(hào)：

S"432.41

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼："A

DOI："10.16688/j.zwbh.2023069

Occurrence"and"distribution"of"TBTV，"TVDV，"TBTVsatRNA"and"TVDVaRNA"in"main"tobacco"planting"areas"of"Yunnan"province"from"2012"to"2022

YANG"Yahui#，"YANG"Jie#，"LUO"Hengming，"LIU"Fang，"L"Jing，"CHEN"Ping，CHEN"Hairu，"CHEN"Xiaojiao*，"LI"Fan*

（College"of"Plant"Protection，"Yunnan"Agricultural"University，"Kunming"650201，"China）

Abstract

Tobacco"bush"top"disease"（TBTD）"is"a"dangerous"disease"caused"by"a"combination"of"tobacco"bushy"top"virus"（TBTV）"and"its"satellite"RNA"（TBTVsatRNA），"tobacco"vein"distorting"virus"（TVDV）"and"its"associated"RNA"（TVDVaRNA）."TBTD"has"caused"serious"losses"in"the"main"tobaccoplanting"areas"in"Yunnan"province"during"the"past"decades."In"order"to"track"the"occurrence"and"distribution"of"TBTD"and"its"causal"agents，"disease"survey"and"virus"detection"were"conducted"in"this"study."The"results"showed"that"TBTD"occurred"sporadically"during"2012"to"2022，"and"no"TBTD"was"found"since"2019."TBTD"causal"agents"mainly"occurred"in"Chuxiong，"Baoshan"and"Dali，"where"the"disease"recurred"several"times"in"1990s."TBTV，"TVDV，"TBTVsatRNA"and"TVDVaRNA"were"not"always"detected"on"the"same"tobacco"plant，"and"the"detection"rate"of"TBTV+TVDV+TBTVsatRNA+TVDVaRNA，"which"caused"typical"symptoms"of"TBTD，"was"less"than"5%，"TVDV"showed"the"highest"detection"rate"of"30.44%，"while"TBTVsatRNA"had"the"lowest"rate"of"7.68%."The"fact"that"TBTV，"TVDV，"TBTVsatRNA"and"TVDVaRNA"failed"to"simultaneously"infect"the"same"tobacco"plant"may"be"the"main"reason"why"tobacco"bushy"top"disease"rarely"occurs"at"present.

Key"words

tobacco"bushy"top"virus;"tobacco"vein"distorting"virus;"tobacco"bushy"top"virus"satellite"RNA;"tobacco"vein"distorting"virus"associated"RNA;"occurrence"and"distribution

煙草Nicotiana"tabacum"L.是云南省主要經(jīng)濟(jì)作物之一，在云南經(jīng)濟(jì)發(fā)展中具有獨(dú)特且重要的地位，然而病毒病嚴(yán)重威脅煙葉的產(chǎn)量、品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)效益［1］。我國煙草上發(fā)現(xiàn)的病毒主要有煙草花葉病毒（tobacco"mosaic"virus，TMV）、黃瓜花葉病毒（cucumber"mosaic"virus，CMV）、番茄斑萎病毒（tomato"spotted"wilt"virus，TSWV）、馬鈴薯Y病毒（potato"virus"Y，PVY）、紅辣椒脈斑駁病毒（chilli"veinal"mottle"virus，ChiVMV）、番茄環(huán)紋斑點(diǎn)病毒（tomato"zonate"spot"virus，TZSV）、煙草叢頂病毒（tobacco"bushy"top"virus，TBTV）、煙草扭脈病毒（tobacco"vein"distorting"virus，TVDV）等［25］。自然界中煙草病毒復(fù)合侵染普遍發(fā)生，但多種病毒復(fù)合侵染引起一種病害很少見，煙草叢頂病是一種非常特殊的由多種病原物復(fù)合侵染引起的煙草危險(xiǎn)性病害，病原物分別是來自番茄叢矮病毒科Tombusviridae幽影病毒屬Umbravirus的煙草叢頂病毒（tobacco"bushy"top"virus，TBTV）和Solemoviridae科馬鈴薯卷葉病毒屬Polerovirus的煙草扭脈病毒（tobacco"vein"distorting"virus，TVDV），染病植株中還常發(fā)現(xiàn)含有煙草叢頂病毒的衛(wèi)星RNA（tobacco"bushy"top"virus"satellite"RNA，TBTVsatRNA）以及煙草扭脈病毒的伴隨RNA（tobacco"vein"distorting"virus"associated"RNA，TVDVaRNA）［68］。煙草叢頂病主要依靠蚜蟲為媒介進(jìn)行傳播，TVDV是蚜蟲傳播煙草叢頂病的關(guān)鍵因子［9］，可以輔助其余病原物通過蚜蟲傳播。

煙草叢頂病最早于1957年在津巴布韋北部的克里旺煙區(qū)出現(xiàn)［1011］，隨后，在南非、贊比亞、馬拉維、埃塞俄比亞等非洲國家以及亞洲的泰國、巴基斯坦、中國陸續(xù)發(fā)生［1213］。煙草叢頂病主要癥狀為：煙株葉片感病前期有壞死斑出現(xiàn)，葉片逐漸變小并表現(xiàn)褪綠或黃化，有時(shí)可見葉緣向后翻卷，產(chǎn)生皰斑，患病煙株植株矮縮，呈密生小葉的叢枝狀塔形［14］，只有TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA同時(shí)侵染煙草時(shí)，才會(huì)出現(xiàn)煙草叢頂病的典型癥狀［15］，產(chǎn)生上述癥狀的煙草，經(jīng)濟(jì)價(jià)值會(huì)急劇下降。在中國，煙草叢頂病于1993年首次在云南省保山市大面積暴發(fā)，隨后發(fā)生地主要集中在云南省的保山市、大理州和楚雄州，另外昆明、玉溪、紅河、普洱、文山、西雙版納及怒江等州市也有煙草叢頂病零星發(fā)生的報(bào)道。截至2001年，煙草叢頂病在云南累計(jì)發(fā)病面積達(dá)51"300"hm2，其中8"700"hm2絕收，直接經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)2.1億元，已成為云南省20世紀(jì)90年代以來唯一導(dǎo)致大面積絕產(chǎn)的煙草病害［5］。

近年來，煙草叢頂病在田間發(fā)生較輕，很多地方已很難看到煙草叢頂病的發(fā)生。但實(shí)踐證明，病毒病的發(fā)生流行往往具有暴發(fā)性、遷移性和間歇性等“三性”，一旦再次暴發(fā)，必將嚴(yán)重影響云南煙草產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。因此實(shí)時(shí)監(jiān)測煙草叢頂病及其相關(guān)病原物在云南煙草上的發(fā)生動(dòng)態(tài)和分布情況，對(duì)于預(yù)防煙草叢頂病乃至其他作物和其他地區(qū)相關(guān)病害的暴發(fā)流行十分重要。本研究通過調(diào)查2012年-2022年間煙草叢頂病在云南省主要煙區(qū)的發(fā)生危害情況，分析TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在田間的發(fā)生動(dòng)態(tài)與分布，探討煙草叢頂病在田間發(fā)生率降低的可能原因，為預(yù)防煙草叢頂病及其相關(guān)病原物引起的其他作物病害的發(fā)生流行提供依據(jù)。

1"材料與方法

1.1"病害調(diào)查及樣品采集

2012年-2022年對(duì)云南省昆明市、玉溪市、曲靖市、楚雄州、大理州、保山市和紅河州7個(gè)煙區(qū)的煙草叢頂病進(jìn)行了調(diào)查，并采集疑似病毒病癥狀的煙草樣品1"511份，癥狀表現(xiàn)為壞死、叢頂、扭曲、畸形、矮化、花葉、黃化等，樣品信息見表1，其中2012年和2013年由于采集的樣品數(shù)量過少，與2014年合并統(tǒng)計(jì)，2016年和2017年因故未開展調(diào)查。

1.2"方法

1.2.1"煙草樣品總核酸的提取及RTPCR擴(kuò)增

稱取0.1"g葉片樣品，利用CTAB法提取煙草樣品的總核酸，

保存于-20℃冰箱備用。

將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，

反轉(zhuǎn)錄體系（10"μL）包括：模板2"μL，煙草叢頂病4種病原物的特異性下游引物［16］1"μL，ddH2O"3"μL，70℃變性10"min，冰浴2"min后，加入下列試劑：5×MMLV"Buffer"2"μL，dNTP"mixture（10"mmol/L）和"RNase"MMLV（RNaseH-，200"U/μL）各0.5"μL，ddH2O"1"μL，42℃保溫60"min，70℃保溫15"min。

PCR擴(kuò)增體系（10"μL）包括："Taq"mix"5"μL，ddH2O"3.6"μL，煙草叢頂病4種病原物的特異性上下游引物［16］各0.2"μL，cDNA"1"μL。擴(kuò)增條件：94℃"5"min;94℃"30"s，根據(jù)引物確定的退火溫度退火"30"s，72℃"1"min，循環(huán)35次;72℃"10"min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測并拍照記錄結(jié)果。

1.2.2"克隆和測序

參照凝膠回收試劑盒說明書［生工生物（上海）股份有限公司］純化PCR產(chǎn)物，回收目的片段與載體pMD19T連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌"DH5α，菌落PCR篩選陽性克隆。陽性克隆測序由生工生物（上海）股份有限公司完成，測序結(jié)果提交NCBI數(shù)據(jù)庫進(jìn)行BLAST（http：∥www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/）序列比對(duì)分析。

2"結(jié)果與分析

2.1"2012年-2022年云南省主要煙區(qū)TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA的檢出情況

除2016年和2017年外，自2012年起，對(duì)云南省昆明市、玉溪市、曲靖市、楚雄州、大理州、保山市和紅河州7個(gè)煙區(qū)的煙草叢頂病進(jìn)行了調(diào)查和疑似病毒病樣品的采集，共采集煙草樣品1"511份，癥狀有壞死、叢頂、扭曲、畸形、矮化、花葉、黃化等。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，這些年煙草叢頂病在云南7個(gè)煙區(qū)均為零星發(fā)生，如2012年在保山市的平均發(fā)病率為"2%，2015年在大理州的平均發(fā)病率為1%，但自2019年起，基本未見煙草叢頂病的發(fā)生。

采用RTPCR技術(shù)對(duì)煙草樣品中TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在2012年-2015年、2018年、2020年-2021年采集的煙草樣品中TVDV的檢出率最高，平均檢出率為30.44%，其次是TVDVaRNA，平均檢出率為21.32%，第三是TBTV，平均檢出率為7.74%，TBTVsatRNA的檢出率最低，為7.68%（表2）。除了2019年和2020年

外，在其余年份采集的煙草樣品中都檢測到了TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA，其中TVDV在2012年-2014年、2015年、2018年、2020年和2021年采集的煙草樣品中檢出率均為最高，分別達(dá)到76.79%、10.60%、61.95%、9.76%和23.90%;TVDVaRNA在2019年和2022年的煙草樣品中檢出率最高，分別為14.58%和3.11%;2019年的煙草樣品中沒有檢測到TBTV和TBTVsatRNA，2020年的煙草樣品中沒有檢測到TBTVsatRNA和TVDVaRNA（表2）。TVDV在每一年的煙草樣品中都能被檢測到，而TBTV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA則在部分年份的樣品中未被檢測到。

通過對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA并不總是在同一煙株中同時(shí)出現(xiàn)，單一感染和2～4種復(fù)合感染的現(xiàn)象均有，共有12種感染類型："TVDV、TVDVaRNA、TBTVsatRNA及TBTV的單一感染，總檢出率為11.77%，其中TVDV單獨(dú)感染的檢出率最高，達(dá)到8.80%;兩兩復(fù)合感染的類型有TVDV+TVDVaRNA、TVDV+TBTV、TVDV+TBTVsatRNA及TBTV+TVDVaRNA共計(jì)4種，總檢出率為14.76%，其中TVDV+TVDVaRNA復(fù)合感染的檢出率最高，達(dá)到12.24%;3種復(fù)合感染的類型包括：TVDV+TVDVaRNA+TBTVsatRNA、TVDV+TBTV+TVDVaRNA和TVDV+TBTV+TBTVsatRNA共計(jì)3種，總檢出率為3.24%，其中TVDV+TVDVaRNA+TBTVsatRNA復(fù)合感染檢出率最高，為1.46%;還有4種同時(shí)感染的類型TVDV+TBTV+TVDVaRNA+TBTVsatRNA，總檢出率為4.04%（表3）。以上結(jié)果表明，在2012年-2022年間，云南省的煙草樣品中TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA復(fù)合感染比單一感染更普遍，其中兩兩復(fù)合感染的總檢出率最高，接近15%，而TVDV+TBTV+TVDVaRNA+TBTVsatRNA復(fù)合感染的檢出率較低，在5%以下，說明這些年TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA并不總是共同侵染同一煙株。除單獨(dú)感染外，TVDV共參與7種復(fù)合感染類型，是田間出現(xiàn)頻率最高的病原物，說明TVDV在煙草叢頂病其他致病因子的侵染中可能起著某種重要的作用。另外，當(dāng)TVDV與TVDVaRNA共同出現(xiàn)時(shí)，與其他病原物的復(fù)合感染率也相較其他組合高（表3）。

2.3"2012年-2022年TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在云南煙草上的發(fā)生動(dòng)態(tài)

通過對(duì)2012年-2022年TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在云南煙草上的檢出情況進(jìn)行分析，不同年份的檢出情況都不同，其中每年都能檢測到單獨(dú)TVDV感染的情況，在2018年和2021年的煙草樣品中檢出煙草叢頂病致病因子的類型多樣。具體來說，2012年-2014年以TVDV+TVDVaRNA復(fù)合感染為主，檢出率為40.36%;2015年以TVDV單獨(dú)感染為主，檢出率為6.62%，其他類型的檢出率均低于2%;2018年以TVDV+TVDVaRNA復(fù)合感染為主，檢出率為23%;2019年主要是TVDV+TVDVaRNA和TBTV+TVDVaRNA的復(fù)合感染類型，檢出率均為8.33%;2020年主要以TVDV單獨(dú)感染為主，其檢出率為8.54%，其他感染類型檢出率低于3%;2021年檢出的煙草叢頂病致病因子類型較豐富，主要是以TVDV單獨(dú)感染最多，檢出率為12.74%，其次為TVDVaRNA檢出率5.98%，單獨(dú)感染，TVDV+TVDVaRNA的復(fù)合感染，檢出率為5.58%;2022年只存在TBTV、TVDV、TBTVsatRNA及TVDVaRNA單獨(dú)感染的檢出情況，除TVDVaRNA外，其他的檢出率不到0.4%，TVDVaRNA的檢出率也低于4%（圖1）。2021年-2022年TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在煙草上感染的檢出情況逐年變化，總體來看煙草上的檢出率在減少，TBTV+TVDV+TBTVsatRNA+TVDVaRNA復(fù)合感染檢出的情況僅在2012年-2014年、2015年和2018年的煙草樣品中出現(xiàn)，2018年后均未被檢測到，但TBTV、TVDV、TBTVsatRNA及TVDVaRNA基本都能在煙草上以單獨(dú)或者2～3種復(fù)合感染的類型被檢測到。

2.4"2012年-2022年TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在云南主要煙區(qū)的發(fā)生與分布

通過對(duì)云南省昆明市、玉溪市、曲靖市、楚雄州、大理州、保山市和紅河州7個(gè)煙區(qū)TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA檢出情況的分析發(fā)現(xiàn)，

能夠在煙草上產(chǎn)生煙草叢頂病典型癥狀的TBTV+TVDV+TBTVsatRNA+TVDVaRNA復(fù)合感染類型在保山市、楚雄州、大理州、昆明市和玉溪市都有發(fā)生。

在紅河州只能檢測到TVDV和TBTVsatRNA，在曲靖TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA均未檢測到。在保山市和楚雄州能夠檢測到TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA的12種感染類型，在大理州、昆明市、玉溪市和紅河州分別檢測到8種、7種、4種和2種感染類型（表4）。

楚雄、保山和大理煙區(qū)過去一直是煙草叢頂病主要發(fā)生地，目前TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA仍然在這些地區(qū)發(fā)生，且感染類型多樣，當(dāng)條件適合時(shí)，依然存在煙草叢頂病暴發(fā)的可能。而過去很少發(fā)生或尚未發(fā)生過煙草叢頂病的煙區(qū)，依然是零星發(fā)生或不發(fā)生，

如曲靖煙區(qū)一直未見煙草叢頂病發(fā)生的報(bào)道。

綜上所述，引起煙草叢頂病的TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在云南省大部分煙區(qū)有分布且感染類型多樣，目前主要發(fā)生在云南省保山市和楚雄州，在大理州和昆明市能檢測到大部分感染類型，在玉溪市和紅河州檢出的病原物感染類型較少，曲靖市還暫未發(fā)現(xiàn)TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA。

3nbsp;結(jié)論與討論

煙草叢頂病是20世紀(jì)90年代以來在云南西部煙區(qū)發(fā)生的一種特殊的危險(xiǎn)性病害，目前在中國僅見云南有發(fā)生的報(bào)道。煙草叢頂病曾經(jīng)給云南保山、大理等煙區(qū)帶來了巨大的損失，但近些年來，煙草叢頂病在云南已經(jīng)很少被發(fā)現(xiàn)。但由于引起煙草叢頂病的病原物種類較多，是目前已知植物病害中病原物種類最多的一種病害，只有TBTV、TVDV、TVTBsatRNA和TVDVaRNA同時(shí)感染普通煙‘K326’才會(huì)表現(xiàn)出煙草叢頂病的典型癥狀［15］。另外，研究發(fā)現(xiàn)，TBTV單獨(dú)感染的普通煙‘K326’主要表現(xiàn)為壞死，而單獨(dú)感染TVDV的普通煙‘K326’不表現(xiàn)明顯癥狀。TBTVsatRNA缺乏復(fù)制酶不能獨(dú)立完成復(fù)制，也不能完成在植物體內(nèi)的系統(tǒng)侵染，而TVDVaRNA自身含有復(fù)制酶單獨(dú)可以進(jìn)行復(fù)制，但不含系統(tǒng)移動(dòng)的相關(guān)蛋白，獨(dú)立情況下也無法完成在植物體內(nèi)的系統(tǒng)移動(dòng)，但TBTVsatRNA或TVDVaRNA均可以加重TBTV和TVDV在普通煙和本氏煙上的癥狀［17］。因此，雖然TVDV+TBTV+TVDVaRNA+TBTVsatRNA同時(shí)侵染引起煙草叢頂病的概率降低了，但致病因子單獨(dú)感染或復(fù)合感染依然能對(duì)煙草產(chǎn)生不同程度的危害，不能掉以輕心。

為探明這些年煙草叢頂病及TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在田間的發(fā)生情況，并分析煙草叢頂病在田間逐漸減少乃至消失的原因，通過對(duì)2012年-2022年間（2016年和2017年因故未開展）云南省7個(gè)州市主要煙區(qū)煙草叢頂病發(fā)生情況的調(diào)查以及利用TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA的特異性檢測引物，采用RTPCR技術(shù)對(duì)煙草樣品進(jìn)行檢測。發(fā)現(xiàn)除2019年和2020年外，TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA均有不同程度地檢出，但它們并不總是同時(shí)檢出，即使檢出，其檢出率也非常低，不到2%（2012年-2014年除外），而2018年后，基本上未發(fā)現(xiàn)TBTV+TVDV+TBTVsatRNA+TVDVaRNA復(fù)合感染類型。在田間，當(dāng)前TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA更多的情況下是以單一或2種復(fù)合感染的形式存在，總檢出率接近15%，而3種或4種組分復(fù)合感染的情況較為少見，總檢出率均在5%以下。由于煙草叢頂病典型癥狀的出現(xiàn)需要TBTV+TVDV+TBTVsatRNA+TVDVaRNA的共同侵染，田間TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA同時(shí)出現(xiàn)頻率較低或消失，可能是近些年很難在田間發(fā)現(xiàn)煙草叢頂病的主要原因。至于為什么TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在田間的檢出率越來越低目前尚不得而知，但這些年的追蹤調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在田間都有一定的檢出率，所以仍然存在TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA通過蚜蟲傳播而重新聚集在一起發(fā)生乃至暴發(fā)煙草叢頂病的風(fēng)險(xiǎn)。

我們前期的研究表明，TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA具有緊密的協(xié)生關(guān)系，如TBTV、TBTVsatRNA以及TVDVaRNA均依賴于TVDV進(jìn)行蚜蟲傳播，TVDV或TBTV均可以幫助TVDVaRNA在植物體內(nèi)進(jìn)行系統(tǒng)移動(dòng)，TBTVsatRNA在植物體內(nèi)的復(fù)制和系統(tǒng)移動(dòng)依賴TBTV，而TBTVsatRNA的存在能提高煙草叢頂病其他病原物的蚜蟲傳播效率［17］。本實(shí)驗(yàn)室多年的田間樣品檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，存在只檢測到TVDVaRNA或TBTVsatRNA而未檢測到TBTV、TVDV的情況，但檢出率不高，推測除了TBTV外，可能還有其他病毒能協(xié)助TBTVsatRNA在植物體內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和系統(tǒng)移動(dòng)，同樣的，除了TVDV和TBTV外，可能還存在其他病毒能協(xié)助TVDVaRNA在植物體內(nèi)進(jìn)行系統(tǒng)移動(dòng)的情況。由于本研究僅對(duì)與煙草叢頂病相關(guān)的TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA進(jìn)行檢測，未檢測其他病原物，故目前尚無法準(zhǔn)確分析為什么田間植物樣品存在只檢測到TVDVaRNA或TBTVsatRNA而未檢測到TBTV、TVDV的情況。本實(shí)驗(yàn)室前期從感染煙草叢頂病的煙草樣品中還檢測到了與TVDV同屬于馬鈴薯卷葉病毒屬的煙草馬鈴薯卷葉病毒1號(hào)（tobacco"polerovirus"1，TPV1）和煙草馬鈴薯卷葉病毒2號(hào)（tobacco"polerovirus"2，TPV2），檢出率達(dá)到15.15%［15］，推測這2種病毒也可能具有協(xié)助TVDVaRNA在植物體內(nèi)進(jìn)行系統(tǒng)侵染的能力。病毒的衛(wèi)星需要輔助病毒才能在植物體內(nèi)完成復(fù)制和系統(tǒng)移動(dòng)，一般來講，病毒的衛(wèi)星與其輔助病毒具有一一對(duì)應(yīng)關(guān)系，但也存在一種病毒的衛(wèi)星可以被另一種或多種病毒輔助完成植物體內(nèi)的復(fù)制和系統(tǒng)移動(dòng)的現(xiàn)象，如幽影病毒屬的花生叢簇病毒（groundnut"rosette"virus，GRV）及豌豆耳突花葉病毒2號(hào)（pea"enation"mosaic"virus"2，PEMV2）可以輔助彼此的衛(wèi)星RNA進(jìn)行復(fù)制和系統(tǒng)侵染［18］。我們最近的研究也發(fā)現(xiàn)，在PEMV2的協(xié)助下，TBTVsatRNA可以在煙草上進(jìn)行系統(tǒng)侵染，暗示PEMV2應(yīng)該也能協(xié)助TBTVsatRNA在煙草體內(nèi)的復(fù)制和系統(tǒng)侵染。另外，Dry和Behjatnia等在雙生病毒與異源衛(wèi)星DNA的互作研究結(jié)果表明，DNAβ衛(wèi)星對(duì)復(fù)制酶結(jié)合位點(diǎn)不具有嚴(yán)格的專化性，番茄曲葉病毒（tomato"leaf"curl"virus，TLCV）的衛(wèi)星DNA分子（tomato"leaf"curl"virus"satellite"DNA，TLCVsatDNA）能被番茄黃化曲葉病毒（tomato"yellow"leaf"curl"virus，TYLCV）、非洲木薯花葉病毒（African"cassava"mosaic"virus，ACMV）甚至甜菜曲頂病毒（beet"curly"top"virus，BCTV）輔助完成復(fù)制［1920］，即一種病毒的衛(wèi)星并不總是與其相應(yīng)的輔助病毒同時(shí)出現(xiàn)，也可以被相近的病毒輔助完成復(fù)制。

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，煙草叢頂病自2019年起即很難被發(fā)現(xiàn)，TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA的檢出率也在相應(yīng)降低，可能與煙草苗期消毒管理、田間施用蚜繭蜂防治煙蚜和培育抗病品種等田間管理措施相關(guān)［2123］。自1993年煙草叢頂病在保山煙區(qū)暴發(fā)以來，其病原物仍然主要在楚雄、保山和大理煙區(qū)發(fā)生，且感染類型多樣，而過去很少發(fā)生或尚未發(fā)生過煙草叢頂病的煙區(qū)，依然是零星發(fā)生或不發(fā)生。然而TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA也陸續(xù)在河南、西藏、海南、遼寧、陜西、內(nèi)蒙古、貴州和江蘇等地被發(fā)現(xiàn)［2426］，說明煙草叢頂病及其相關(guān)病原物的發(fā)生地區(qū)已經(jīng)不僅僅局限于云南。加之TBTV和TVDV較為廣泛的寄主范圍，能侵染番茄Solanum"lycopersicum、辣椒Capsicum"annuum、蠶豆Vicia"faba、豌豆Pisum"sativum、油菜Brassica"campestris和南瓜Cucurbita"moschata等經(jīng)濟(jì)作物以及龍葵Solanum"nigrum、鬼針草Bidens"pilosa和紫莖澤蘭Ageratina"adenophora等雜草［15，2728］，另外，單獨(dú)的TVDV還能侵染馬鈴薯Solanum"tuberosum、三七Panax"notoginseng、西葫蘆Cucurbita"pepo、藜麥Chenopodium"quinoa和豇豆"Vigna"unguiculata等［15，2930］，上述經(jīng)濟(jì)作物和雜草可能是TBTV和TVDV的中間寄主，對(duì)煙草叢頂病的病害循環(huán)具有重要作用。因此，我們推測，煙草叢頂病或煙草叢頂病相關(guān)病原物引起的其他植物病害可能會(huì)在國內(nèi)很多地區(qū)發(fā)生為害，應(yīng)該加以防范。

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