GC/MS法測定茶葉中雙甲脒及其代謝物殘留量

袁東婕

摘 要：目的：建立GC/MS法測定茶葉中雙甲脒及其代謝物殘留量的分析方法。方法：在酸性條件下將雙甲脒完全水解成2，4-二甲基苯胺，用正己烷-乙醚混合溶液提取，酸、堿液-液分配凈化，通過氣相色譜-質譜測定。結果：2，4-二甲基苯胺在0.02～1.00 μg·mL-1線性關系良好，相關系數（R2）為0.998 0，加標回收率為81.7%～86.9%，相對標準偏差為1.33%～2.45%，定量限為0.01 mg·kg-1。結論：該方法的實驗步驟簡單易操作，易于推廣，適用于茶葉中雙甲脒及代謝物的測定，可為目前茶葉中雙甲脒及代謝物的監管提供有效的技術支撐。

關鍵詞：GC/MS法；茶葉；雙甲脒

Determination of Residual Levels of Amitraz and Its Metabolites in Tea by GC/MS Method

YUAN Dongjie

（Anhui Public Inspection and Research Institute Co.， Ltd.， Hefei 230051， China）

Abstract： Objective： To establish a GC/MS method for the determination of amitraz and its metabolites in tea. Method： Amitraz was completely hydrolyzed to 2，4-dimethylaniline under acidic conditions， extracted with a mixed solution of n-hexane-ether， purified by acid and lye， and determined by gas chromatography-mass spectrometry. Result： The linear relationship of 2，4-dimethylaniline in the range of 0.02～1.00 μg·mL-1 was good， the correlation coefficient （R2） was 0.998 0， the recoveries were 81.7%～86.9%， the relative standard deviation was 1.33%～2.45%， and the limit of quantization was 0.01 mg·kg-1. Conclusion： The method is simple， easy to operate and easy to popularize. It is suitable for the determination of amitraz and metabolites in tea， and can provide effective technical support for the supervision of amitraz and metabolites in tea.

Keywords： GC/MS method; tea; amitraz

雙甲脒是一種廣譜性甲脒類殺蟲劑，屬于中等毒性殺螨劑。其主要在果樹、蔬菜、茶葉、棉花、大豆和甜菜等作物生產中應用，對木虱類、部分鱗翅目害蟲卵、蚧、蚜、棉鈴蟲、紅鈴蟲、牛羊蜱螨及蜂螨等有一定的防治效果。但是，雙甲脒及其代謝物對人的皮膚和黏膜有刺激性，對人體的中樞神經系統能產生抑制作用[1-5]。

茶葉是一種天然、綠色、健康的飲品，不僅具有提神清心、清熱解暑、消食化痰、抗癌、抗氧化、消炎和消除自由基等藥理作用，還具有美容保健、延年益壽和減肥等保健作用，已經成為人們日常生活的必需品。而茶葉的質量安全問題如農藥殘留問題成為人們關注的焦點。我國《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）[6]對茶葉的部分農藥最大殘留限量有一定要求，但針對茶葉中雙甲脒及其代謝物的限量標準未進行相應規定。然而，在茶葉種植過程中雙甲脒常作為殺螨劑用于茶樹的種植過程中，這給茶葉的食用安全帶來了潛在風險。

目前，針對雙甲脒及代謝物測定的相關標準有《蔬菜、水果、食用油中雙甲脒殘留量的測定》

（GB/T 5009.143—2003）[7]、《食品安全國家標準 蜂王漿中雙甲脒及其代謝產物殘留量的測定 氣相色譜-質譜法》（GB 23200.103—2016）[8]、《出口蜂王漿中雙甲脒及其代謝產物殘留量的測定 液相色譜-質譜/質譜法》（SN/T 2574—2019）[9]、《食品安全國家標準 牛奶中雙甲脒殘留標志物殘留量的測定 氣相色譜法》（GB 29707—2013）[10]及《蜂蜜中雙甲脒殘留量的測定 氣相色譜-質譜法》（農業部781號公告—8—2006）[11]，但這些標準中介紹的方法主要適用于蔬菜、水果、食用油、蜂蜜蜂王漿和牛奶等。針對茶葉中的雙甲脒及其代謝物的測定方法還沒有相關的國家或行業標準。基于此，本文建立了測定茶葉中雙甲脒及其代謝物的殘留量的氣相色譜質譜法，該方法主要是在酸水解和堿化的作用下，將雙甲脒轉化為2，4-二甲基苯胺，用正己烷-乙醚混合溶液提取，酸、堿液-液分配凈化，氣相色譜-質譜法測定。該方法為茶葉中雙甲脒及代謝物的測定提供了技術支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

2，4-二甲基苯胺標準品（1 000 ?g·mL-1），天津阿爾塔科技有限公司；正己烷、乙醚、丙酮，均為色譜純；鹽酸、氫氧化鈉，均為分析純；實驗室用水為超純水。

1.2 儀器與設備

GCMS-QP2010 U1tra氣相色譜質譜聯用儀，日本島津；分析天平，平梅特勒-托利斯（儀器）上海有限公司；離心機，上海安亭科學儀器廠；套式恒溫器，浙江新華醫療器械廠；XW-80A微型旋渦混合儀，上海滬西分析儀器廠有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 儀器條件

色譜柱型號：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；

進樣體積：1.0 μL；流速：1.0 mL·min-1；不分流進樣；色譜柱柱溫：50 ℃保持2 min，以10 ℃·min-1升至160 ℃，保持1 min，以30 ℃·min-1升至280 ℃，保持8 min；離子源類型：EI；離子源溫度：230 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；進樣口溫度：250 ℃；掃描模式：SIM模式；定性離子（m/z）：120、77；定量離子（m/z）：121。

1.3.2 標準溶液配制

準確吸取1.0 mL 2，4-二甲基苯胺標準物質于

10 mL棕色容量瓶中，用丙酮定容至刻度，得到濃度為100 μg·mL-1的標準儲備液。根據需要用丙酮配制系

列濃度為0.02 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.50 μg·mL-1和1.00 μg·mL-1的標準使用溶液。按照

1.3.1儀器條件對標準系列溶液進行測定。

1.3.3 樣品前處理

稱取粉碎均勻的試樣2 g（精確至0.01 g）于

150 mL圓底燒瓶中，加入2.0 mol·L-1鹽酸溶液

30 mL，于旋渦混合器上混勻。裝上回流冷凝裝置，120 ℃加熱回流2 h，停止加熱，在室溫下繼續通冷卻水15 min，移至冰浴中冷卻15 min。將水解液轉移到50 mL具塞離心管中，先加10 mL正己烷-乙醚（2+1，體積比）混合溶劑，再加4 mL氫氧化鈉溶液，渦旋混勻，在冰浴中冷卻5 min，以4 000 r·min-1離心3 min。將上層有機相轉移到另一個50 mL具塞離心管中。水相用2×10 mL正己烷-乙醚（2+1，體積比）混合溶劑萃取2次，合并上層有機相。用

2×5 mL鹽酸溶液萃取2次，合并鹽酸提取液并定容至10 mL，分取5 mL鹽酸提取液于10 mL具塞離心管中，加入2 mL正己烷-丙酮（2+1，體積比）混合溶劑，2 mL氫氧化鈉溶液萃取1次，離心分層，上層有機相供氣相色譜-質譜測定，外標法定量。

2 結果與分析

2.1 儀器方法的選擇

針對食品中雙甲脒及其代謝物的檢測方法主要有2種。①將雙甲脒在酸性條件下完全水解成2，4-二甲基苯胺，直接測定2，4-二甲基苯胺含量；②抑制雙甲脒的水解，用雙甲脒和其代謝物的標準溶液來定量雙甲脒及其代謝物的含量，但該方法多在氣相色譜-串聯質譜法（Gas Chromatography - Tandem Mass Spectrometry， GC-MS/MS）或超高效液相色譜-串聯質譜法（Ultra Performance Liquid Chromatography - Tandem Mass Spectrometry， UPLC-MS/MS）上應用。《蔬菜、水果、食用油中雙甲脒殘留量的測定》（GB/T 5009.143—2003）中是將雙甲脒水解成2，4-二甲基苯胺，用正己烷提取，酸堿反復液-液分配凈化，用七氟丁酸酐將2，4-二甲基苯胺衍生成2，4-二甲基苯七氟丁酰胺，ECD-GC測定。該方法中標液和提取液均需進行柱前衍生化，且衍生化步驟煩瑣，標液與樣液的衍生化反應須一致，否則會導致結果無可比性、準確度不高以及重現性差，進而容易造成較大的實驗誤差。本文在酸性條件下將雙甲脒完全水解成2，4-二甲基苯胺，然后用GC-MS法進行定性定量測定。該方法的準確度高，重復性好，不僅能有效避免衍生化反應不一致帶來的誤差，還能更好地避免GC方法帶來的假陽性現象。

2.2 標準曲線的建立

按照1.3.1儀器條件對標準系列溶液進行測定，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。結果表明，2，4-二甲基苯胺在0.02～1.00 μg·mL-1線性關系良好，線性方程為y=61 772.278 722x-

938.709 505，相關系數（R2）為0.998 0。另配制濃度為0.005 μg·mL-1的標準使用液，按照上述1.3.2的儀器條件平行測定20次，計算信噪比，以3倍信噪比計算其檢出限為0.003 mg·kg-1，以10倍信噪比計算其定量限為0.01 mg·kg-1。2，4-二甲基苯胺的總離子色譜圖見圖1，質譜圖見圖2。

2.3 回收率及精密度

稱取粉碎均勻的空白試樣，分別加入含2，4-二甲基苯胺0.3 ?g、2.0 ?g和4.0 ?g的標準溶液，每個濃度做6個平行樣，按照上述1.3.3試驗方法進行處理分析，計算回收率和精密度。由表1可知，2，4-二甲基苯胺的加標回收率為81.7%～86.9%，相對標準偏差（Relative Standard Deviation，RSD）為1.33%～2.45%，回收率和精密度均符合《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）[12]要求。

2.4 實際樣品測定

利用本文建立的方法對2023年抽取的70批次茶葉進行雙甲脒及其代謝物含量的測定，結果發現有1批次檢出2，4-二甲基苯胺，但低于定量限（0.01 mg·kg-1）。實驗結果表明市面上銷售的茶葉中雙甲脒及其代謝物的殘留量較低。

3 結論

本文建立了GC/MS法測定茶葉中雙甲脒及其代謝物殘留量的方法。結果表明，2，4-二甲基苯胺在0.02～1.00 μg·mL-1線性關系良好，相關系數（R2）為0.998 0。該方法的實驗步驟簡單易操作，易于推廣，方法的回收率和精密度均滿足GB/T 27404—2008要求，適用于茶葉中雙甲脒及代謝物的測定，為目前茶葉中雙甲脒及代謝物的監管提供了有效的技術支撐。

參考文獻

[1]王麗，魏茂瓊，康虹鈺，等.分散固相萃取凈化-超高效液相色譜-串聯質譜法測定蜂蜜中雙甲脒、殺蟲脒及其代謝物[J/OL].食品與發酵工業，1-8[2024-01-14].https：//doi.org/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.036706.

[2]譚亞軍，趙甲慧，李偉，等.柑橘類水果中雙甲脒及其代謝物的QuEChERS-GC/MS測定法[J].職業與健康，2022，38（17）：2328-2332.

[3]詹磊，郭紅勤.固相萃取-超高效液相色譜法測定柑橘中雙甲脒及其代謝產物殘留量[J].江蘇預防醫學，2023，34（2）：223-225.

[4]黃娟，桂茜雯，高玲，等.高效液相色譜-串聯質譜法測定蔬菜水果中雙甲脒及其代謝產物[J].色譜，2019，37（1）：2-7.

[5]朱作為，張文中，陳沙，等.氣相色譜-三重四極桿串聯質譜法測定大米、韭菜、茶葉3種基質中51種農藥殘留的研究[J].食品安全質量檢測學報，2018，9（6）：

1297-1307.

[6]國家衛生健康委員會，國家市場監督管理總局，農業農村部.食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量：GB 2763—2021[S/OL].（2021-03-03）[2024-01-03].http：//down.foodmate.net/standard/sort/3/108497.html.

[7]衛生部.蔬菜、水果、食用油中雙甲脒殘留量的測定：GB/T 5009.143—2003[S/OL].（2003-08-11）[2024-01-03].http：//down.foodmate.net/standard/sort/3/2821.html.

[8]國家衛生和計劃生育委員會，國家食品藥品監督管理總局，農業部.食品安全國家標準 蜂王漿中雙甲脒及其代謝產物殘留量的測定 氣相色譜-質譜法：GB 23200.103—2016[S/OL].（2016-12-18）[2024-01-03].http：//down.foodmate.net/standard/sort/3/50275.html.

[9]中華人民共和國海關總署.出口蜂王漿中雙甲脒及其代謝產物殘留量的測定 液相色譜-質譜/質譜法：

SN/T 2574—2019[EB/OL].（2019-12-27）[2024-01-03].https：//max.book118.com/html/2020/1103/6235013214003014.shtm.

[10]農業部，國家衛生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 牛奶中雙甲脒殘留標志物殘留量的測定 氣相色譜法：GB 29707—2013[S/OL].（2013-09-16）[2024-01-03].http：//down.foodmate.net/standard/sort/3/38211.html.

[11]中華人民共和國農業部.蜂蜜中雙甲脒殘留量的測定 氣相色譜-質譜法（農業部781號公告—8—2006）[EB/OL].（2006-12-16）[2024-01-03].https：//www.doc88.com/p-1952343397345.html.

[12]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.實驗室質量控制規范 食品理化檢測：GB/T 27404—2008[S/OL].（2008-05-04）[2024-02-14].https：//www.doc88.com/p-3774861932234.html.