不同發情處理方案對梅花鹿同期發情效果的影響

摘 要 為探索梅花鹿（Cervus nippon）最佳同期發情方案，在吉林省雙陽鹿業良種繁育有限公司挑選163只健康、發情周期正常、繁殖機能良好的供試母鹿隨機分為3組：A組采用國產陰道孕酮栓（CIDR），B組采用進口CIDR，C組采用二次前列腺素（PG），均輔以孕馬血清促性腺激素（PMSG）法處理。另挑選100只供試母鹿隨機均分為4組，采用篩選出的較優方案結合不同劑量PMSG法處理（Ⅰ組100 IU、Ⅱ組300 IU、Ⅲ組500 IU、Ⅳ組700 IU），探析不同發情處理方案對梅花鹿母鹿發情效果、發情時間分布、受胎率和雙胎率的影響以及不同PMSG劑量對母鹿發情受胎的影響。結果表明：A、B組同期發情率差異不顯著，但A、B組同期發情率分別較C組高23. 5%和33. 3%（plt;0. 01），且A組掉栓率較B組高8. 8%（plt;0. 05）；3種處理方案對發情時間分布的影響極顯著（plt;0. 01）；B組與A、C組比較，受胎率和產仔率分別高6. 5%和9. 8%（pgt;0. 05），雙胎率分別高13. 4%和17. 6%（pgt;0. 05）；采用進口CIDR輔以不同劑量PMSG法對梅花鹿進行同期發情處理，發現Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組同期發情率較Ⅰ組分別高36. 0%、40. 0%和48. 0%（plt;0. 05），呈隨PMSG 劑量升高而升高的趨勢，其他各組間差異不顯著（pgt;0. 05），但發情時間均集中在24～48 h，Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組受胎率分別為46. 2%、61. 9%、59. 1%和50. 0%，呈先升高后下降的趨勢（pgt;0. 05）。綜上所述，陰道埋栓的發情方案顯著好于二次PG法，進口CIDR優于國產CIDR；進口CIDR+PMSG法的母鹿發情率和受胎率隨PMSG劑量的增加而升高，但發情時間不受PMSG劑量的影響，PMSG適宜劑量為300 IU。

關鍵詞：梅花鹿；同期發情；陰道孕酮栓；前列腺素；孕馬血清促性腺激素

中圖分類號：Q954. 4；S865. 4+2 文獻標識碼：A 文章編號：2310 - 1490（2024）- 02 - 0262 - 07

DOI：10.12375/ysdwxb.20240204

我國東北地區梅花鹿（Cervus nippon）資源雖然較豐富，但由于母鹿個體發情時間分散且難以鑒定，其繁衍一直沿用傳統配種方法，無法最大限度發揮優良種公鹿的效能，因此嚴重制約梅花鹿產業的發展。產業發展良種先行，人工授精和胚胎移植等先進繁殖技術的推廣應用是加快梅花鹿良種化進程的有效途徑，而同期發情是必需的程序。同期發情技術是采用外源激素使母畜自然發情周期改變，讓母畜集中發情、配種和妊娠。國內外對鹿類同期發情技術均進行了探索研究［1?10］，但國內對梅花鹿同期發情的試驗效果［1，3，5?6，11］均不理想。因此，本試驗通過研究不同發情處理方案對梅花鹿母鹿發情效果、發情時間分布、受胎率和雙胎率的影響，以及不同孕馬血清促性腺激素（PMSG）劑量對母鹿發情受胎的影響，旨在探索最佳同期發情方案，為進一步提高和推廣梅花鹿人工繁殖技術奠定基礎。

1 材料與方法

1. 1 試驗動物

選擇健康、發情周期正常和繁殖機能良好的試驗梅花鹿母鹿263只，年齡5～9歲。選擇性器官發育良好、情欲充沛、膘肥體壯和膽小溫順的試情梅花鹿公鹿25只，年齡3～5歲。上述梅花鹿均由吉林省雙陽鹿業良種繁育有限公司提供。

1. 2 試驗藥品

麻藥眠乃靈、解藥蘇醒靈均購自吉林省華牧動物保健品有限公司，國產和進口陰道孕酮栓（cyc?logest intravaginal device release，CIDR）分別購自河南法牧農業科技有限公司和新西蘭哈密爾頓公司，前列腺素（PG）和孕馬血清促性腺激素（PMSG）購自寧波第二激素廠，優質高產梅花鹿冷凍精液（0. 25 mL/管）購自吉林省雙陽鹿業良種繁育有限公司。

1. 3 試驗設計

從263 只供試母鹿中隨機挑選163 只，分為3組：A組（58只）采用國產CIDR，B組（65只）采用進口CIDR，C組（40只）采用二次PG，均結合PMSG進行處理，篩選出較優處理方案。然后將剩余100只供試母鹿隨機均分為4組，采用較優處理方案，結合不同劑量PMSG，Ⅰ組100 IU、Ⅱ組300 IU、Ⅲ組500 IU、Ⅳ組700 IU。

1. 4 試驗方法

1. 4. 1 同期發情處理

在發情季節里任選一天，分批次麻醉供試母鹿。A、B組，植入CIDR，計為第0天，處理后用蘇醒靈解麻醉，在第12天取CIDR時肌內注射PMSG 350 IU。C組，第1次注射PG 0. 5 mg/只，計為第0天，第10天第2 次注射PG 0. 5 mg/只，第11 天肌內注射PMSG400 IU。較優方案+PMSG不同劑量處理組，較優方案處理第1天計為第0天，之后按較優方案PMSG注射時間分別注射PMSG 100、300、500、700 IU，篩選出最優處理方案。

1. 4. 2 發情鑒定

采用公鹿試情法鑒定母鹿是否發情。同期發情處理后的12 h，將帶試情布的試情公鹿按1∶15～1∶20與供試母鹿混群，每隔2～4 h 試情1 次，每次持續0. 5～1. 0 h，持續觀察96 h。當母鹿靜止站立、穩定接受公鹿爬胯時，記錄發情時間和母鹿耳號，并統計0～24 h、gt;24～48 h、gt;48～72 h和gt;72～96 h的母鹿發情數量。

1. 4. 3 人工輸精

供試母鹿經同期發情處理后，采用直腸把握法予以人工輸精，每只用量為1管解凍精液（精子活力保持在0. 3以上），僅輸精1次。

1. 4. 4 妊娠診斷

人工輸精后第10天，將試情公鹿放入配種后的母鹿群進行觀察，返情的母鹿判定為未受孕，未返情的母鹿判定為受孕。

1. 5 統計分析

利用SPSS 23. 0軟件中的χ2檢驗和精確檢驗比較分析不同組之間的差異；采用Z 檢驗邦弗侖尼法對不同發情時間母鹿發情比例的多重比較作顯著性分析。以plt;0. 05表示差異顯著，plt;0. 01表示差異極顯著。

2 結果

2. 1 不同發情處理方案對母鹿同期發情效果的影響

A、B兩組的同期發情率較C組分別高23. 5%和33. 3%（plt;0. 01）；B組同期發情率較A組高9. 8%（pgt;0. 05）；B組掉栓率較A組低8. 8%（plt;0. 05）（表1）。

2. 2 不同發情處理方案對母鹿同期發情時間分布的影響

3種處理方案對發情時間分布的影響差異極顯著（plt;0. 01）。表2多重比較表明，0～24 h的A組、B組和C組發情率分別為5. 2%、12. 3%和5. 0%，差異不顯著（pgt;0. 05）；gt;24～48 h的發情率分別為74. 1%、84. 6%和40. 0%，A、B兩組間無顯著差異（pgt;0. 05），C 組和A、B 組間均差異極顯著（plt;0. 01）；gt;48～72 h的發情率分別為19. 0%、3. 1% 和35. 0%，A、C 組間無顯著差異（pgt;0. 05），B和A、C組間均差異極顯著（plt;0. 01）；gt;72～96 h 的發情率分別為1. 7%、0 和20. 0%，A、B組間無顯著差異（pgt;0. 05），C和A、B組間均差異極顯著（plt;0. 01）。

2. 3 不同發情處理方案對受胎率、產仔率和雙胎率的影響

B組受胎率和產仔率均高于A組6. 5%，均高于C組9. 8%，雙胎率比A、C組分別高13. 4%和17. 6%（表3），但3種處理方案對母鹿受胎率、產仔率和雙胎率的影響均無顯著差異（pgt;0. 05）。

2. 4 不同劑量PMSG 對母鹿繁殖效果的影響

采用進口CIDR 輔以不同劑量PMSG 法對梅花鹿進行同期發情處理，經多重比較，發現Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組間無顯著差異（pgt;0. 05），但各組均與Ⅰ組差異顯著（plt;0. 05），各組發情時間主要分布于gt;24～48 h。各組間受胎率差異均不顯著（pgt;0. 05）（表4）。

3 討論

3. 1 梅花鹿同期發情效果分析

母鹿在未受精條件下，卵泡期（性興奮期）和黃體期（性靜止期）交替循環出現，構成完整的發情周期。若要母鹿進入卵泡期同時發情，關鍵是調控黃體期，使其同時終止，為引起同時發情創造一個共同的基準線。同期發情輔助藥物采用PMSG。本研究采用延長和縮短黃體期的2種方案，3種處理方式進行同期發情處理，得到同期發情率：國產CIDR組為81. 0%，進口CIDR 組為90. 8%，二次PG 處理組為57. 5%。不同CIDR處理組之間差異不顯著，但均顯著高于二次PG處理組（plt;0. 05）。國產和進口CIDR處理組的掉栓率分別為10. 3% 和1. 5%，差異顯著（plt;0. 05），這可能與CIDR裝置采用的發泡硅橡膠的品質不同有關。佟敬賓等［12］研究報道，利用自制海綿栓+PMSG和進口CIDR+PMSG對東北馬鹿（Cervuselaphus xanthopygus）進行同期發情處理后，發現同期發情率均優于二次PG+PMSG處理，但二者無顯著差異，本試驗結果與之相似。趙喜堂等［13］在對塔里木馬鹿（C. e. yarkandensis）同期發情的研究中，利用CIDR+PMSG 獲得了相近的同期發情率。任航行等［14］應用國產CIDR+PMSG 對梅花鹿進行處理，得到了100%同期發情率，這可能與試驗所選母鹿數量少（5只）有關。劉麗娟等［15］對馬鹿采用二次PG輔以PMSG的處理方式，發現同期發情率達93. 3%，遠高于本試驗結果。出現這些差異，除與試驗品種、數量有關外，還可能與母鹿的營養狀況、生殖狀況、藥品選擇和季節條件等影響同期發情效果的因素有關［16］。另外，應激反應對發情效果也具有一定影響［15］。梅花鹿野性較強，與一般家畜相比，對外界環境變化或刺激更敏感［17］，且由于個體差異也會產生不同程度的應激反應，反應小的母鹿發情效果相對較好，反之發情效果較差。馬澤芳等［18］采用二次PG配合PMSG和HCG對梅花鹿進行同期發情處理，發現PG高劑量組（600 μg/只）和低劑量組（500 μg/只）的同期發情率分別為25. 0%和14. 2%，低于本試驗結果，這可能是由激素的選擇、搭配、生產廠家和用量不同等因素導致。

同期發情技術是調控梅花鹿高效繁殖的核心技術之一，其目的是使母鹿在短時間內集中發情，發情時間集中程度越高，越利于對母鹿集中試情和定時人工輸精，實現集中配種和產仔，方便生產管理集中進行，最大限度節約成本。有研究表明，在同種藥物作用下，母鹿自身對同種激素的敏感性有差異［19］。為此，本試驗應用不同激素對梅花鹿進行同期發情處理，發現母鹿發情時間分布各組之間差異顯著，即B 組（進口CIDR）gt;A 組（國產CIDR）gt;C 組（二次PG處理）。Willard等［9］應用CIDR結合PMSG處理梅花鹿，于CIDR取出后（34. 6±1. 9） h發情。魏海軍等［20］應用進口CIDR 和PMSG 誘導梅花鹿同期發情，于CIDR取出后（33. 3±7. 0） h發情。以上研究表明，進口CIDR結合PMSG誘導梅花鹿發情時間集中程度高，絕大多數集中在24～48 h，與本試驗結果相符。二次PG處理法同期發情時間比較分散，主要是因為鹿是季節性發情動物，每年春季產仔，秋季發情，循環往復。在發情季節，一般也僅有1～3個發情周期，由于PG具有高效溶解黃體的作用［21］，而此時卵巢上可能尚未形成黃體。另外鹿存在個體差異，對PG的反應易造成發情時間分散。受胎率和產仔率是衡量生產效率的重要指標，其高低直接影響養鹿業的經濟效益。呂津等［22］報道，孕酮可減少早期胚胎的退化進而提高受胎率。本研究應用不同藥物對母鹿進行同期發情處理，發現各組受胎率略有差異但不顯著，這與韓志強等［23］研究報道的不同方法對同期發情后妊娠率無顯著影響的結果相似。趙列平等［11］研究發現，CIDR放置11 d，將梅花鹿深度麻醉，用直腸把握法將凍精進行輸精，受胎效果較好，平均受胎率為58. 6%，與本試驗結果基本符合。蔣濤等［24］利用CIDR+PMSG對天山馬鹿（C. e. songaricus）做同期發情處理，獲得57. 5%的受胎率，與本試驗相近。王全凱等［25］應用進口CIDR結合PMSG對梅花鹿進行同期發情處理，發現母鹿平均受胎率為62. 45%；向振博等［26］采用相同方式進行同期發情處理，鹿受胎率達71. 8%。劉麗娟等［15］利用二次PG 結合PMSG 處理馬鹿，取得了73. 3%的受胎率。以上研究的受胎率絕大多數均高于本試驗，此差異除受鹿體膘情、經產與否和輸精時間等因素的影響外［27］，也可能與輸精技術熟練程度有關［24］。梅花鹿自然發情的雙胎率為2. 99%［28］，本試驗CIDR+PMSG處理組獲得的梅花鹿母鹿雙胎率均高于自然發情，進一步證實CIDR+PMSG具有誘發母鹿排雙卵的作用，與趙列平等［11］的研究結果相符。雖然激素藥物的使用能提高雙胎率，但同期發情的3組間雙胎率均不理想，可能是供試母鹿自身卵巢機能所限，每個發情周期內成熟的卵泡數量較少。

3. 2 PMSG 劑量對母鹿繁殖效果的影響

PMSG可促進卵泡生長發育、成熟排卵和黃體形成，生產中廣泛應用于母畜繁殖和生殖系統疾病的治療。本研究利用進口CIDR結合肌內注射不同劑量的PMSG對梅花鹿進行同期發情處理，結果顯示發情時間趨勢大致相同，24～48 h內各組發情率分別為75. 0%、85. 7%、86. 4% 和79. 2%，發情時間相對集中，與魏海軍等［20］的研究結果相似。張振良等［29］采用相同方法對同為季節性發情的動物巴什拜羊進行處理后，發現其發情時間主要集中在24～48 h，與本研究結果相符。本試驗對Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別肌內注射PMSG 100、300、500、700 IU，發現供試母鹿同期發情率有增高的趨勢，這與魏海軍等［20］的結論相符。佟敬賓等［12］在CIDR結合不同劑量PMSG對馬鹿發情影響的研究中，也得出相同結論。本研究同期發情率除Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組與Ⅰ組差異顯著外，其他各組間差異不顯著，這可能是梅花鹿自身體質對激素刺激不敏感導致。

本試驗中，隨著PMSG劑量的增加，受胎率出現先升高后下降的趨勢，但各組之間差異不顯著，這可能是PMSG 對卵巢發育存在最適閾濃度［30］。當PMSG劑量過低時，PMSG無法有效促進卵泡生長，提高繁殖力；當PMSG 劑量過高時，由于其半壽期長，體內殘留時間長，易引起卵泡過度生長，誘發卵巢囊腫，從而阻礙胚胎的發育著床。

4 結論

在繁殖季節里，綜合比較母鹿同期發情率、掉栓率、發情時間集中程度、受胎率、產仔率和雙胎率，陰道埋栓的發情方案顯著好于二次PG法，進口CIDR優于國產CIDR。進口CIDR+PMSG法的發情率和受胎率隨PMSG劑量的增加而升高，但發情時間不受PMSG劑量的影響，PMSG適宜劑量為300 IU。

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基金項目：吉林省重點科技研發項目（212GN01）