不同水平枯草芽孢桿菌對南美白對蝦免疫力的影響

摘" 要：為探討不同水平的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）對南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）機體非特異性免疫力的影響，該試驗選擇600尾體重約為0.45g健康的南美白對蝦，按照單因素試驗設計，分成4個組，每組3個重復，每個重復50尾南美白對蝦。各組分別投喂含有0%（對照組）、0.5%、1.0%和1.5%的枯草芽孢桿菌的基礎飼料。投喂8周后，采集血液，檢測血清非特異性免疫指標。結果顯示，與對照組比較，試驗2組的南美白對蝦血清中溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化物酶活性顯著提高（Plt;0.05），試驗2組和試驗3組南美白對蝦血清中過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活性顯著提高（Plt;0.05）。研究表明，在南美白對蝦養殖生產中添加一定劑量的枯草芽孢桿菌可以提高機體的非特異性免疫力，且適宜添加量為1.0%。

關鍵詞：枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）；非特異性免疫；南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）

中圖分類號：S966.12文獻標志碼：A" "文章編號：1674-2419（2024）03-0294-03

南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）是中國主要的蝦養殖品種之一，具有生長快、適應強等特點，養殖量逐漸增加[1]。近些年，南美白對蝦養殖中頻發疾病，給其養殖業帶來巨大的經濟損失，主要是由于養殖密度過大、防治疾病過程中抗生素的濫用等問題[2]。尋找南美白對蝦的無抗養殖方式，提高養殖效益，是目前南美白對蝦養殖的主要解決問題之一。益生菌制劑是一種無殘留、高效、無毒副作用的一種飼料添加劑[3]。在動物養殖生產中添加適量的益生菌制劑可以抑制腸道中有害微生物的繁殖生長，刺激機體免疫系統，增強機體的抗病力，提高生長性能，是抗生素的理想替代品[4-5]。其中，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）是一種好氧型、革蘭氏陽性益生菌，具有耐膽鹽、耐高溫等特點，在飼料制粒高溫過程中仍然保持較高的活性，在極端條件下，可以產生內源性孢子[6]。目前，枯草芽孢桿菌在水產生物養殖中應用逐漸增多。張晶晶等[7]研究了枯草芽孢桿菌對氨氮脅迫下半滑舌鰨的免疫力及血液指標的影響，發現枯草芽孢桿菌通過改善半滑舌鰨機體的免疫力及抗氧化功能減輕氨氮脅迫下對其機體產生的負面影響。李軍亮等[8]研究了枯草芽孢桿菌對凡納濱對蝦機體免疫力、抗病力及生長性能的影響，發現適量的枯草芽孢桿菌可以顯著提高凡納濱對蝦的免疫力、抗病力，進而改善生長性能，且枯草芽孢桿菌在凡納濱對蝦養殖中的最適添加水平為0.73%。目前，枯草芽孢桿菌在水產動物養殖生產中的應用研究結果不完全相同，因此，該試驗以南美白對蝦為研究對象，探討不同水平的枯草芽孢桿菌對其機體非特異性免疫力的影響，為枯草芽孢桿菌高效地應用于水產動物養殖中提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 枯草芽孢桿菌和試驗對蝦

研究中采用的枯草芽孢桿菌活性大于1.0×108 cfu/g，由山東寶來利來生物有限公司提供。試驗用的南美白對蝦來自寧夏回族自治區銀川市賀蘭縣晶誠水產養殖有限公司。

1.2 試驗方法

研究選擇600尾體重約為0.45 g健康的南美白對蝦，按照單因素試驗設計，分成4個組，每組3個重復，每個重復50尾南美白對蝦。各組南美白對蝦分別投喂含有0%（對照組）、0.5%、1.0%和1.5%的枯草芽孢桿菌的基礎飼料。投喂8周，采集血液，檢測血清非特異性免疫指標。試驗設計見表1。

1.3 南美白對蝦基礎飼料

試驗中，南美白對蝦的基礎飼料購買于海大飼料有限公司，其營養水平見表2。將購買的對蝦基礎飼料粉碎后，各組按照不同比例的枯草芽孢桿菌混勻，制成1.5 mm的顆粒飼料，風干后4℃保存。

1.4 養殖管理

南美白對蝦蝦苗在水泥池中暫養7 d后，選擇體質健康的初重約為4.5 g的南美白對蝦進行試驗。將每個重復的南美白對蝦飼養于0.3 m3的玻璃纖維鋼桶中。每日在7：30、13：00和18：30投喂3次，每日根據天氣、南美白對蝦的生長情況調整投喂量。每日換水量為1/2，水溫控制在30 ℃，pH值控制在8，鹽度約為30‰，氨氮濃度≤0.035 mg/L。

1.5 非特異性免疫指標

試驗結束后，從每個重復中選擇5尾健康的南美白對蝦，圍心腔抽取血液，4000 r/min離心8 min，取其上層血清，用于檢測溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、過氧化氫酶、酚氧化物酶、超氧化物歧化酶等非特異性免疫指標。

1.6 數據分析

各組南美白對蝦的非特異性免疫指標采用SAS 9.5進行差異顯著性分析，差異顯著后，采用LSD方法比較組間數據差異性。結果用平均值表示，Plt;0.05代表數據采用顯著。

2 結果

不同水平的枯草芽孢桿菌對南美白對蝦機體非特異性免疫力的影響見表3，與對照組比較，試驗2組的南美白對蝦血清中溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化物酶活性顯著提高（Plt;0.05），試驗組2和試驗組3南美白對蝦血清中過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活性顯著提高（Plt;0.05）。研究表明，在南美白對蝦養殖生產中添加一定劑量的枯草芽孢桿菌可以提高機體的非特異性免疫力，且適宜添加量為1.0%。

3 討論

隨著水產動物養殖密度的加大，水質污染、機體免疫力下降等問題，導致水產動物疾病頻發，給養殖者帶來一定的負面經濟影響。該研究中，在南美白對蝦養殖中添加適量的枯草芽孢桿菌可以提高其血清中的非特異性免疫酶活性，增強了機體的抵抗力。于道德等[9]在凡納濱對蝦的試驗中，使用適量的枯草芽孢桿菌顯著降低了機體谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活性，顯著提高了酚氧化物酶、超氧化物歧化酶活性及溶菌酶活性，并提高了血細胞吞噬率，明顯改善了機體的非特異性免疫力，進而提高了對蝦的增重率及特定生長率等生長性能指標。在羅非魚的試驗中，添加適量的枯草芽孢桿菌也顯著增強了機體的非特異性免疫功能[10]。枯草芽孢桿菌在魚類腸道中消耗氧氣，抑制有害菌的生長，促進消化酶的分泌，提高機體的消化吸收能力，增強了機體的抗病力。

4 結論

該試驗條件下，在南美白對蝦養殖生產中添加一定水平的枯草芽孢桿菌可以有效提高血清中溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化物酶、過氧化氫酶及超氧化物歧化酶活性，提高了機體的非特異性免疫力，綜合各項指標數據考慮，枯草芽孢桿菌的最適添加水平為1.0%。

參考文獻：

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[8]李軍亮，楊奇慧，譚北平，等.低魚粉飼料添加枯草芽孢桿菌對凡納濱對蝦幼蝦生長性能、非特異性免疫力及抗病力的影響[J].動物營養學報，2019，31（5）：2212-2221.

[9]于道德，陳勝林，郭少菁，等.飼料中添加枯草芽孢桿菌HSP05對凡納濱對蝦生長性能、抗病力和非特異性免疫力的影響[J].動物營養學報，2022，34（10）：6634-6642.

[10]劉海天.枯草芽孢桿菌HAINUP40對羅非魚生長、消化酶活性及非特異性免疫的研究[D].海口：海南大學，2016.

Effects of different levels of Bacillus subtilis on immunity of Litopenaeus vannamei

WEI Chunli

（Helan County Agriculture and Rural Affairs Bureau， Yinchuan 750200， Ningxia China）

Abstract：In order to explore the effects of different levels ofBacillus subtilis on the nonspecific immunity of the organism of Litopenaeus vannamei， 600 healthy Litopenaeus vannamei weighing about 0.45 g were selected for this experiment， which were divided into four groups of three replicates each according to a one-way experimental design， with each replicate of each group was divided into four groups with three replicates， each with 50 shrimps. Each group was fed a basal diet containing 0% （control）， 0.5%， 1.0% and 1.5% Bacillus subtilis， respectively. After 8 weeks of feeding， blood was collected and tested for serum non-specific immunity indexes. The results showed that lysozyme， alkaline phosphatase， acid phosphatase， and phenoloxidase activities were significantly higher （Plt;0.05） in the serum of Litopenaeus vannamei in test group 2 compared with the control group， and catalase and superoxide dismutase activities were significantly higher （Plt;0.05） in the serum of Litopenaeus vannamei in both test group 2 and test group 3. The study showed that the addition of a certain dose of Bacillus subtilis in the production of Litopenaeus vannamei culture can improve the non-specific immunity of the organism， and the appropriate amount is 1.0%.

Keywords：Bacillus subtilis; non-specific immunity; Litopenaeus vannamei

作者簡介：魏春麗（1983.2- ）女、漢族，遼寧人。主要從事水產養殖技術工作。E-mail：470516089@qq.com。