血清TIM-4、HBD2表達水平與肺炎支原體肺炎兒童病情的相關性研究

［摘"要］目的"探討血清T細胞免疫球蛋白與黏蛋白域分子-4（TIM-4）和人β-防御素2（HBD2）表達水平與肺炎支原體肺炎（MPP）兒童病情的相關性。方法"選取本院于2020年7月至2023年1月收治的142例MPP患兒為研究對象，根據病情嚴重程度分為普通MPP組（n=99）和難治性MPP組（n=43），另選取同期140例健康體檢兒童為對照組。使用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清TIM-4和HBD2水平；收集患兒臨床資料，并采用多因素Logistic回歸分析發生難治性MPP的影響因素；使用受試者工作特征（ROC）曲線分析血清TIM-4和HBD2水平對難治性MPP的診斷價值。結果"普通MPP組和難治性MPP組在發熱時間、住院時間、阿奇霉素治療時間、中性粒細胞百分比、白細胞計數、反復呼吸道感染、肺外并發癥方面比較差異具有統計學意義（t/χ2值介于2.195～21.265，P＜0.05）；與對照組相比，研究組血清TIM-4和HBD2表達水平均明顯升高（t=34.527、40.646，P＜0.001）；與普通MPP組相比，難治性MPP組血清TIM-4和HBD2表達水平均明顯升高（t=12.410、15.316，P＜0.001）；多因素Logistic回歸分析結果顯示，血清TIM-4水平（OR=1.423，95%CI：1.140～1.776）、HBD2水平（OR=1.436，95%CI：1.162～1.775）、發熱時間（OR=1.349，95%CI：1.056～1.724）、中性粒細胞百分比（OR=1.334，95%CI：1.032～1.725）、反復呼吸道感染（OR=1.521，95%CI：1.245～1.858）和肺外并發癥（OR=1.432，95%CI：1.152～1.780）均是發生難治性MPP的獨立危險因素（P＜0.05）。ROC結果顯示，血清TIM-4水平單獨診斷難治性MPP發生的曲線下面積（AUC）為0.845（95%CI：0.774～0.900），靈敏度、特異度分別為69.77%、85.86%；血清HBD2水平單獨診斷難治性MPP發生的AUC為0.815（95%CI：0.742～0.875），靈敏度、特異度分別為74.42%、82.83%；二者聯合診斷難治性MPP發生的AUC為0.908（95%CI：0.848～0.950），靈敏度、特異度分別為90.70%、81.82%，顯著高于血清TIM-4水平單獨診斷（Z=2.047，P=0.040）和血清HBD2水平單獨診斷（Z=2.443，P=0.015）。結論"血清TIM-4及HBD2水平在肺炎支原體肺炎兒童中表達升高，且二者水平對難治性肺炎支原體肺炎具有一定診斷價值。

［關鍵詞］肺炎支原體肺炎；T細胞免疫球蛋白與黏蛋白域分子-4；重組人β-防御素2

Doi：10.3969/j.issn.1673-5293.2024.10.07

［中圖分類號］R725""""［文獻標識碼］A

［文章編號］1673-5293（2024）10-0037-06

The correlation between the expression levels of serum TIM-4 and HBD2 and

the condition of children with Mycoplasma pneumoniae pneumonia

ZHANG Juan，XU Jianying，HE Miao

（Department of Pediatrics，Jiangyou 903 Hospital，Sichuan Mianyang 621700，China）

［Abstract］ Objective To explore the correlation between the expression levels of serum T cell immunoglobulin and mucin domain molecule-4 （TIM-4） and human β-defensin 2 （HBD2） and the disease of children with Mycoplasma pneumoniae pneumonia （MPP）. Methods A total of 142 children with MPP admitted to our hospital from July 2020 to January 2023 were collected as the study subjects，and according to the severity of their diseases，they were divided into the ordinary MPP group （n=99） and the refractory MPP group （n=43），and 140 children with healthy physical examination during the same period were selected as the control group.Enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） was applied to detect serum TIM-4 and HBD2 levels;the clinical data of pediatric patients were collected，and the influencing factors of refractory MPP were analyzed by multivariate logistic regression analysis;receiver operating characteristic （ROC） curves were applied to analyze the diagnostic value of serum TIM-4 and HBD2 levels in refractory MPP. Results There were statistically significant differences between the ordinary MPP group and the refractory MPP group in terms of fever duration，hospital stay，azithromycin treatment time，neutrophil percentage，white blood cell count，recurrent respiratory tract infections，and extrapulmonary complications （t/χ2 value ranged from 2.195-21.265，P＜0.05）;compared with the control group，the expression levels of serum TIM-4 and HBD2 in the study group were significantly higher （t=34.527 and 40.646，respectively， P＜0.05）;compared with the ordinary MPP group，the expression levels of serum TIM-4 and HBD2 in the refractory MPP group were significantly higher （t=12.410 and 15.316，respectively， P＜0.001）.The results of multivariate logistic regression analysis showed that serum TIM-4 level（OR=1.423，95%CI：1.140-1.776），HBD2 level（OR=1.436，95%CI：1.162-1.775），fever duration（OR=1.349，95%CI：1.056-1.724），neutrophil percentage（OR=1.334，95%CI：1.032-1.725），recurrent respiratory infections（OR=1.521，95%CI：1.245-1.858），and extrapulmonary complications（OR=1.432，95%CI：1.152-1.780） were all independent risk factors for the development of refractory MPP （P＜0.05）.The ROC results showed that the area under the curve （AUC） of serum TIM-4 level in the diagnosis of refractory MPP alone was 0.845 （95%CI：0.774-0.900），and the sensitivity and specificity were 69.77% and 85.86%，respectively;the AUC of serum HBD2 level alone in the diagnosis of refractory MPP was 0.815 （95%CI：0.742-0.875），and the sensitivity and specificity were 74.42% and 82.83%，respectively;the AUC of refractory MPP diagnosed by the combination of the two was 0.908 （95%CI：0.848-0.950），and the sensitivity and specificity were 90.70% and 81.82%，respectively，which was significantly higher than those of serum TIM-4 level alone （Z=2.047，P=0.040） and serum HBD2 level alone （Z=2.443，P=0.015）. Conclusion The expression of serum TIM-4 and HBD2 is increased in children with Mycoplasma pneumoniae pneumonia，and their levels are elevated in the diagnosis of refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia.

［Key words］ Mycoplasma pneumoniae pneumonia;T cell immunoglobulin and mucin domain molecule-4;recombinant human β-defensin 2

肺炎支原體肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是由肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）引起的下呼吸道感染，具有一定的傳染性，可通過直接接觸或飛沫傳播，易發于兒童及青少年［1-2］。MPP的臨床癥狀表現為身體酸痛、乏力、發熱、咳嗽、咽痛、頭痛等，部分伴隨多形紅斑、皮疹等癥狀［3］。臨床上一般采用阿奇霉素等大環內酯類藥物治療MPP，但有些兒童治療1周甚至更長時間后，肺部影像學檢查及臨床癥狀顯示病情未得到緩解反而惡化，即為難治性MPP［4］。與普通MPP相比，難治性MPP病情發展迅速、病程延長，因此，對難治性MPP做出及時診斷尤為重要［5］。研究表明，T細胞免疫球蛋白與黏蛋白域分子（T cell immunoglobulin and mucin domain molecule，TIM）和人β-防御素（human β-defensin，HBD）與肺炎、肺發育等相關疾病的發生發展有關，但血清TIM-4及HBD2與MPP兒童病情嚴重程度的相關性尚不清楚［6-7］。因此，本研究通過檢測MPP患兒血清TIM-4及HBD2表達水平，分析血清TIM-4及HBD2表達與MPP兒童病情的關系，為MPP的病情診斷和治療提供參考價值。

1資料與方法

1.1一般資料

利用公式N=Z2×［P×（1-P）］/E2計算樣本量，置信度為95%時，統計量Z為1.96，誤差E按照7%計算，概率值P按照0.5計算得樣本量N≈137，樣本量最低為137例。選取本院于2020年7月至2023年1月收治的142例MPP患兒為研究組，其中男性73例、女性69例，平均年齡（8.37±1.69）歲，平均體質量指數（21.34±2.20）kg/m2。

納入標準：①符合《兒童社區獲得性肺炎診療規范（2019年版）》中的診斷標準［8］；②年齡不超過18歲；③患兒精神狀態正常，依從性良好。排除標準：①病原不明確；②合并其它感染；③呼吸系統發育不良；④伴有哮喘或其它呼吸道疾病；⑤合并自身免疫性疾病、惡性血液疾病。另選取同期一般資料與研究組相匹配的健康體檢兒童140例為對照組，其中男性75例、女性65例，平均年齡（8.64±1.71）歲，平均體質量指數（20.95±2.32）kg/m2，與研究組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

本研究經醫學倫理委員會審批通過（批號：2020021605），所有研究對象的監護人均知情同意且自愿參與研究。

1.2方法

1.2.1血清TIM-4和HBD2表達水平檢測

患兒于入院時、健康兒童于體檢時抽取空腹外周靜脈血3mL，采用酶聯免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清TIM-4和HBD2水平。TIM-4 ELISA試劑盒（貨號：JL19834）購自上海江萊生物科技有限公司；HBD2 ELISA試劑盒（貨號：1529715843）購自上海江萊生物科技有限公司。

1.2.2病情嚴重程度

根據《兒童社區獲得性肺炎診療規范（2019年版）》診斷標準［8］將142例患兒分為普通MPP組（n=99）和難治性MPP組（n=43）。

1.2.3資料收集

收集142例患兒臨床資料：年齡（歲）、體質量指數（kg/m2）、發熱時間（天）、住院時間（天）、阿奇霉素治療時間（天）、中性粒細胞百分比（%）、白細胞計數（×109/L）、性別、是否反復呼吸道感染、是否有肺外并發癥。

1.3統計學分析

采用SPSS 22.0軟件進行統計分析。計數資料以例數（百分比）［n（%）］表示，行χ2檢驗，正態分布計量資料（血清TIM-4和HBD2水平等）以均數±標準差（x-±s）表示，行獨立樣本t檢驗。多因素Logistic回歸分析法（逐步向前法篩選自變量）分析發生難治性MPP的影響因素；受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析血清TIM-4和HBD2水平對難治性MPP的診斷價值。以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2結果

2.1普通MPP組和難治性MPP組臨床資料比較

普通MPP組和難治性MPP組發熱時間分別為4天～10天，6天～13天；住院時間分別為7天～15天，8天～17天；阿奇霉素治療時間分別為6天～12天，7天～14天；普通MPP組中性粒細胞百分比42.55%～71.46%，難治MPP組中性粒細胞百分比50.67%～84.77%，5例超出75%，占比11.63%；普通MPP組白細胞計數為3.92×109/L～13.35×109/L，7例超出12×109/L，占比7.07%，難治性MPP組白細胞計數為5.03×109/L～14.38×109/L，6例超出12×109/L，占比13.95%。普通MPP組肺外并發癥發生情況：3例心肌炎、2例心肌損傷、2例胸腔積液，難治性MPP組肺外并發癥發生情況：4例心肌炎、3例心肌損傷、3例胸腔積液、2例腦炎、1例貧血。普通MPP組和難治性MPP組在發熱時間、住院時間、阿奇霉素治療時間、中性粒細胞百分比、白細胞計數、反復呼吸道感染、肺外并發癥方面比較差異具有統計學意義（t/χ2值介于2.195～21.265，P＜0.05）。

2.2研究組和對照組血清TIM-4和HBD2表達水平比較

與對照組相比，研究組血清TIM-4和HBD2表達水平均明顯升高，差異具有統計學意義（t=34.527、40.646，P＜0.001）。見表2。

2.3普通MPP組和難治性MPP組血清TIM-4和HBD2表達水平比較

與普通MPP組相比，難治性MPP組血清TIM-4和HBD2表達水平均明顯升高，差異具有統計學意義（t=12.410、15.316，P＜0.001）。見表3。

2.4發生難治性MPP的多因素Logistic回歸分析

多因素Logistic回歸分析中利用逐步向前法篩選自變量，結果顯示，血清TIM-4水平（OR=1.423，95%CI：1.140～1.776）、HBD2水平（OR=1.436，95%CI：1.162～1.775）、發熱時間（OR=1.349，95%CI：1.056～1.724）、中性粒細胞百分比（OR=1.334，95%CI：1.032～1.725）、反復呼吸道感染（OR=1.521，95%CI：1.245～1.858）和肺外并發癥（OR=1.432，95%CI：1.152～1.780）均是發生難治性MPP的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

2.5血清TIM-4和HBD2水平對難治性MPP的診斷價值

以血清TIM-4水平和血清HBD2水平為檢驗變量，以難治性MPP的發生與否為因變量繪制ROC曲線，結果顯示，血清TIM-4水平單獨診斷難治性MPP的發生的曲線下面積（area under the curve，AUC）為0.845（95%CI：0.774～0.900），靈敏度、特異度分別為69.77%、85.86%，最佳截斷值為1.92ng/mL；血清HBD2水平單獨診斷難治性MPP的發生的AUC為0.815（95%CI：0.742～0.875），靈敏度、特異度分別為74.42%、82.83%，最佳截斷值為155.53pg/mL；兩者聯合診斷難治性MPP的發生的AUC為0.908（95%CI：0.848～0.950），靈敏度、特異度分別為90.70%、81.82%。兩者聯合診斷的AUC顯著大于血清TIM-4水平單獨診斷的AUC（Z=2.047，P=0.040）和血清HBD2水平單獨診斷的AUC（Z=2.443，P=0.015）。見表5和圖1。

3討論

MPP具有一定自限性，但隨著抗生素的廣泛使用及耐藥菌株的增多，難治性MPP的發病率也在不斷增加［9］。常規治療藥物對于難治性MPP的療效不佳，及時診斷對于縮短病程、減少并發癥至關重要［10］。因此，探討血清TIM-4和HBD2與MPP兒童病情的關系具有重要意義。

3.1 TIM-4和HBD2研究現狀及作用機制

TIM-4為TIM家族成員之一，是一種Ⅰ型跨膜糖蛋白，其基因定位于人5號染色體上，多表達于巨噬細胞和樹突狀細胞的細胞膜表面，參與機體免疫反應、炎癥反應等過程的調節［11-12］。禹萌等［13］研究表明，TIM-4在腦卒中后肺部感染患者血清中水平升高，對腦卒中后肺部感染具有一定的預測價值，作者推測TIM-4通過影響巨噬細胞活化過程介導炎癥反應。桓樂等［14］進行的研究也表明，支氣管哮喘急性發作患者血清中TIM-4水平明顯升高，且與患者病情嚴重程度顯著相關，分析是由于TIM-4水平升高后導致T細胞比例失衡，進而促進炎癥反應。

HBD家族有HBD1～6六個成員，是機體固有免疫中的重要分子，HBD2是最早被發現的防御素，主要表達于支氣管和肺部，具有免疫調節作用［15-16］。惠曉君等［17］研究發現，支氣管肺部發育不良患兒血清中HBD2表達高于健康兒童，且血清HBD2水平與肺發育標志物具有相關性。李光等［18］研究表明，HBD2在細菌感染性肺炎患者中表達升高，且與患者免疫功能有關。王軍等［19］進行的研究也表明，血清HBD2水平與社區獲得性肺炎患者癥狀持續時間、住院時間等有關。

3.2 TIM-4和HBD2在MPP中的表達及診斷價值

本研究結果顯示，MPP兒童血清TIM-4水平明顯高于健康兒童，且難治性MPP兒童血清TIM-4水平顯著高于普通MPP兒童，提示TIM-4可能影響著MPP的發生，且與疾病嚴重程度有關。此外，多因素分析結果顯示血清TIM-4是發生難治性MPP的獨立危險因素，且進一步ROC分析結果顯示，血清TIM-4診斷難治性MPP的AUC為0.845，靈敏度為69.77%，特異度為85.86%，提示血清TIM-4水平對難治性MPP具有一定的診斷價值。

本研究中健康組兒童血清HBD2表達水平顯著低于研究組兒童，且普通MPP兒童血清HBD2表達水平低于難治性MPP兒童，推測HBD2影響MPP的發生和進展。多因素Logistic分析結果表明，血清HBD2水平是影響難治性MPP發生的獨立危險因素，進一步采用ROC分析血清HBD2對難治性MPP的診斷價值發現，血清HBD2診斷難治性MPP的AUC為0.815，靈敏度和特異度也較高，表明血清HBD2對難治性MPP具有較高的診斷價值，進一步分析比較發現，血清TIM-4和HBD2聯合診斷的AUC（0.908）顯著高于單獨診斷的AUC，提示二者聯合診斷的診斷價值更高，臨床上可通過檢測MPP患兒血清TIM-4和HBD2表達水平，判斷難治性MPP的發生與否，以及時調整治療方案，提高患兒預后。

此外，本研究進行的多因素Logistic回歸分析顯示，發熱時間、中性粒細胞百分比、反復呼吸道感染和肺外并發癥均是影響難治性MPP發生的因素，臨床上應同時關注患兒這些血檢指標及臨床癥狀，采取合理治療措施。

綜上所述，血清TIM-4及HBD2在MPP兒童中表達升高，且二者水平對難治性MPP具有一定診斷價值。但本研究目前納入的樣本量較少，可能會在一定程度上影響結果的準確性，此外，TIM-4和HBD2兩個基因之間是否存在靶向作用也未可知，TIM-4和HBD2影響MPP發生發展的具體作用靶點仍需后續進一步研究。

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［專業責任編輯：史瑞明］

［中文編輯：牛"惠；英文編輯：李曉雪］