酶免法和膠體金法對丙肝抗體的檢測結果比較分析

【摘要】目的：對比酶聯(lián)免疫吸附法（酶免法）和膠體金法檢測丙肝抗體的價值。方法：選擇2023年8月—2023年12月919例參與檢驗的病例，對研究對象進行血液樣本采集。對所采集的血樣均分別進行酶免法檢測和膠體金法檢測，以丙肝病毒核酸檢測結果為診斷的金標準，比較不同檢測方式對丙肝抗體的陽性檢出情況，此外比較不同檢測方式的檢測時間及重復采樣情況。結果：金標準證實其中20份為陽性，陽性率為2.18%。酶免法與膠體金法的陽性檢出率分別為95.00%與90.00%，對比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。膠體金法的檢測時間為（8.84±1.21）min，明顯短于酶免法的（31.15±4.26）min，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；膠體金法重復采樣率為0.76%，低于酶免法的2.50%，對比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論：對于丙肝抗體檢測，應用酶免法與膠體金法的陽性檢出率均較高，但膠體金法的檢測速度快，重復采樣率低，因此可作為大規(guī)模篩查丙肝的首選方法。

【關鍵詞】丙肝抗體；酶免法；膠體金法

Comparative analysis of enzyme immunoassay and colloidal gold method for detecting hepatitis C antibodies

WANG Shanshan， MA Yanwei

Department of Laboratory Medicine，Beilin District Disease Prevention Center， Xi’an City， Xi’an， Shaanxi 710001， China

【Abstract】Objective：To compare the value of enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and colloidal gold method in detecting hepatitis C antibodies.Methods：919 test cases were selected from August2023 to December 2023，and blood samples were collected from the study subjects.For the collected blood samples，enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and colloidal gold method were used for detection.The results of hepatitis C virus nucleic acid testing were used as the gold standard for diagnosis to compare the positive detection of hepatitis C antibodies using different detection methods.In addition，the detection time and repeated sampling of different detection methods were compared.Results：The gold standard confirmed that 20 of them were positive，with a positive rate of 2.18%.The positive detection rates of enzyme-linked immunosorbent assay and colloidal gold assay were 95.00% and 90.00%，respectively，and there was no statistically significant difference in the comparison （P>0.05）.The detection time of colloidal gold method was （8.84±1.21） min，which was significantly shorter than （31.15±4.26） min of enzyme immunoassay method，and the difference was statistically significant （P<0.05）；The repeated sampling rate of colloidal gold method was 0.76%，which was lower than 2.50% of enzyme immunoassay method，and the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion：For the detection of hepatitis C antibodies，both enzyme immunoassay and colloidal gold method have high positive detection rates.However，colloidal gold method has a fast detection speed and low repeat sampling rate，making it the preferred method for large-scale screening of hepatitis C.

【Key Words】Hepatitis C antibody； Enzyme immunoassay； Colloidal gold method

丙肝是一種因感染丙型肝炎病毒（HCV）導致的以肝臟損害為主的傳染病，急性期的癥狀較輕，一般為疲乏、食欲減退、惡心等，早期檢出率較低。而較高比例的患者可持續(xù)轉變?yōu)槁愿窝祝⑶疫€有一定概率進展為肝硬化以及肝癌[1]。隨著生活水平的提高，人們對自身健康體檢的重視度提高，此外，基于對傳染病的預防干預，對丙肝的篩查也成為體檢的重要項目。在丙肝的診斷中，檢測丙肝抗體是重要的方式，而抗體的檢測方法中，酶聯(lián)免疫吸附法（酶免法）和膠體金法是兩種常見方式[2]。酶免法通過使用特殊的酶標示劑來放大抗原抗體反應的信號，從而提高檢測的靈敏度和特異性，該方式具有方便、靈敏等優(yōu)點[3]。膠體金法則利用膠體金顆粒的特殊光學性質，將抗體或抗原標記在膠體金顆粒上，通過抗原抗體反應形成的復合物在檢測樣本中產生顏色變化，從而實現(xiàn)對目標物質的定性或定量檢測，該方法具有操作簡便、結果直觀、敏感性高等優(yōu)點，特別適用于大規(guī)模篩查和現(xiàn)場檢 測[4]。針對丙肝抗體的檢測，不同方式的應用效果存在爭議，本次研究共納入919份待檢標本，對比分別采取酶免法和膠體金法的檢測結果差異，以供參考借鑒，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2023年8月—2023年12月919例參與檢驗的病例，采集其血液標本進行檢查。患者一般資料如下：男512例，女407例；年齡22～71歲，平均年齡（48.12±3.46）歲。納入標準：患者均在前次檢查未檢出丙肝抗體；具有良好的意識及溝通交流能力。排除標準：合并肝腎等嚴重功能損傷者；惡性腫瘤、血液疾病或自身免疫疾病者；精神疾病及認知障礙者。

1.2 方法

患者的樣本采集，均是安排專業(yè)采血人員按照規(guī)范及無菌原則采血。主要是經靜脈途徑采集4mL血液樣本，置于真空采血管中。將采集的樣本及時送至實驗室進行檢驗，檢驗前血樣置入離心機以3000r/min速度持續(xù)離心10min分離血清，分離后立即檢測，檢測完成后將剩余血清分離，置于-20℃冰箱保存。

酶免法：檢測方式應用來源上海科華生物工程股份有限公司提供的ELISA檢測試劑盒。室溫下將試劑靜置30min取出板條同時設置對照孔，其中陰性2孔、陽性2孔（分別加入100uL陰陽性對照），空白1孔。按微孔板的順序，分別進行試劑樣品編號，將100uL的樣本稀釋液加入相應微孔內，取10uL的待測樣本血清加入至各孔混勻后進行封板，在37℃環(huán)境中持續(xù)溫育60min，在取出后借助洗板機持續(xù)清洗5遍。各孔均加100uL酶結合物混勻，封板，37℃溫育30min，取出后以洗板機持續(xù)清洗5遍。將顯色劑A、B液各50uL加入至各孔混合均勻，在37℃避光環(huán)境下顯色30min，各孔同時加50uL終止液混合均勻，酶標儀波長450/630nm，獲得各孔的OD值。陽性標準：OD值/臨界值≥1.0。

膠體金法：檢測試劑由英科新創(chuàng)（廈門）科技股份有限公司提供，加入分離出的血清10uL滴加至加樣處，滴加2滴（約100uL）樣本稀釋液稀釋，稀釋15min后觀察檢測線、對照線顯色情況。檢測線、對照線分別出現(xiàn)紅色條帶視為陽性；測試區(qū)無紅色條帶，僅對照區(qū)出現(xiàn)紅色條帶視為陰性；對照線未出現(xiàn)紅色條帶則說明試劑失效并需重新檢測。

1.3 觀察指標

陽性檢出率。以丙肝病毒核酸檢測結果為診斷的金標準，對比不同方式檢測丙肝抗體陽性情況。陽性率=陽性例數(shù)/標本數(shù)量×100%。（2）檢測時間和重復采樣。對比不同方式檢測花費的時間，統(tǒng)計不同方法需要重復采樣檢測的例數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料采用（%）表示，進行x2檢驗，計量資料采用（x±s）表示，進行t檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同檢測方式陽性檢出率比較

金標準方式，對于919份樣本，檢出陽性樣本20份，檢出率為2.18%。對于丙肝抗體檢出情況，酶免法與膠體金法的陽性檢出率較高，對比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

2.2 不同檢測方式檢測時間和重復采樣比較

膠體金法檢測時間短于酶免法，重復采樣率低于酶免法，對比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

丙肝是傳染性疾病，人群中普遍易感，感染的人群通常早期無典型癥狀，并且很多感染者也可經體內抗丙肝病毒抗體清除感染源預防疾病。而病毒感染后引起丙肝者，疾病持續(xù)進展則可引起慢性肝炎甚至肝癌，這種比例也很高。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的統(tǒng)計結果顯示，2015年全球大約7100萬人受丙肝病毒感染，且大量慢性感染者可出現(xiàn)肝硬化或者肝癌，而每年死于丙肝及相關肝硬化、肝癌死亡的人數(shù)在40萬以上[5]。基于丙肝的高流行性情況，做好疾病預防工作具有重要意義，而具體預防方式上，進行實驗室檢查是主要的方案。

丙肝抗體檢測是用于篩查和診斷丙肝的重要檢測方法，通過檢測丙肝抗體能夠幫助確定一個人是否曾經感染過HCV。檢測的血液中是否存在針對HCV的抗體。如果結果是陽性，說明曾經感染過HCV，但并不一定意味著目前仍然有活躍的病毒感染。而如果抗體檢測結果為陽性，通常需要進一步的檢測，丙肝病毒核酸檢測，通過進一步的檢測以確定是否存在持續(xù)的病毒感染，這樣可以評估感染是急性還是慢性的，以及病毒的量和類型[6]。對檢測及篩查的結果分析，使得傳染病防控工作人員也能夠更好地了解丙肝的流行情況，有助于制定有效的公共衛(wèi)生策略和預防措施。而在對丙肝抗體的檢測方法上，常用的檢測方式主要包括酶免法和膠體金法兩種。在丙肝抗體酶免法測定中，首先將丙型肝炎病毒抗原固定在固相載體上，然后將待測樣本中的抗體與固定抗原結合。接著加入酶標示劑，使其與結合在固相載體上的抗體結合。最后加入酶的底物，樣本中的抗體如果與固定抗原結合，就會催化底物發(fā)生化學反應，產生顏色或熒光。通過觀察顏色或熒光的強度，可以判斷樣本中是否存在丙型肝炎病毒抗體[7]。丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒（膠體金法）是專門用于檢測人體內的丙型肝炎病毒抗體的診斷工具。該試劑盒基于膠體金技術的原理，通過特定的抗原與抗體反應，實現(xiàn)對丙型肝炎病毒感染的快速、可視化檢測。膠體金法在醫(yī)療衛(wèi)生領域具有廣泛的應用價值，可用于醫(yī)院、診所、實驗室等場所，為醫(yī)生提供快速、準確的診斷依據(jù)，同時也可用于大規(guī)模人群篩查，有助于控制丙型肝炎病毒的傳播[7]。

本次研究中，對比兩種檢測方式丙肝抗體陽性檢出率，不同檢測方法的檢出率對比無差異，說明酶免法和膠體金法陽性檢出率均較高，檢出率基本一致。而在檢測時間上，膠體金法時間更短，且膠體金法檢測重復采樣例數(shù)更少。這說明膠體金法用于丙肝抗體的檢測，檢測方式所需時間短，檢測方式根據(jù)顯色的情況判定結果陽性或陰性，相比酶聯(lián)法得出結果的時間更短，這樣對于大規(guī)模丙肝篩查更有利，因為每例樣本檢測時間短，能夠在短時間獲得具體結果，為丙肝的進一步識別提供參考。而膠體金法較少的重復采樣例數(shù)，也可以避免反復采樣給篩查人員帶來的困擾，使得檢驗人員的滿意度得到提高，這樣也為大規(guī)模的篩查丙肝提供重要幫助，實現(xiàn)對丙肝的有效防范干預。

綜上所述，在對丙肝疾病的診斷上，采取酶免法與膠體金法進行丙肝抗體的檢測，兩種方式對丙肝抗體的陽性檢出率均較高，但相比之下，應用膠體金法檢測花費時間更短，且重復采樣情況也更少，因此若是需進行丙肝大規(guī)模篩查，可選擇膠體金法作為首選檢測方式。

參考文獻

[1] 魏利霞.酶免法和膠體金法檢測丙肝抗體的結果比較[J].現(xiàn)代醫(yī)用影像學，2018，27（4）：1350，1354.

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[3] 武國超.分析化學發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法在丙肝病毒抗體檢測中的價值[J].中國醫(yī)療器械信息，2021，27（11）：155-156.

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[5] 陳劍鋒，常樂，劉虹，等.兩種化學發(fā)光免疫分析試劑用于血液篩查丙肝抗體的檢測性能評價[J].中國輸血雜志，2021，34（2）：123-127.

[6] 靳秀英.酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測丙肝抗體聯(lián)合丙肝核心抗原在丙型肝炎診斷中的作用[J].中國藥物與臨床，2020，20（1）：131-132.

[7] 崔莉，梁亦潔.酶免法和膠體金法檢測丙肝抗體的結果比較[J].糖尿病天地，2019，16（7）：116-117.