丁酸鈉和吲哚-3-丙酸共處理對Caco-2細胞緊密連接以及炎癥因子的影響

摘 要： 本研究以人克隆結腸腺癌Caco-2細胞系為模型，旨在探究丁酸鈉（sodium butyrate， NaB）和吲哚-3-丙酸（indole-3-propionic acid，IPA）共處理對Caco-2細胞緊密連接和炎癥因子的影響。使用0.4 mmol·L-1 NaB和0.1 mmol·L-1 IPA分別和共處理Caco-2細胞24 h，檢測細胞跨膜電阻（TEER）值、細胞緊密連接蛋白表達、炎癥因子的基因表達和細胞上清液中炎癥因子的分泌水平。結果發現，與對照組相比，NaB和IPA共處理組均顯著提高TEER值（Plt;0.01），而NaB和IPA單獨處理組TEER值無顯著變化（Pgt;0.05）。qPCR和蛋白免疫印跡結果表明，與對照組相比，共處理組顯著下調了Claudin-2的mRNA相對表達量（Plt;0.01）；與NaB單獨處理組相比，共處理組顯著上調了Claudin-1的mRNA相對表達量（Plt;0.05），并且極顯著促進了Claudin-1、ZO-1和Occludin蛋白的表達（Plt;0.001）；與IPA單獨處理組相比，共處理組顯著上調了ZO-1的mRNA相對表達量（Plt;0.05），并極顯著提高了Claudin-1和ZO-1蛋白表達量（Plt;0.001）。在炎癥因子方面，與對照組相比，NaB和IPA共處理組顯著下調炎癥因子IL-6、IL-1β、IL-8及TNF-α的mRNA相對表達量（Plt;0.05）。ELISA結果顯示，與對照組相比，共處理極顯著降低了細胞上清液中IL-6、IL-1β、IL-8及TNF-α的分泌量（Plt;0.001）。本研究表明，相比于NaB或IPA單獨處理，NaB和IPA共處理可增加細胞跨膜電阻值，促進細胞間緊密連接蛋白表達并且降低促炎因子的分泌，降低了腸道通透性。綜上，NaB和IPA共處理在增強上皮細胞屏障功能以及降低炎癥反應方面具有更強的作用。

關鍵詞： 丁酸鈉；吲哚-3-丙酸；緊密連接；炎癥因子；Caco-2細胞

中圖分類號：S816

文獻標志碼：A

文章編號：0366-6964（2024）11-5124-11

收稿日期：2024-01-03

基金項目：浙江農林大學科研發展基金項目（2023LFR006）；浙江大學動物分子營養學教育部重點實驗室開放性課題（KLMAN202307）；浙江農林大學國家級大學生創新創業訓練計劃（202310341010，張亞南）

作者簡介：王軻信（2003-），女，甘肅慶陽人，本科生，主要從事動物分子營養研究，E-mail： 2661895207@qq.com

*通信作者：張亞南，主要從事腸道微生物調控與腸道健康研究，E-mail： ynzhang1515@163.com

Effects of Co-Treatment of Sodium Butyrate and Indole-3-Propionic Acid on Tight

Junctions and Inflammatory Cytokines in Caco-2 Cells

WANG" Kexin1， WU" Xian1， GONG" Haizhou3， FANG" Qiaoyu1， LI" Xiangchen1， ZHANG" Yanan1，2*

（1.Zhejiang Provincial Engineering Laboratory for Animal Health Inspection amp; Internet

Technology， Key Laboratory of Applied Technology on Green-Eco-Healthy Animal Husbandry

of Zhejiang Province，

College of Animal Science and Technology， College of Veterinary Medicine， Zhejiang Agricultural

and ForestryA amp; F University， Hangzhou 311300，" China;

2.The Key Laboratory of Molecular Animal Nutrition， Ministry of Education，

College of Animal Science， Zhejiang University， Hangzhou 310058，" China;

3.College of Animal Science and Technology， Yangzhou University， Yangzhou 225009，" China）

Abstract：" This study aims to investigate the effects of co-treatment of sodium butyrate and indole-3-propionic acid on the expression of tight junction-related proteins and inflammatory factors in Caco-2 cells. Caco-2 cells were administrated with 0.4 mmol·L-1 sodium butyrate and 0.1 mmol·L-1 indole-3-propionic acid each and together for 24 h; Then the transmembrane resistance （TEER） value， expression of tight junction related proteins， gene expression and secretion level of inflammatory cytokines were measured. The results showed that， compared with control group， the co-treatment of sodium butyrate and indole-3-propionic acid significantly increased the TEER value in Caco-2 cells （Plt;0.01）， while no significant changes were observed in sodium butyrate or indole-3-propionic group （Pgt;0.05）; In addition， the results by qPCR and Western blot showed that the relative expression of Claudin-2 mRNA was significantly down-regulated in the co-treatment group compared with the control group （Plt;0.01）; Compared with sodium butyrate group， the relative mRNA expression of Claudin-1 was significantly up-regulated in the co-treatment group （Plt;0.05）， and the protein expression of Claudin-1， ZO-1 and Occludin was highly significantly increased in the co-treatment group（Plt;0.001）; Compared with the indole-3-propionic acid group， the relative mRNA expression of ZO-1 was significantly up-regulated in the co-treatment group （Plt;0.05）， and the protein expression of Claudin-1 and ZO-1 was highly significantly increased （Plt;0.001）. For inflammatory cytokines， the relative mRNA expression levels of IL-6， IL-1β， IL-8 and TNF-α were significantly down-regulated in the co-treatment group （Plt;0.05）; Meanwhile， the results of ELISA showed that the co-treatment group highly significantly suppressed the secretion of IL-6， IL-1β， IL-8 and TNF-α in the cell supernatant compared with the control group （Plt;0.001）. In conclusion， compared with sodium butyrate or indole-3-propionic acid， the co-treatment of sodium butyrate and indole-3-propionic acid increased the TEER value， promoted the expression of tight junction proteins， suppressed the secretion of pro-inflammatory cytokines， and reduced intestinal permeability. Overall， these results suggested that the co-treatment of sodium butyrate and indole-3-propionic acid has a stronger role in enhancing intestinal epithelial cell barrier function and inhibiting inflammatory response.

Key words： sodium butyrate; indole-3-propionic acid; tight junction; inflammatory cytokines; Caco-2 cells

*Corresponding author：" ZHANG Yanan， E-mail： ynzhang1515@163.com

腸道上皮細胞作為腸道屏障在抵御病原入侵以及免疫等方面發揮著重要作用，其中緊密連接（tight junction，TJ）在維持腸道屏障完整性方面具有關鍵作用［1］。跨膜蛋白家族（Claudins和Occludins）和膜周蛋白家族（Zonula Occuludens，ZOs）等緊密連接蛋白是緊密連接的重要組成部分。據報道，緊密連接蛋白受損與腸上皮通透性增加有關，導致病原體等有害物質進入腸道引發炎癥反應［2］。因此，維持腸上皮細胞屏障完整性在保護動物機體腸道健康方面至關重要。

大量研究表明，腸道菌群代謝產物可作為信號分子在改善腸道通透性、增強腸道屏障功能中發揮重要作用［3］。腸道菌群主要通過發酵日糧中未消化的碳水化合物和蛋白質產生多種代謝產物。其中，短鏈脂肪酸（short-chain fatty acid，SCFA）是菌群發酵未消化碳水化合物的主要代謝產物，主要包括乙酸、丙酸和丁酸，約占總SCFA的95%以上。近年來，丁酸被廣泛證明在維護機體腸道健康中具有積極作用，如促進腸道發育，調節腸道屏障完整性以及減輕腸道炎癥等［4］。研究顯示，斷奶仔豬日糧添加丁酸鈉（sodium butyrate， NaB），提高了Occludin蛋白的表達并降低腸道通透性，從而改善了仔豬斷奶后的腹瀉癥狀［5］。在一項大鼠上的研究表明，口服丁酸鈉降低了小腸黏膜中二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）水平，增加了緊密連接蛋白表達，減輕了腸屏障損傷，并顯著降低了炎癥因子TNF-α水平進而抑制了腸道炎癥［6］。體外研究表明，丁酸可通過調節大鼠小腸上皮細胞IEC-6中Claudin-1、Occludin和ZO-1蛋白水平來增強胃腸道屏障［7］，并且顯著減弱TNF-α/IFN-γ誘導的Caco-2細胞中Claudin-2的上調［8］。另外，腸道微生物群通過發酵蛋白質產生的多種含氮類小分子代謝產物，如吲哚衍生物等，在增強宿主腸道屏障功能，維護腸道健康中也發揮了重要作用［9］。其中，吲哚-3-丙酸（indole-3-propionatic acid， IPA）是菌群代謝色氨酸的主要產物之一，可通過調節緊密連接蛋白的表達來增強腸道屏障功能，并且能夠調節免疫系統從而發揮抗炎及抗氧化作用［10］。Jennis等［11］研究表明，高脂飲食誘導的肥胖小鼠口服IPA顯著降低血清中FITC-葡聚糖水平，改善了腸道通透性。另外，在體外，IPA增強了Caco-2/HT29共培養模型中的屏障完整性和上皮通透性，并且增加了緊密連接蛋白Claudin-1、Occludin和ZO-1水平［12］。

事實上，在動物腸道中，日糧未消化碳水化合物和蛋白質經菌群發酵產生的多種代謝產物共同參與了對腸道健康的調控。然而，先前的大量研究主要探究了NaB、IPA的單獨作用對腸道健康的調節，其共處理對腸道屏障及炎癥因子表達的影響還不清楚。因此，本研究以人克隆結腸腺癌細胞（Caco-2細胞）為模型，主要探究NaB和IPA共處理對Caco-2細胞緊密連接蛋白及炎癥因子的影響，旨在了解NaB和IPA共處理在改善細胞屏障以及抵抗細胞炎癥方面的作用，為從菌群代謝物角度調控腸道健康提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與儀器

Caco-2細胞株由南京農業大學國家動物消化道國際聯合研究中心饋贈。NaB（純度gt;99%）、IPA（純度gt;98%）均購自上海阿拉丁有限公司，DMEM高糖培養基購自武漢普諾賽生命科技有限公司，青霉素-鏈霉素雙抗購自武漢賽維爾生物科技有限公司，CCK-8試劑盒購自美國MCE公司，一抗ZO-1、Claudin-1、Occludin、β-Actin均購自武漢三鷹生物技術有限公司，山羊抗兔和山羊抗小鼠IgG-HRP二抗購自武漢亞科因生物技術有限公司，SYBR Green Pro Taq HS預混型qPCR試劑盒購自湖南艾科瑞生物工程有限公司，人（Human）白細胞介素1β（IL-1β）、人白細胞介素8（IL-8）、人白細胞介素6（IL-6）、人腫瘤壞死因子α（TNF-α）的ELISA檢測試劑盒購自杭州金恒諾生物科技有限公司。

CO2細胞培養箱購自美國Thermo Fisher；倒置顯微鏡購自日本Olympus；高速冷凍離心機購自美國Beckman Coulter；酶標儀、Western blot電泳儀均購自美國Bio-Rad公司；實時熒光定量PCR儀美國Applied Biosystems。

1.2 細胞培養

將凍存Caco-2細胞于37℃水浴鍋中快速解凍，1 000 r·min-1離心4 min，棄上清。加入1 mL完全培養基（89%DMEM高糖培養基+10％胎牛血清FBS+1%雙抗）重懸后接種于25 cm2細胞培養瓶，置于37℃、5％ CO2細胞恒溫培養箱中，當細胞密度達到80％～90％時進行傳代培養，用于后續細胞試驗。

1.3 細胞活力檢測

根據CCK-8試劑盒說明書測定細胞活力。以Caco-2細胞為試驗模型，根據細胞密度計算，將Caco-2接種至96孔板置于CO2細胞培養箱培養。參照Qiu等［13］和Li等［12］的研究，分別設定NaB和IPA處理濃度梯度。使用不含FBS的DMEM培養基將100 mmol·L-1 NaB和IPA貯存液分別稀釋成不同濃度，其中NaB為0、0.1、0.4、0.8、1 mmol·L-1，IPA為0、0.02、0.1、0.5 mmol·L-1。分別添加不同濃度NaB和IPA處理細胞24 h，之后更換新的DMEM培養基，并向每孔中添加10 μL CCK-8溶液， 培養箱孵育2 h后應用酶標儀檢測在波長為450 nm處各孔的吸光度（OD）值。根據公式計算細胞存活率，細胞存活率=（試驗孔OD值-空白孔OD值）/（對照孔OD值-空白孔OD值）×100%。根據細胞活力篩選相應的NaB和IPA濃度。

1.4 試驗分組

將Caco-2細胞分為4組：對照組、NaB組、IPA組、NaB+IPA組，每組6個重復。將NaB溶于滅菌雙蒸水，配制成100 mmol·L-1的貯存液保存于-20℃；將IPA溶于二甲基亞砜（DMSO），配制成100 mmol·L-1的貯存液，現配現用。根據細胞活力檢測結果，設置NaB的處理濃度為0.4 mmol·L-1，IPA的處理濃度為0.1 mmol·L-1。

1.5 細胞形態觀察

將處于對數期生長良好的Caco-2細胞經過胰酶消化、離心、重懸后制成細胞懸液，接種于6孔板中，放入CO2細胞培養箱培養。采用0.4 mmol·L-1 NaB和0.1 mmol·L-1 IPA處理Caco-2細胞24 h，使用光學倒置顯微鏡觀察細胞形態并拍照。

1.6 細胞跨膜電阻值（TEER）測定

收集生長良好的Caco-2細胞，接種于12孔Transwell板的小室中（膜孔徑0.4 μm，膜面積1.12 cm2），置于細胞培養箱中培養8 d至形成緊密連接的單層細胞（每1 d換1次培養基），隨后將小室中完全培養基更換為含有0.4 mmol·L-1 NaB溶液、0.1 mmol·L-1 IPA溶液及其組合的培養基，每組3個重復。處理24 h后使用細胞電阻儀測定各組細胞的電阻值。每孔選擇3個不同位點進行電阻值測定，取其均值，并計算TEER值。TEER值（Ω·cm2）=（R1-R0）×A，其中R1為測定孔電阻均值（Ω），R0為空白孔電阻值（Ω），A代表膜面積（cm2）。

1.7 實時熒光定量PCR檢測炎癥因子及緊密連接相關基因mRNA表達水平

采用TRIzol試劑提取各組細胞總RNA。使用TRIzol裂解細胞后，收集樣品至1.5 mL離心管，加入200 μL氯仿，渦旋振蕩15 s后室溫靜置3 min，12 000 r·min-1、4℃離心15 min；吸取上清液400 μL并加入等體積的異丙醇混勻，冰上靜置10 min后12 000 r·min-1、4℃離心10 min棄上清；加入1 mL 75%乙醇溶液緩慢顛倒，洗滌沉淀后再次12 000 r·min-1、4℃離心5 min，棄去上清乙醇溶液，自然晾干至白色沉淀變透明，加入20 μL DEPC水溶解沉淀并混勻。測定提取RNA的濃度和純度用于RNA反轉錄。使用反轉錄酶對提取RNA進行反轉錄獲得cDNA用于后續試驗。

以cDNA為模板，檢測相關基因表達量并分析。實時熒光定量PCR反應體系（20 μL）：2×SYBR Green Pro Taq HS Premix 10 μL，上、下游引物各0.4 μL，cDNA模板2 μL，ddH2O補足至20 μL。反應條件：95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共40個循環；熔解曲線分析95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。引物序列見表1，由浙江杭州有康生物科技有限公司合成。

1.8 ELISA檢測細胞上清液中炎癥因子的分泌水平

收集細胞上清液至1.5 mL離心管，2 000 r·min-1、4℃離心20 min，吸取上清液用于后續ELISA試驗。按照ELISA試劑盒檢測說明書的步驟進行操作，測定細胞上清液中炎癥因子IL-6、IL-1β、IL-8和TNF-α分泌水平。

1.9 蛋白免疫印跡檢測緊密連接蛋白的表達水平

采用RIPA裂解細胞并收集蛋白，使用BCA試劑盒測定蛋白濃度。取適量蛋白10% SDS-PAGE凝膠電泳分離，再以濕轉移法將蛋白條帶轉移至PVDF膜上。使用5%脫脂奶粉溶液室溫條件下慢速封閉2 h，隨后棄掉封閉液，加入相應一抗溶液（β-actin、Claudin-1、Occludin、ZO-1），4℃孵育過夜。TBST洗滌條帶5次，每次5 min，加入相應的二抗，室溫搖床孵育1 h，TBST洗滌條帶后進行化學發光顯色觀察條帶。以β-actin為內參對照，Image J軟件測定蛋白條帶灰度值并分析。

1.10 數據統計與分析

利用Microsoft Excel 2019對數據進行初步整理，采用2－ΔΔCT法計算基因的相對表達量，利用SPSS 20.0統計軟件的ANOVA方法分析各組間的差異顯著性，所有數據均用“平均值±標準誤”表示。Plt;0.05為差異有統計學意義，Plt;0.01為顯著統計學差異，Plt;0.001為有極顯著統計學差異。利用Graphpad 10.0軟件繪圖。

2 結 果

2.1 丁酸鈉和吲哚-3-丙酸對Caco-2細胞活力及跨膜電阻的影響

如圖1A所示，與對照組相比，當NaB濃度為0.8和1 mmol·L-1時，Caco-2細胞活力均極顯著降低（Plt;0.001），表明該濃度對細胞生長產生不良影響，但使用低劑量0.4 mmol·L-1 NaB預處理后對細胞活力無顯著影響（Pgt;0.05）。圖1B結果顯示，與對照組相比，不同處理濃度的IPA（0.02、0.1和0.5 mmol·L-1）均顯著提高了Caco-2細胞活力（Plt;0.05），而當IPA濃度為0.1 mmol·L-1時細胞活力最高。因此，本研究選取NaB處理濃度為0.4 mmol·L-1及IPA處理濃度為0.1 mmol·L-1用于后續試驗。

如圖1 C所示，在使用NaB、IPA單獨處理以及NaB和IPA共處理細胞后，與對照組相比，NaB、IPA單獨處理組的TEER值均無顯著變化（Pgt;0.05），而共處理組的細胞TEER值極顯著提高（Plt;0.01）。

2.2 丁酸鈉和吲哚-3-丙酸共處理對細胞形態的影響

通過觀察Caco-2細胞在NaB、IPA單獨處理及共處理后細胞形態的變化發現（圖2），與對照組相比，NaB單獨處理組、IPA單獨處理組以及共處理組細胞呈正常團狀分布，細胞貼壁狀態良好且細胞形態無明顯變化。

2.3 丁酸鈉和吲哚-3-丙酸共處理對Caco-2細胞緊密連接相關基因和蛋白表達的影響

如圖3所示，與對照組相比，共處理組顯著上調了ZO-1、Occludin和Claudin-1等基因的mRNA的相對表達量（Plt;0.01），并顯著下調了Claudin-2的mRNA相對表達量（Plt;0.01）。與NaB處理組相比，共處理組顯著上調了Claudin-1的mRNA相對表達量（Plt;0.05）；與IPA處理組相比，共處理組顯著上調了ZO-1的mRNA相對表達量（Plt;0.05）。

蛋白免疫印跡檢測細胞緊密連接相關蛋白表達結果顯示（圖4），與對照組相比，NaB和IPA共處理后ZO-1、Occludin和Claudin-1蛋白表達水平均極顯著升高（Plt;0.001）。與NaB處理組相比，NaB和IPA共處理極其顯著促進了Claudin-1、ZO-1和Occludin蛋白的表達（Plt;0.001）；與IPA處理組相比，NaB和IPA共處理提高了Occludin蛋白的表達（Plt;0.05），并極顯著提高了Claudin-1和ZO-1蛋白表達量（Plt;0.001）。

2.4 丁酸鈉和吲哚-3-丙酸共處理對Caco-2細胞炎癥因子基因表達和分泌的影響

采用qPCR技術檢測NaB和IPA共處理細胞后炎癥相關基因的mRNA表達，結果如圖5所示，與對照組相比，NaB和IPA共處理下調了炎癥因子IL-1β和TNF-α的mRNA相對表達量（Plt;0.05），并極顯著下調了IL-6和IL-8的mRNA相對表達量（Plt;0.01）。

采用ELISA技術檢測細胞上清液中的炎癥因子分泌水平，如圖6所示，與對照組相比，NaB和IPA共處理極顯著降低了細胞上清液中IL-6、IL-1β、IL-8及TNF-α的分泌量（Plt;0.001）。與NaB組相比，NaB和IPA共處理組極顯著降低了細胞上清液中IL-1β和IL-6的分泌量（Plt;0.01），并極其顯著降低了IL-6的分泌量（Plt;0.001）；而NaB和IPA共處理組與IPA組相比，共處理組細胞上清液中IL-6的分泌量極顯著減少（Plt;0.01），IL-1β和TNF-α顯著減少（Plt;0.05）。

3 討 論

腸道單層上皮細胞形成的選擇性滲透屏障，不僅支持營養吸收和廢物分泌排出，同時防止外界有害物質的進入，而這種滲透屏障形成的關鍵是緊密連接［17］。宿主的腸道微生物通過發酵碳水化合物和氨基酸等產生各種有機小分子代謝產物，可以作為信號分子在調節免疫反應以及腸道屏障方面發揮作用［18］。其中，菌群發酵日糧碳水化合物產生的丁酸以及色氨酸產生的IPA已被大量研究證明在改善宿主腸屏障以及調節炎癥反應中具有重要作用［19-20］。本研究主要以人結腸腺癌Caco-2細胞系為模型，探究NaB與IPA共處理對細胞緊密連接蛋白和炎癥細胞因子分泌的影響。結果顯示，相比于單獨處理，NaB和IPA共處理后，細胞TEER值顯著提高，且顯著增加了細胞緊密連接蛋白的表達，降低了促炎因子的分泌。這一結果暗示兩者共處理效果在維護腸道上皮屏障功能和抑制炎癥反應方面優于NaB或IPA的單獨作用，為合理利用腸道菌群代謝產物調控腸道健康提供了一定的參考價值。

本研究首先使用CCK-8篩選NaB和IPA的濃度范圍，以確定作用于Caco-2細胞的適應濃度。CCK-8結果顯示，低濃度NaB對細胞活力無顯著影響，而高濃度NaB對細胞活力產生抑制作用，該結果與張秋玉等［21］研究結果一致；盡管在正常上皮細胞中，丁酸為細胞提供能量并刺激生長［22］，但有研究顯示在結腸癌細胞系中NaB通過抑制結腸癌細胞的Wnt/β-catenin信號通路，進而抑制結腸癌細胞的增殖［23］。

腸道屏障的完整性對機體健康至關重要，跨膜電阻值（TEER）是表示屏障完整性的重要指標。本研究發現，相較于NaB或IPA單獨使用，二者共處理顯著增加了細胞TEER值，這表明NaB和IPA" 的共處理效應在增強細胞屏障功能上具有更強的作用。緊密連接蛋白在維持腸上皮屏障功能中發揮重要作用［24］。其中，ZO與Occludin、Claudin-1等相互作用形成強交聯，與細胞內信號蛋白共同激活相關通路以維持屏障完整性［25］。而Claudin-2作為一種細胞孔道形成蛋白，在屏障受損的腸上皮組織中高度表達，并且促進炎癥反應［26］。本試驗結果表明，NaB和IPA共處理增加了Occludin、Claudin-1以及ZO-1蛋白表達水平，并下調了Claudin-2的mRNA表達水平。Claudin-2表達降低表明腸上皮細胞間通透性減弱，腸道炎癥反應減輕［27］。進一步說明了NaB和IPA的共處理可降低細胞間通透性，在改善腸上皮細胞屏障完整性方面具有更強的效果。研究顯示，NaB通過激活AMPK通路抑制MLCK表達，降低MLC2磷酸化水平，從而發揮促進緊密連接重組的作用［28］。IPA作為腸道細胞中芳香烴受體（AHR）重要配體，可通過激活AHR信號通路在改善腸道通透性中發揮作用［10］。因此，NaB和IPA共處理對細胞緊密連接的增強可能是協同激活相關通路所引起的，但還有待進一步的探究。

NaB可通過抑制NF-κB的激活，抑制炎癥反應并減少促炎因子TNF-α、IL-6等產生［29］。色氨酸代謝物也已在實驗性結腸炎或炎癥性腸?。↖BD）患者中被發現具有免疫調節活性［30］。研究發現，吲哚通過激活孕烷X受體（PXR），由TLR4/NF-κB通路調節腸屏障功能以及炎癥反應［31］。本研究顯示，NaB、IPA單獨處理能夠下調IL-6、IL-1β、IL-8等促炎因子mRNA相對表達量，而二者共處理對于下調炎癥因子基因表達的效果與NaB或IPA單獨作用無顯著差異。ELISA結果表明，NaB和IPA共處理相較于二者單獨處理，能顯著減少IL-6、IL-1β、TNF-α等炎癥因子的分泌量。這可能是由于NaB和IPA共處理對細胞間緊密連接的增強作用降低了細胞旁通透性。TNF-α、IFN-γ和白細胞介素能夠導致細胞間緊密連接受損［32］。一項在Caco-2/PBMC共培養模型的研究表明，NaB直接抑制活化免疫細胞PBMC的炎癥反應，降低局部炎癥來減少屏障破壞，并對TNF-α、IFN-γ和IL-1β等細胞因子介導的屏障破壞具有直接保護作用［33］。因此，NaB和IPA共處理可能通過改善細胞間的通透性，顯著降低炎癥因子的分泌量，并且效果優于NaB或IPA單獨作用。

4 結 論

綜上，NaB和IPA共處理可增加腸上皮細胞緊密連接相關蛋白的表達并抑制促炎因子的分泌，有助于改善腸道屏障功能，且相比于NaB或IPA單獨作用，共處理效果更優。

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（編輯 范子娟）