眉縣某豬場豬圓環病毒病與豬偽狂犬病免疫抗體檢測與分析

摘 要：為協助當地動物防疫站和動物衛生監督所對眉縣某豬場豬圓環病毒?。≒CVD）和豬偽狂犬病（PR）免疫效果評價與監督檢查，采集了該場624份血清樣品（其中：哺乳仔豬168份，保育豬169份，后備豬144份，種公豬13份，母豬130份），采用間接ELISA抗體檢測。結果顯示，豬圓環病毒2型疫苗免疫抗體陽性率在81.66%～95.24%之間，平均為86.70%；豬偽狂犬病基因缺失苗免疫抗體陽性率在94.64%～100.00%之間，平均為98.24%。說明該豬場豬圓環病毒病和豬偽狂犬病免疫抗體陽性合格率均達到了國家有關動物疫病免疫計劃規定的要求，免疫整體效果較為理想，但仍應定期抽檢疫苗質量，持續優化免疫程序。

關鍵詞：豬圓環病毒?。回i偽狂犬??；免疫抗體；檢測；分析

中圖分類號：S858" 文獻標識碼：A" 文章編號：0488-5368（2024）11-0085-4

收稿日期：2024-05-22 修回日期：2024-06-21

基金項目：楊凌職業技術學院產學研基地提升項目（項目編號：JD24-01）；楊凌職業技術學院產學研基地建設項目（項目編號：YZJD028）；楊凌示范區科技計劃項目（項目編號：NY-28）。

第一作者簡介：閆紅軍（1974-），男，獸醫碩士，副教授，主要從事生豬健康養殖教學與應用技術集成示范推廣工作。

Detection and Analysis of Porcine Circovirus Disease and Pseudorabies Immune Antibody in a Pig Farm in Meixian County

YAN Hongjun WANG Bosen

（1. Yangling Vocational and Technical College， Yangling， Shaanxi 712100， China;

2. Meixian Animal Husbandry and Veterinary Technology Extension Station， Meixian， Shaanxi 722300， China）

Abstract：" In order to assist the local Animal Epidemic Prevention Station and the Animal Health Supervision Station in evaluating and supervising the immune efficacy of Porcine Circovirus Disease （PCVD） and Porcine Pseudorabies （PR） in a pig farm in Meixian County， 624 serum samples were collected. These included 168 lactating piglets， 169 nursery pigs， 144 reserve pigs， 13 breeding boars" and 130 sows. The samples were tested using indirect ELISA antibody detection. The results showed that the antibody positivity rate for the Porcine Circovirus Type 2 （PCV2） vaccine ranged from 81.66% to 95.24%， with an average of 86.70%. The antibody positivity rate for the gene-deleted Porcine Pseudorabies vaccine ranged from 94.64% to 100.00%， with an average of 98.24%. These results indicate that the immune antibody positivity rate for both PCVD and PR in the pig farm meet the standards set by the National Animal Disease Immunization Plan of china， and the overall immunization effect is satisfactory. However， it is recommended that vaccine quality be checked regularly， and that the immunization protocol be continuously optimized.

Key words： Porcine circovirus disease;Porcine pseudorabies;Immune antibodies; Detection; Analysis

畜牧業確保了國內食物供應穩定和安全，對增加農牧民收入、促進農牧區經濟發展和共同富裕具有重要意義，是建設農業強國的重要一環。生豬養殖是畜牧業的主要組成部分，也是畜牧業的主導產業。據國家統計局數據，2023年末我國生豬存欄43 422萬頭，全年生豬出欄72 662萬頭［1］。由于飼養數量、飼養密度在不斷加大，不同地區、不同豬場之間頻繁引種，斷奶仔豬、育肥豬在公司與農戶之間不斷流動，導致疫病病種多、病原復雜、流行范圍廣、防控難度大，生產中常見的疫病有非洲豬瘟（African swine fever，ASF）、豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）、豬圓環病毒?。≒orcine circovirus disease，PCVD）、豬偽狂犬?。≒orcine pseudorabies，PR）等，這些疫病在豬群中混合感染，臨床上一般無有效治療方法，給我國生豬產業發展造成了上百億元的經濟損失［2］。

PCV、PRV可感染各個年齡段的豬，引發免疫抑制，誘發其他疫病發生，生產中主要采取注射疫苗來預防。為協助當地動物防疫站和動物衛生監督所對眉縣某豬場疫病免疫監督檢查與豬群健康狀況評價，本研究采取查閱豬場近3年的疫病防控資料、座談交流等方式調研豬場主要疫病的流行特點，重點對豬群PCV2、PRV等病毒的免疫抗體水平進行實驗室檢測，綜合分析、評價該豬場豬群健康狀況，為豬場生物安全風險識別、防控措施優化提供了詳實的參考資料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 2023年10月1日至11月30日，通過前腔靜脈隨機采集哺乳仔豬、保育豬、后備豬的全血3 mL，通過耳靜脈隨機采集種公豬、母豬的全血5 mL，存于抗凝試管按常規方法制備血清，送陜西省動物疫病防控工程技術研究中心（楊凌職業技術學院動物疫病檢測中心）。共制備血清樣本624份，其中哺乳仔豬168份（3日齡40份、10日齡53份，20日齡75份），保育豬169份（35日齡90份，55日齡79份），后備豬144份，種公豬13份，母豬130份（配種前母豬45份，妊娠40 d母豬50份，妊娠90 d母豬35份）。血樣覆蓋豬場不同生理階段豬群頭數的10%，對每份血樣均進行編號標記，詳細記錄血樣來源信息和背景資料，保存于－20 ℃的冰箱，待檢。

1.1.2 主要儀器 酶標儀（美國 BIO-RAD），移液器（2.5 μL，10 μL，20 μL，200 μL，1 000 μL ），白黃藍3種槍頭及槍頭盒，恒溫培養箱，冰箱（容聲）；溫箱（上海一恒科技有限公司 DK-80型），烘干機，超凈工作臺等。

1.1.3 試劑盒 豬圓環病毒病抗體檢測試劑盒為武漢科前動物生物制品有限責任公司生產的ELISA抗體檢測試劑盒；豬偽狂犬病抗體檢測試劑盒為北京愛德士元亨生物科技有限公司生產的ELISA抗體檢測試劑盒。試劑盒由生產廠家直接供貨，均在有效期內，置4 ℃冰箱保存。

1.2 方法

采用間接ELISA抗體檢測試劑盒對豬圓環病毒病、豬偽狂犬病的疫苗免疫抗體水平進行檢測。試驗操作與結果判定嚴格按照試劑盒的使用說明書進行。

2 結果

2.1 豬圓環病毒2型滅活疫苗免疫抗體檢測結果

檢測結果顯示，該場豬群豬圓環病毒病免疫抗體陽性率在81.66%～95.24%之間（見表1），平均陽性率為86.70%，抗體水平與整齊度良好。哺乳仔豬的免疫抗體陽性率為95.24%，在檢測的豬群中最高；其次是公豬、基礎母豬和后備豬，抗體陽性率分別為92.31%、85.38%和83.33%；保育豬的陽性率為81.66%，在檢測的豬群中最低。

2.2 豬偽狂犬病gE基因缺失滅活疫苗免疫抗體檢測結果

豬偽狂犬病gE基因缺失滅活疫苗抗體檢測結果顯示，不同生理階段豬群免疫抗體陽性率在94.64%～100.00%之間（見表2），平均陽性率為98.24%，免疫效果很好。后備豬、基礎母豬、公豬的免疫抗體陽性率均達到100.00%；保育豬和哺乳仔豬的抗體陽性率分別為98.82%和94.64%。

3 討論

3.1 豬圓環病毒病是一種破壞豬免疫系統的傳染性疾病

該病病原毒性溫和，能與豬共生共存。PCV對外界的抵抗力較強。耐酸，即使在pH低于2的條件下也能存活，對氯仿不敏感。PCV可抗高溫，56 ℃經1 h或75 ℃經15 min才能將其滅活。PCV能在PK-15和干細胞上增殖。PCV病毒可長期持續污染PK-15細胞，但不致細胞病變?？诒墙佑|是本病傳播的主要途徑，感染豬可經鼻液、唾液、尿液、糞便等向外界排出病毒，不同日齡豬混合飼養、長途運輸等應激因素可促進病情加重。豬在感染這一病毒后，免疫系統往往會受到損傷，可導致豬群嚴重的免疫抑制，易繼發或并發其他傳染病導致大量死亡。研究表明，PCV是最小的單股DNA病毒，可在哺乳動物細胞中自我復制，目前已鑒定出4種基因型，1974年Tischer等在豬腎細胞中發現PCV1；1998年在患有斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS）的病豬中發現PCV2；2016年Palinski R等從患病母豬及流產胎兒體內首次檢出PCV3；2019年Zhang H H等在患病豬中發現PCV4。其中，PCV2流行范圍廣、流行率高，給世界各國養豬業造成的經濟損失最大。PCV2主要侵害8～13周齡豬，可引起斷奶仔豬多系統衰竭綜合征， 也會侵害豬的淋巴系統，造成免疫抑制，感染豬表現進行性消瘦、皮膚蒼白、黃疸、呼吸困難、生長性能降低、淋巴結腫大和繁殖障礙等癥狀。豬圓環病毒2型感染在我國豬群中呈常在性，臨床上單獨感染豬圓環病毒2型的豬場較少見，通常與豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬細小病毒等混合感染。自2007年起，PCV2商業疫苗得到廣泛使用，使得由PCV2感染引起的經濟損失明顯降低。從本次檢測的結果來看，該豬場各階段豬群的豬圓環病毒免疫抗體陽性率均在80%以上，可以判斷這個場的圓環病毒流行情況不是非常嚴重，疫苗免疫效果較為理想，但是，工作中仍應進一步加強生物安全管控，常態化監測，持續優化免疫方案，規范引種，加強飼養管理，防止外部輸入。

3.2 該場保育豬、后備豬圓環病毒疫苗抗體陽性合格率較低

雖然未發病，但存在隱性感染的可能性。早發現、早預防、早控制病毒最有效的措施是選用高效、經濟、穩定的檢測方法。臨床上最常用的生物學檢測方法是常規PCR和熒光定量PCR。為了提高豬圓環病毒的檢測效率，揚州大學獸醫學院、江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協同創新中心陳南華教授研究團隊率先建立了可同時區分PCV1、PCV2、PCV3、PCV４的四重熒光定量PCR方法。受客觀條件限制，本研究采用間接ELISA抗體檢測，該試劑盒不能有效區分是疫苗產生的抗體還是野毒感染產生的抗體，因此，生產中應該結合當地疫病流行情況、臨床癥狀、免疫方案與熒光定量PCR等實驗室診斷方法綜合分析，方可將該疫病造成的損失控制在最低水平。

3.3 偽狂犬病病毒對外界的抵抗力較強

偽狂犬病病毒屬于皰疹病毒科、ａ-皰疹病毒亞科、豬皰疹病毒屬，該病毒對外界的抵抗力較強，在pH 2.0～13.5的范圍內相對穩定；在土壤中可存活5～6周；在干草和稻草中可存活15～40 d；4 ℃環境下可存活20周，在污染的豬舍能存活1個多月；在肉中可存活5周以上。一般消毒藥對本病毒都有效，常用消毒劑有石炭酸、福爾馬林、過氧乙酸、2%氫氧化鈉、磷酸三鈉碘、氯制劑等。本病在豬場的傳播主要是通過接觸傳播和垂直傳播，各種日齡的豬均可感染，但隨著日齡的增加，感染豬的發病率和病死率逐漸下降，斷奶后的仔豬多不發病但可長期帶毒、排毒。本病臨床表現為體溫升高，初生仔豬磨牙、流涎出現神經癥狀，因呼吸困難呈犬坐式，后軀麻痹，前進或后退、轉動，有的轉圈或側臥做劃水運動；后備母豬和空懷母豬表現為不發情，即使發情，返情率高；公豬精液質量下降，長期帶毒、散毒。

3.4 豬偽狂犬病是一種急性、烈性、高致死性傳染病，目前尚無治療辦法

自20世紀80年代起，我國采取疫苗免疫較好地控制了豬偽狂犬病的發病率。經免疫的母豬可在一年內，特異性地將PRV抗體傳給子代。母源免疫能阻止病毒感染新生仔豬，保護仔豬對抗臨床疾病，但同時母源抗體也能抑制仔豬對疫苗免疫產生反應。本次調研的豬場使用的疫苗是豬偽狂犬病gE基因缺失滅活疫苗，該疫苗對國內流行毒株具有很好的敏感性，感染后10 d即可以檢測到感染抗體。由于豬偽狂犬病病毒可感染各種年齡段的豬，可使豬隱性帶毒。對存在該病的豬場可結合定期檢測進行凈化，具體措施有：①淘汰感染偽狂犬病野毒的豬群，用豬偽狂犬病疫苗給公豬、基礎母豬免疫接種1個月后，采集樣品進行病原分離與抗體檢測，淘汰陽性豬，然后過3個月時間再進行一次抗體檢測，淘汰陽性豬群，這樣就可以得到一個豬偽狂犬病陰性種豬群。②在做好種豬凈化的同時，必須加強豬場的衛生消毒工作，強化對哺乳仔豬、保育豬的免疫接種，否則哺乳仔豬、保育豬容易感染發病或帶毒?；疾∝i如果轉群進入后備舍，就會將病毒帶入后備豬群，從而造成惡性循環。

4 結論

（1）對眉縣某豬場豬圓環病毒病、豬偽狂犬病免疫抗體的檢測結果表明，豬圓環病毒2型疫苗免疫抗體陽性率在81.66%～95.24%之間，平均為86.70%；豬偽狂犬病gE基因缺失滅活疫苗免疫抗體陽性率為在94.64%～100.00%之間，平均為98.24%，說明該豬場對圓環病毒病、偽狂犬病免疫效果較為理想，但應采用更科學的檢測方法核實是否存在隱性感染。

（2）通過實驗室檢測可判斷選用的疫苗質量以及制訂的免疫程序是否符合要求。本次圓環病毒病、偽狂犬病疫苗免疫抗體檢測結果說明，該豬場豬圓環病毒病和豬偽狂犬病免疫抗體陽性合格率均達到了國家規定的要求，所以該場選擇的疫苗、疫苗的保存方法、制訂的免疫程序等做法值得其他豬場借鑒。

（3）健康的生產體系一定要做到防止病原微生物進入豬場，防止病原微生物在豬場內傳播，防止病原微生物傳播到其它豬場。開展常態化免疫技術培訓與免疫效果評價工作對提高疾病控制至關重要。

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