非小細胞肺癌術后自身抗體水平及臨床意義

[摘要]"目的"探討非小細胞肺癌（non-small"cell"lung"cancer，NSCLC）患者手術前后腫瘤相關7項自身抗體（tumor-associated"autoantibody，TAAB），包括腫瘤蛋白53（tumor"protein"53，p53）、蛋白基因產物9.5（protein"gene"product"9."5，PGP9.5）、性別決定基因家族"2（SRY-box"containing"gene"2，SOX2）、G抗原7（G"antigen"7"ATP-dependent"RNA"helicase，GAGE7）、ATP結合RNA"解螺旋酶（ATP-dependent"RNA"helicase，GBU4-5）、人黑色素瘤抗原"A1（melanoma"antigen"A1，MAGE"A1）、腫瘤/睪丸抗原（cancer/testis"antigen，CAGE）表達水平動態變化的臨床意義。方法"選取2019"年1"月至2022"年8"月在寧波市醫療中心李惠利醫院胸外科接受手術治療的NSCLC患者41"例，采用酶聯免疫吸附法（enzyme"linked"immunosorbent"assay，ELISA）檢測患者血清7"項TAAB表達水平。結果"鱗癌組PGP9.5手術前后表達水平均明顯高于腺癌組（Plt;0.05），腺癌組GAGE7手術前后表達水平均明顯高于鱗癌組（Plt;0.05）。鱗癌組術后1周GBU4-5表達水平明顯高于腺癌組（Z=-2.095，P=0.036）。腺癌組內，術后1周GBU4-5（P=0.027）、CAGE（P=0.042）表達水平較術前明顯下降。術后6個月PGP9.5（P=0.004）、GAGE7（Plt;0.001）、GBU4-5（P=0.014）表達水平較術前明顯下降。鱗癌組中，術后1周表達水平差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。術后6個月SOX2（P=0.011）表達水平較術前明顯下降。與術前比較，術后1周GBU4-5表達水平明顯下降（P=0.009）。術后6個月PGP9.5（P=0.003）、GAGE7（P=0.001）、GBU4-5（P=0.013）表達水平明顯下降。結論"手術干預可降低NSCLC患者7"項TAAB表達水平，手術治療前后監測7"項TAAB有助于NSCLC患者手術療效的評估和術后病情進展的預測。

[關鍵詞]"非小細胞肺癌；腫瘤相關自身抗體；肺切除術；預測

[中圖分類號]"R734.2""""""[文獻標識碼]"A""""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.23.004

Postoperative"autoantibody"levels"and"clinical"significance"in"non-small"cell"lung"cancer

WANG"Zeyi，"MU"Yinyu，"Xie"Fuyi

Laboratory"Department，"Ningbo"Medical"Center，"Li"Huili"Hospital，"Ningbo"315040，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"investigate"the"clinical"significance"of"dynamic"changes"in"the"expression"levels"of"tumor"associated"autoantibody"（TAAB），"including"tumor"protein"53"（p53），"protein"gene"product"9.5"（PGP9.5），"SRY-box"containing"gene"2"（SOX2），"G"antigennbsp;7"ATP-dependent"RNA"helicase"（GAGE7），"ATP-dependent"RNA"helicase"（GBU4-5），"melanoma"antigen"A1"（MAGE"A1），"cancer/testis"antigen"（CAGE）"in"non-small"cell"lung"cancer"（NSCLC）"patients"before"and"after"surgery."Methods"Forty-one"patients"with"NSCLC"who"underwent"surgical"treatment"at"the"Department"of"Thoracic"Surgery"of"Li"Huili"Hospital，"Ningbo"Medical"Center，"were"selected"from"January"2019"to"August"2022."Enzyme"linked"immunosorbent"assay"（ELISA）"was"used"to"detect"the"expression"levels"of"seven"TAAB"markers"in"the"serum"of"41"NSCLC"patients"undergoing"surgical"treatment."Results"The"expression"levels"of"PGP9.5"were"found"to"be"significantly"higher"in"the"squamous"cancer"group"than"in"the"adenocarcinoma"group"（Plt;0.05），"while"the"expression"levels"of"GAGE7"were"found"to"be"significantly"higher"in"the"adenocarcinoma"group"than"in"the"squamous"cancer"group"（Plt;0.05）."The"expression"level"of"GBU4-5"was"found"to"be"significantly"higher"in"the"squamous"carcinoma"group"than"in"the"adenocarcinoma"group"at"one"week"after"surgery"（Z=-2.095，"P=0.036）."Within"the"adenocarcinoma"group，"the"expression"levels"of"GBU4-5"（P=0.027）"and"CAGE"（P=0.042）"were"found"to"be"significantly"lower"at"one"week"after"surgery"compared"with"those"before"surgery."The"expression"levels"of"PGP9.5"（P=0.004），"GAGE7"（Plt;0.001），"and"GBU4-5"（P=0.014）"were"found"to"have"decreased"significantly"at"six"months"postoperatively"in"comparison"to"their"preoperative"levels."In"the"squamous"cancer"group，"no"statistically"significant"differences"were"observed"in"the"expression"levels"at"one"week"after"surgery."The"expression"level"of"SOX2"（P=0.011）"exhibited"a"statistically"significant"decrease"at"six"months"postoperatively"in"comparison"to"the"preoperative"levels."Similarly，"the"expression"level"of"GBU4-5"was"found"to"be"significantly"decreased"at"one"week"postoperatively"in"comparison"to"the"preoperative"levels"（P=0.009）."The"expression"levels"of"PGP9.5"（P=0.003），"GAGE7"（P=0.001），"and"GBU4-5"（P=0.013）"were"found"to"have"decreased"significantly"at"six"months"postoperatively."Conclusion"Surgical"intervention"can"reduce"the"expression"level"of"7"TAABs"in"NSCLC"patients."Monitoring"7"TAABs"before"and"after"surgical"treatment"is"helpful"to"predict"the"surgical"efficacy"and"postoperative"disease"progression"of"NSCLC"patients.

[Key"words]"Non-small"cell"lung"cancer;"Tumor-associated"autoantibodies;"Pneumonectomy;"Forecasting

隨著非小細胞肺癌（non-small"cell"lung"cancer，NSCLC）早期診斷率的提高和治療方式的發展，早期NSCLC患者的生存質量得到有效提高[1]。肺葉切除術合并系統性淋巴結清掃是目前NSCLC的主要治療方式，術后主要通過測定肺功能、是否出現腫瘤相關并發癥和復發等宏觀指標判斷手術療效，導致干預過晚、治療不及時等情況影響預后[2-4]。因此，如何對手術患者進行及時有效的療效評估，已成為現在NSCLC治療的關鍵。隨著對于腫瘤細胞產生和釋放的腫瘤相關抗原的研究發現，在NSCLC早期出現的過表達等異常表現能通過免疫系統的放大作用產生大量腫瘤相關自身抗體（tumor-associated"autoantibody，TAAB），并先于臨床癥狀和影像學變化出現[5-8]。由于這些TAAB具有記憶免疫效應、半衰期長、檢測方便等特點，有望成為評價手術治療前后機體免疫功能的檢測指標，實現對于手術療效的評估和癌癥進展的預測。已有研究認為腫瘤相關TAAB的產生與腫瘤患者免疫系統的高反應性和免疫監測能力相關，p53、PGP9.5、SOX2、GBU4-5、MAGE"A1、CAGE和GAGE7的聯合檢測在肺癌的早期診斷和晚期肺癌免疫治療療效預測等方面受到關注[9]。目前關于腫瘤切除前后機體內TAAB的變化情況的研究國內外報道較少。本研究旨在通過監測手術治療前后血清腫瘤7"項TAAB的表達水平，發現其變化規律并探討其臨床意義，為臨床治療方式的選擇提供一定的理論依據，并指導圍術期的患者管理及術后康復方案的制定。

1""資料與方法

1.1""一般資料

回顧性收集2019"年1月至2022年8月在寧波市醫療中心李惠利醫院接受手術治療的NSCLC患者41"例。其中，男26例，女15"例，年齡46～79歲。15例患者在氣管插管全身麻醉下行胸腔鏡下肺葉（段）切除術+淋巴結活檢術。26例患者行胸腔鏡下肺葉（段）切除術+淋巴結活檢術后聯合輔助治療。納入標準：①符合美國國家綜合癌癥網絡（National"Comprehensive"Cancer"Network，NCCN）指南[10]關于NSCLC的診斷標準；②術前7"項TAAB均為陽性；③術前未進行新輔助治療；④接受根治性肺切除術及淋巴結清掃。排除標準：①非新發性NSCLC者；②肺轉移瘤者；③TNM分期不明確者；④合并心、肝、腎等功能異常和已明確NSCLC有遠處轉移，不適合手術治療者。最終隨訪日期截止2023"年12"月17"日。本研究已通過筆者醫院倫理委員會審核批準（倫理審批號：KY2022PJ031）。

1.2""儀器與試劑

酶標儀（ST360，上?？迫A生物科技有限公司）；ELISA法試劑盒檢測（批號：20211201，中國杭州凱保羅），實驗過程嚴格按照試劑及儀器制造商的說明書進行。

1.3""標本處理及檢測方法

采集5ml靜脈血置于促凝管（浙江拱東醫療器械有限公司），以1370"g離心10"min。血清分離后8"h內檢測7"項TAAB表達水平，若未能立即檢測時，需將血清置于-20℃環境下冷凍保存，于1"周內檢測。

1.4""統計學方法

采用SPSS"25.0統計學軟件對數據進行處理分析，不符合正態分布的數據以中位數（四分位間距）[M（Q1，Q3）]表示，組間比較采用非參數檢驗，治療前后比較采用配對秩和檢驗。以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2""結果

2.1""NSCLC患者臨床特征

術后病理結果顯示，腺癌25"例（61.0%），鱗癌16"例（39.0%）。原位癌1例（2.4%），Ⅰ期29例（70.8%），Ⅱ期5例（12.2%），Ⅲ期5例（12.2%），Ⅳ期1例（2.4%）。

2.2""不同病理類型與7"項TAAB動態表達水平

鱗癌組PGP9.5術前、術后1周、術后6個月表達水平均明顯高于腺癌組（Plt;0.05）。腺癌組GAGE7術前、術后1周、術后6個月表達水平均明顯高于鱗癌組（Plt;0.05）。鱗癌組術后1周GBU4-5表達水平明顯高于腺癌組（Z=-2.095，P=0.036）。在腺癌組中，與術前比較，術后1周GBU4-5（P=0.027）、CAGE（P=0.042）表達水平明顯下降。術后6個月PGP9.5（P=0.004）、GAGE7（Plt;0.001）、GBU4-5（P=0.014）表達水平明顯下降。在鱗癌組中，與術前比較，術后1周表達水平差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。術后6個月SOX2表達水平明顯下降，差異有統計學意義（P=0.011）。見表1。

2.3""NSCLC患者TAAB表達水平比較

41"例患者術前與術后1"周、術后6個月比較7項TAAB水平，與術前比較，術后1周GBU4-5表達水平明顯下降（P=0.009）。術后6個月PGP9.5（P=0.003）、GAGE7（P=0.001）、GBU4-5（P=0.013）表達水平明顯下降，差異有統計學意義（Plt;0.05），見表2。

3""討論

隨著早期診斷率的提高和手術方式的發展，NSCLC的發展有所控制，但肺癌的診斷率和病死率仍高居癌癥相關死亡的首位，患者術后存在復發轉移或出現第二原發腫瘤的風險[12-13]。本研究通過監測早期NSCLC患者手術前后血清7項TAAB表達水平，探討其對早期NSCLC患者手術治療反應的評估價值。

本研究鱗癌組手術前后PGP9.5的表達水平始終高于腺癌組。癌癥的發生可能與過度表達的PGP9.5增加了細胞蛋白的去泛素化有關。相關研究證實，PGP9.5高表達更容易在鱗狀細胞癌中出現[14-15]。這與本研究結果基本相符。本研究腺癌組手術前后血清GAGE7表達水平均高于鱗癌組。相關研究發現GAGE7在多種腺癌中高表達且與不良預后相關，但與食管鱗癌結局無相關性[16-17]。這提示GAGE7可作為肺腺癌的標志物GBU4-5有望成為NSCLC治療靶點[18]。Zhang等[19]研究顯示，GBU4-5在肺腺癌組中呈現明顯高表達，與鱗癌組比較，差異有統計學意義。本研究術前GBU4-5表達水平在不同病理類型中差異無統計學意義，這與Wang等[20]的結果相一致。可能是由于NSCLC病理的異質性導致的。而在本研究中，術后1周鱗癌組GBU4-5表達水平明顯高于腺癌組。這可能與不同病理類型對手術治療的反應不同有關，也可能與患者對于手術治療的個體性差異有關。本研究這幾個指標在不同病理類型的NSCLC患者手術前后表達情況也存在明顯變化，說明在不同病理類型NSCLC患者中PGP9.5、GBU4-5和GAGE7的表達對手術治療反應存在預測價值，尤其在腺癌中評估表現良好。

李曼[5]等的研究表明，NSCLC細胞的增殖分化促進了腫瘤7項TAAB的合成和釋放，因此術前血清腫瘤7項TAAB的高表達水平可能與肺癌的發生密切相關。手術治療較好地去除了原發病灶，降低了機體免疫反應，因此術后TAAB表達水平通常下降[22]。這與本研究監測手術前后血清PGP9.5、GAGE7、GBU4-5的變化規律較為一致。但本研究血清p53、SOX2、MAGE"A1、CAGE表達水平的變化差異無統計學意義，這與靳海龍等[21]研究結果一致，原因可能是在手術治療過程中，相關抗原的間斷性入血持續，相關抗原編碼基因的差異化變異導致不同構型抗原的出現影響機體的免疫應答等。此外，Tan等[23]在關于自身抗體對腫瘤患者抗PD1治療反應的相關研究中發現，在肺腺泡狀軟組織肉瘤（alveolar"soft"part"sarcoma，ASPS）患者中，p53對抗PD1的治療反應存在良好相關性。而在NSCLC患者中，治療前后不同時間點的SIX2蛋白濃度在抗PD1無應答者表達水平明顯高于應答者。也有研究表明，癌胚抗原（carcinoembryonic"antigen，"CEA）和細胞角蛋白19片段（cytokeratin"19"fragment，CYFRA21-1）對晚期NSCLC患者全身性治療的預測表現良好[24]。而本研究通過監測術后1周和術后6個月PGP9.5、GAGE7、GBU4-5表達水平發現，這幾個指標的動態變化差異有統計學意義，這可能與部分患者機體免疫功能狀態逐步恢復及術后進一步的輔助治療相關。因此，7項TAAB可作為潛在的早期NSCLC患者手術治療療效評估的標志物，能夠為患者爭取到更早、更安全治療。由于是本研究是受試者數量相對較少的回顧性分析，患者來自同一單位，因此可能存在選擇偏移。后續可采用多中心大樣本量的前瞻性研究驗證。

綜上所述，通過監測手術前后7"項TAAB表達水平，可以判斷手術治療后病情是否進展，為治療方案的選擇和NSCLC患者預后提供有效證據，具有一定的臨床應用價值。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2024–01–09）

（修回日期：2024–05–31）

（上接第11頁）

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（收稿日期：2023–12–01）

（修回日期：2024–06–11）